胃がんマーカーの検出とそのキット開発 (GCMDKD)

1 早期胃がんマーカーの予備スクリーニングと抗体検証

(1) 患者および健常者の募集とサンプル調製: このプロジェクトでは、4 バッチの被験者、3 バッチの健常者、早期胃癌および進行胃癌グループが必要であり、各グループの平均は 30 例です。 もう一方のバッチ（第 2 バッチ）は健康な人で、慢性萎縮性胃炎 30 例、早期胃がん、慢性萎縮性胃炎 30 例です。 進行胃癌群は各100例、肝癌、結腸直腸癌、乳癌は各20例であった。 被験者から得られた血清および血漿サンプルは、潜在的な胃癌腫瘍マーカーをスクリーニングし、確立された胃癌腫瘍マーカー診断モデルおよび検査キットの実用性を検証するために使用されます。

1. 胃癌患者の募集：早期胃癌患者（T1、T2）と進行胃癌患者（T3、T4）のそれぞれ30例を選択する。 胃がんの病期分類は、UICC (国際対がん連合) TNM 病期分類の第 8 版に基づいています。 被験者は、インフォームド コンセント フォームの要件に従ってスクリーニングされました。
2. 健常者の募集：基礎疾患のないボランティア30名を健常対照群として選出。 被験者は、インフォームド コンセント フォームの要件に従ってスクリーニングされました。
3. サンプルの準備: 患者および健康なコントロールの全血サンプルを取得するための静脈内コレクション。 各被験者のサンプル要件は、600ul の血清と血漿です。

(2) 胃癌の潜在的腫瘍マーカーに対する初めての抗体チップスクリーニング 胃癌の潜在的なタンパク質マーカーをスクリーニングするために、レイバイオテックのハイスループット定量的抗体チップ (AAH-BLG-2000) を使用して、胃癌の 640 を測定しました。被験者の最初のバッチ（早期胃癌、進行胃癌、および健常対照者それぞれ30人）。 ヒトタンパク質の一種。 差分タンパク質を事前に選別し、バイオインフォマティクス分析を実施し、最後に研究に関連する差分発現タンパク質を選別します。

2胃がん腫瘍マーカー検証用カスタマイズ抗体チップ 胃がん診断の腫瘍マーカー候補をさらに検証するため、前段階でスクリーニングした微分タンパク質を抗体チップ用にカスタマイズしました。 潜在的なバイオ マーカーの検証のための被験者の血清サンプル (2 番目のバッチ) を使用します。 テスト結果によると、特異性の低いタンパク質は破棄され、特異性の高いタンパク質が保持されます。

3. 診断モデルの確立 回帰分析を用いて、複数の鑑別タンパク質を組み合わせて比較し、定量分析を行い、標準曲線を作成し、特異性の高い鑑別タンパク質の診断モデルを確立し、さらに特異性の高い鑑別タンパク質診断モデルの実用性を測定します。

4 キットの開発 様々な高特異性腫瘍マーカーに対する捕捉抗体としてモノクローナル抗体が作製され、最終的に胃がん診断キットが確立され、臨床現場に普及しました。

胃がん診断キットの確立と性能測定。

1. 上記の研究成果を基に、胃がん診断キット、品質管理基準物質を確立し、関連基準を策定する。
2. 精密検査: 自作の品質管理標準物質を高、中、低の 3 つの濃度に希釈し、それぞれ 3 つの複製穴を開け、テストを 10 回繰り返し、各品質管理の平均値、標準偏差、およびテスト値を計算します。参考商品。 変動係数 (CV) 値。
3. 感度検出：ゼロ参照標準（特異差タンパク質）を試料とし、20回測定した蛍光値の平均値に標準偏差の2倍を加えた値を検量線の式に代入し、最小検出量を算出します。
4. 安定性試験：自作キットを2グループに分け、4℃冷凍庫で6ヶ月、37℃で7日間保存。 キットの物理的外観、用量反応曲線の直線性、精度、感度、および最小検出量などの指標が測定され、具体的な検出方法は上記の手順 (2) および (3) と同じです。
5. 他の胃がん検査法との比較：自作検査キットを用いて早期胃がん血清30例、進行胃がん血清30例、健常人血清30例を検出し、検査結果を分析。
6. キットのプロモーションと最適化。 このキットを使用している患者の中から無作為抽出を行い、早期臨床胃がんの診断率とそれに対応する予後を観察し、再診の結果を分析します。 再訪問の結果に応じて、キットのパフォーマンスを最適化するために対応する実験を続けます。たとえば、精度、感度などを向上させます。