ベンチトップ インキュベーターの前向き研究
胚の倍数率に対するシングルステップ培養培地のリフレッシュ効果の調査：ベンチトップインキュベーターの前向き研究
胚盤胞段階までの長期胚培養と異数性（PGT-A）の着床前遺伝子検査の使用により、最高の発生可能性を備えた胚の特定と選択が可能になり、体外受精（IVF）の臨床結果が改善されました。 胚盤胞段階まで培養するための多数のタイプの市販のヒト胚培養培地が存在しますが、胚盤胞の発生および異数性形成に対する培養条件の影響はよく理解されていません。
培養条件は、体外受精サイクルの成功にとって非常に重要です。プロセスに関与する要因の多くは、シーケンシャル培養培地とシングル ステップ培養培地の使用、加湿インキュベーターと乾燥インキュベーターの使用、当日の培地のリフレッシュなど、広く研究されています。 3 対 5 日目まで連続培養。 しかし、7 日目までの培養が必要な PGT-A を用いた兄弟卵母細胞設計における正倍数率への影響を調査した研究はありませんでした。
調査の概要
状態
条件
詳細な説明
倒立顕微鏡を使用して胚に注釈を付けることにより、培養条件を乱す必要がある開発の 3 日目に胚を等級分けすることは日常的な慣行と見なされます。 PGT-A に必要な栄養外胚葉生検を行うには、7 日目まで培養を延長する必要があります。 CO2 の濃度によって制御される pH や、溶液 1 リットルあたりの溶質の濃度である浸透圧など、胚の発生に影響を与える可能性のある培養因子がいくつかあります。 高温 (37°C) にさらされたために溶液が蒸発すると、濃度が変化し、胚の発育が損なわれる可能性があります。
蒸発速度を下げるために、培養液滴はミネラルオイルの層で覆われています。 加湿インキュベーターも蒸発率を下げることができます。 ただし、ベンチトップ インキュベーターなどのドライ インキュベーターの場合、これらの 7 日間の培養中に胚を新しい培養皿に移動することにより、少なくとも 1 回培養液を補充することが解決策になる場合があります。
シングルステップ培地は胚の発育を 5 日間連続して培養できるように設計されていますが、一部の研究所では胚を 7 日間培養しているため、発育の 3 日目または 5 日目に培地をリフレッシュすることは避けられません。
これらの慣行のどれが胚発生のためのより良い環境を提供するかについての具体的な証拠はありません. さらに、染色体エラー (異数性/モザイク性) に対する 3 日目または 5 日目のシングルステップ培地交換の影響を調べた研究はありませんでした。 研究者は、この将来の同胞卵母細胞の研究を目指して、培養培地のリフレッシュのどの日 (3 日目または 5 日目) が正倍数体胚盤胞のより高い率を提供するかを調査します。
研究の種類
入学 (予想される)
連絡先と場所
研究連絡先
- 名前：SHIERYL DIGMA, RN
- 電話番号：1061 97126528000
- メール：shieryl.digma@artfertilityclinics.com
研究場所
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Abu Dhabi、アラブ首長国連邦、60202
- 募集
- ART Fertility Clinics LLC
-
コンタクト：
- Barbara Lawrenz, PhD
- 電話番号：1108 +97102 652 8000
- メール：shieryl.digma@artfertilityclinics.com
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コンタクト：
- Shieryl Digma, RN
- 電話番号：1122 +97102 652 8000
- メール：shieryl.digma@artfertilityclinics.com
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主任研究者：
- Upma Pathak Shanker, Specialist
-
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参加基準
適格基準
就学可能な年齢
健康ボランティアの受け入れ
受講資格のある性別
サンプリング方法
調査対象母集団
説明
包含基準:
- 卵巣刺激中に卵胞が8～10個以上ある患者
- 成熟卵母細胞が8個以上ある患者
- PGT-A
- ICSI
- BMI<35
- 18～40歳
- 新鮮または凍結した射精精子 >10,000 運動精子
- 卵巣刺激
- ベンチトップインキュベーターで培養された胚
除外基準:
- PGT-M または PGT-SR
- 胚停止の前歴
- 子宮内膜症
- 卵巣予備能に影響を与える可能性のある以前の治療歴（付属器手術、化学療法、放射線…）
研究計画
研究はどのように設計されていますか？
デザインの詳細
コホートと介入
グループ/コホート |
介入・治療 |
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3日目のリフレッシュメント
すべての MII 卵母細胞は、最終的な卵母細胞成熟トリガーの 39 ～ 41 時間後に ICSI によって授精されます。 ICSIに続いて、卵母細胞は2つの別々のチャンバーに配置された2〜4枚の培養皿で培養されます。 メディア リフレッシュメント: 1 日目の Zygote スコアリング (18-20hpi)。 培地の補充は、授精後 67 ～ 69 時間 (3 日目) に行われます。 胚のグレーディングは2日目から5日目まで行われません。 培養液の準備とリフレッシュ: 30μL の培養液 (Global total LP を LifeGlobal GPS Dish (EGPS-010) の 8 つのウェルの各ウェルに添加し、中央の 3 滴に 50μL を添加します。 料理は CO2 インキュベーターで一晩平衡化されます。 胚のグレーディングは、メディアのリフレッシュの前に行う必要があります。 メディアのリフレッシュ中のインキュベーターからのタイムアウトは、3 日目と 5 日目に評価されます。 1 人のオペレーターが ICSI を実行する必要があります。 複数のオペレーターの場合、各オペレーターの注入された卵母細胞は 2 つのグループ間で分割されます。 |
すべての MII 卵母細胞は、最終的な卵母細胞成熟トリガーの 39 ～ 41 時間後に ICSI によって授精されます。
1日目のZygoteスコア（18-20hpi）。
培地の補充は、授精後 67 ～ 69 時間 (3 日目) に行われます。
LifeGlobal GPS Dish (EGPS-010) の 8 ウェルの各ウェルに 30 μL の培地 (Global total LP を添加し、中央に 50 μL を 3 滴加えます。 料理は CO2 インキュベーターで一晩平衡化されます。
メディアのリフレッシュの前に行う必要があります。
グループ 2 では、胚盤胞生検の前に胚のグレーディングとメディアの更新が行われます。
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5日目のリフレッシュメント
すべての MII 卵母細胞は、最終的な卵母細胞成熟トリガーの 39 ～ 41 時間後に ICSI によって授精されます。 ICSIに続いて、卵母細胞は2つの別々のチャンバーに配置された2〜4枚の培養皿で培養されます。 メディアのリフレッシュメントと胚のグレーディングのタイミング: 1 日目の Zygote スコアリング (18-20hpi)。 胚のグレーディングと培養液の補充は、授精後 114 ～ 118 時間 (5 日目) に行われます。 培養液の準備とリフレッシュ: 30μL の培養液 (Global total LP を LifeGlobal GPS Dish (EGPS-010) の 8 つのウェルの各ウェルに添加し、中央の 3 滴に 50μL を添加します。 料理は CO2 インキュベーターで一晩平衡化されます。 胚のグレーディングとメディアのリフレッシュは、胚盤胞生検の前に行われます。 メディアのリフレッシュ中のインキュベーターからのタイムアウトは、3 日目と 5 日目に評価されます。 1 人のオペレーターが ICSI を実行する必要があります。 複数のオペレーターの場合、各オペレーターの注入された卵母細胞は 2 つのグループ間で分割されます。 |
すべての MII 卵母細胞は、最終的な卵母細胞成熟トリガーの 39 ～ 41 時間後に ICSI によって授精されます。
LifeGlobal GPS Dish (EGPS-010) の 8 ウェルの各ウェルに 30 μL の培地 (Global total LP を添加し、中央に 50 μL を 3 滴加えます。 料理は CO2 インキュベーターで一晩平衡化されます。
メディアのリフレッシュの前に行う必要があります。
グループ 2 では、胚盤胞生検の前に胚のグレーディングとメディアの更新が行われます。
1日目のZygoteスコア（18-20hpi）。
培地の補充は、授精後 114 ～ 118 時間 (5 日目) に行われます。
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この研究は何を測定していますか？
主要な結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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胚盤胞倍数性
時間枠：3日
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発生から5、6または7日目に胚盤胞から採取した栄養外胚葉細胞の生検後に決定
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3日
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二次結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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サイクル倍数率
時間枠：1日
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グループ内の正倍数体胚の数を 2PN の総数で割った値 (両方のグループ)
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1日
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モザイク頻度
時間枠：1日
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異数体胚におけるモザイクエラーの割合として定義されます。
これには、完全モザイク胚または 1 つ以上のモザイク染色体異常を伴う異数性胚が含まれます。
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1日
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生検時の胚盤胞の質
時間枠：1日
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胚盤胞の拡大段階、内部細胞塊のグレード、および栄養外胚葉のグレードに基づく 4 つの胚品質スコア (EQ1、2、3、4)。
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1日
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爆発率
時間枠：5日間
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ICSIの114～118時間後に胚が空洞を形成する（＝胞胚形成する）能力。
胚盤胞の数を 2PN の数で割った値
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5日間
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協力者と研究者
捜査官
- 主任研究者：IBRAHIM ELKHATIB、ART Fertility Clinics LLC
出版物と役立つリンク
一般刊行物
- Bavister BD, Poole KA. Duration and temperature of culture medium equilibration affect frequency of blastocyst development. Reprod Biomed Online. 2005 Jan;10(1):124-9. doi: 10.1016/s1472-6483(10)60813-9.
- Costa-Borges N, Belles M, Meseguer M, Galliano D, Ballesteros A, Calderon G. Blastocyst development in single medium with or without renewal on day 3: a prospective cohort study on sibling donor oocytes in a time-lapse incubator. Fertil Steril. 2016 Mar;105(3):707-713. doi: 10.1016/j.fertnstert.2015.11.038. Epub 2015 Dec 12.
- Krasnopolskaya KV, Beketova AN, Sesina NI, capital ES, Cyrillichinchenko NK, Badalyan GV, Sudarikova NM, Bocharova TV, Zakharchenko EO. The effect of short-term disturbance of day 3 embryo culture on the development and implantation. Gynecol Endocrinol. 2019;35(sup1):1-4. doi: 10.1080/09513590.2019.1632083.
- Pena F, Davalos R, Rechkemmer A, Ascenzo A, Gonzales M. Embryo development until blastocyst stage with and without renewal of single medium on day 3. JBRA Assist Reprod. 2018 Mar 1;22(1):49-51. doi: 10.5935/1518-0557.20180012.
研究記録日
主要日程の研究
研究開始 (実際)
一次修了 (予想される)
研究の完了 (予想される)
試験登録日
最初に提出
QC基準を満たした最初の提出物
最初の投稿 (実際)
学習記録の更新
投稿された最後の更新 (実際)
QC基準を満たした最後の更新が送信されました
最終確認日
詳しくは
この情報は、Web サイト clinicaltrials.gov から変更なしで直接取得したものです。研究の詳細を変更、削除、または更新するリクエストがある場合は、register@clinicaltrials.gov。 までご連絡ください。 clinicaltrials.gov に変更が加えられるとすぐに、ウェブサイトでも自動的に更新されます。