A gyomorrák markerek kimutatása és készletének kidolgozása (GCMDKD)

1 Korai gyomorrák markerek előzetes szűrése és antitestellenőrzés

(1) Betegek és egészséges emberek toborzása és minta-előkészítése: Ehhez a projekthez négy alanycsoportra, három egészséges embercsoportra, korai gyomorrákra és előrehaladott gyomorrákra vonatkozó csoportokra van szükség, átlagosan 30 esettel minden csoportban. A másik tétel (a második tétel) egészséges emberek, és 30 esetben krónikus atrófiás gyomorhurut, korai gyomorrák és 30 krónikus atrófiás gyomorhurut. Az előrehaladott gyomorrák csoport mindegyikében 100, a májrákban, a vastagbélrákban és a mellrákban pedig 20 eset volt. Az alanyoktól nyert szérum- és plazmamintákat a potenciális gyomorrák-daganat-markerek szűrésére, a megállapított gyomorrák-daganatmarker-diagnosztikai modellek és tesztkészletek alkalmazhatóságának ellenőrzésére használják.

1. Gyomorrákos betegek toborzása: 30 korai gyomorrákos (T1, T2) és előrehaladott gyomorrákos beteget (T3, T4) választanak ki. A gyomorrák stádiumbesorolása az UICC (International Union Against Cancer) TNM stádiummeghatározásának nyolcadik kiadásán alapul. Az alanyokat a tájékozott beleegyező nyilatkozat követelményei szerint szűrtük.
2. Egészséges emberek toborzása: 30 alapbetegség nélküli önkéntest választunk egészséges kontrollcsoportnak. Az alanyokat a tájékozott beleegyező nyilatkozat követelményei szerint szűrtük.
3. Mintaelőkészítés: intravénás gyűjtés a betegek és az egészséges kontrollok teljes vérmintáinak vételéhez. A mintaszükséglet minden alanynál 600 ul szérum és plazma.

(2) Antitest chip szűrés a gyomorrák potenciális tumormarkereire első alkalommal A gyomorrák potenciális fehérjemarkereinek szűrése érdekében a Raybiotech nagy áteresztőképességű kvantitatív antitest chipjét (AAH-BLG-2000) használták a 640 mérésére az alanyok első tétele (korai gyomorrák, előrehaladott gyomorrák és egészséges kontrollok mindegyike 30). Egyfajta emberi fehérje. Előzetesen szűrjük ki a differenciális fehérjéket, végezzünk bioinformatikai elemzéseket, végül szűrjük ki a kutatás szempontjából releváns, differenciálisan expresszált fehérjéket.

2 Testreszabott antitest chip a gyomorrák tumormarkereinek ellenőrzésére A gyomorrák diagnosztizálásához szükséges tumormarkerjelöltek további ellenőrzése érdekében az előző szakaszban szűrt differenciálfehérjéket antitest chipekre szabtuk. Használjon alany szérummintákat (második tétel) a lehetséges biomarkerek ellenőrzéséhez. A vizsgálati eredmények szerint a gyengén specifikus fehérjéket kidobjuk, a specifikusabb fehérjéket megtartjuk.

3. Diagnosztikai modell felállítása Regressziós analízis segítségével többféle differenciálfehérje kombinálható és összehasonlítható, kvantitatív analízis, standard görbe felállítása, diagnosztikus modell felállítása nagy specifikus differenciálfehérjékre, valamint a rendkívül specifikus differenciálfehérje diagnosztikai modell alkalmazhatóságának további mérése.

4 Kit fejlesztés Monoklonális antitesteket állítottak elő különböző nagy specifikus tumormarkerek befogó antitestjeként, végül egy gyomorrák diagnosztikai készletet hoztak létre és népszerűsítettek a klinikai gyakorlatban.

Gyomorrák diagnosztikai készlet létrehozása és teljesítménymérése.

1. A fenti kutatási eredmények alapján gyomorrák diagnosztikai készleteket, minőség-ellenőrzési referenciaanyagokat hoz létre, és megfelelő szabványokat fogalmaz meg.
2. Precíziós tesztelés: Hígítsa fel a saját készítésű minőség-ellenőrzési referenciaanyagokat 3 magas, közepes és alacsony koncentrációra, mindegyik 3 ismétlődő lyukkal, ismételje meg a tesztet 10-szer, és számítsa ki az egyes minőségellenőrzések átlagát, szórását és vizsgálati értékét. referencia termék. Variációs együttható (CV) értéke.
3. Érzékenység kimutatása: Vegyük a nulla referencia standardot (fajlagos különbség fehérjét) mintának, és a mért fluoreszcencia átlagértékét 20-szor plusz 2-szeres szórással helyettesítsük a standard görbe egyenletével a minimális kimutatási térfogat kiszámításához.
4. Stabilitási teszt: Osszuk két csoportra a saját készítésű készleteket, és tegyük 4℃-os fagyasztóba 6 hónapra és 37℃-os 7 napra. Mérik a készlet fizikai megjelenését, a dózis-válasz görbe linearitását, pontosságát, érzékenységét, minimális detektálási térfogatát és egyéb mutatókat, és a konkrét kimutatási módszer megegyezik a fenti (2) és (3) lépésekkel.
5. Összehasonlítás más gyomorrák kimutatási módszerekkel: használjon saját készítésű kimutatási készleteket 30 korai gyomorrák szérumminták, 30 előrehaladott gyomorrák szérumminták és 30 egészséges emberi szérumminták kimutatására, és a vizsgálati eredmények elemzésére.
6. A készlet népszerűsítése és optimalizálása. Véletlenszerű mintavételt végeznek a készletet használó betegek körében, hogy megfigyeljék a korai klinikai gyomorrák diagnózisának arányát és a megfelelő prognózist, és elemezzék a visszatérő látogatás eredményeit. Az újbóli látogatás eredményei szerint folytassa a megfelelő kísérletek elvégzését a készlet teljesítményének optimalizálása érdekében, például: javítsa a pontosságát, érzékenységét stb.