Gastric Cancer Marker Detektion och dess utveckling av kit (GCMDKD)

1 Preliminär screening av tidiga markörer för magcancer och antikroppsverifiering

(1) Rekrytering och provberedning av patienter och friska personer: Detta projekt kräver fyra grupper av försökspersoner, tre grupper av friska personer, tidig magcancer och avancerad magcancergrupper, med i genomsnitt 30 fall i varje grupp. Den andra satsen (den andra satsen) är friska människor och 30 fall av kronisk atrofisk gastrit, tidig magcancer och 30 fall av kronisk atrofisk gastrit. Det fanns 100 fall i var och en av den avancerade magcancergruppen och 20 fall i var och en av levercancer, kolorektal cancer och bröstcancer. Serum- och plasmaprover som erhållits från försökspersoner används för att screena potentiella tumörmarkörer för magcancer, verifiera genomförbarheten av etablerade diagnostiska modeller för magcancertumörmarkörer och testkit.

1. Rekrytering av magcancerpatienter: 30 fall av tidiga magcancerpatienter (T1, T2) och avancerade magcancerpatienter (T3, T4) väljs ut respektive. Stadieindelningen av magcancer är baserad på den åttonde upplagan av UICC (International Union Against Cancer) TNM-stadieindelning. Försökspersonerna screenades enligt kraven i formuläret för informerat samtycke.
2. Rekrytering av friska personer: 30 frivilliga utan underliggande sjukdomar väljs ut som frisk kontrollgrupp. Försökspersonerna screenades enligt kraven i formuläret för informerat samtycke.
3. Provberedning: intravenös insamling för att få helblodsprover från patienter och friska kontroller. Provbehovet för varje försöksperson är 600 ul serum och plasma.

(2) Antikroppschipscreening för potentiella tumörmarkörer för magcancer för första gången För att screena för potentiella proteinmarkörer för magcancer användes Raybiotechs kvantitativa antikroppschip med hög genomströmning (AAH-BLG-2000) för att mäta 640 i första omgången av försökspersoner (tidig magcancer, avancerad magcancer och friska kontroller var 30). Typ av mänskligt protein. Preliminärt sålla bort differentiella proteiner, genomföra bioinformatikanalys och slutligen screena differentiellt uttryckta proteiner som är relevanta för forskningen.

2Anpassat antikroppschip för att verifiera tumörmarkörer för magcancer För att ytterligare verifiera kandidattumörmarkörerna för diagnos av magcancer, skräddarsyddes de differentialproteiner som screenades i det föregående steget för antikroppschips. Använd aktuella serumprover (andra satsen) för potentiell biomarkörverifiering. Enligt testresultaten kasseras de dåligt specifika proteinerna, och de mer specifika proteinerna behålls.

3. Etablering av diagnostisk modell Använd regressionsanalys för att kombinera och jämföra flera differentialproteiner, utföra kvantitativ analys, upprätta en standardkurva, upprätta en diagnostisk modell för mycket specifika differentialproteiner och ytterligare mäta genomförbarheten av den mycket specifika differentialproteindiagnostiska modellen.

4 Kitutveckling Monoklonala antikroppar producerades som infångningsantikroppar för olika högspecifika tumörmarkörer, och slutligen etablerades ett kit för diagnostik av magcancer och främjades i klinisk praxis.

Etablering och prestationsmätning av diagnostiskt kit för magcancer.

1. Upprätta diagnostiska kit för magcancer, kvalitetskontroll referensmaterial och formulera relevanta standarder på grundval av ovanstående forskningsresultat.
2. Precisionstestning: Späd ut de egentillverkade referensmaterialen för kvalitetskontroll till 3 koncentrationer av hög, medium och låg, var och en med 3 replikathål, upprepa testet 10 gånger och beräkna medelvärdet, standardavvikelsen och testvärdet för varje kvalitetskontroll referensprodukt. Variationskoefficient (CV) värde.
3. Känslighetsdetektion: Ta referensstandarden noll (specifikt skillnadsprotein) som provet och ersätt medelvärdet av fluorescensvärdet uppmätt 20 gånger plus 2 gånger standardavvikelsen i standardkurvans ekvation för att beräkna den lägsta detektionsvolymen.
4. Stabilitetstest: Dela upp de egentillverkade kiten i två grupper och placera dem i en 4℃ frys i 6 månader och 37℃ i 7 dagar. Satsens fysiska utseende, linjäriteten hos dos-responskurvan, noggrannhet, känslighet och minsta detektionsvolym Och andra indikatorer mäts, och den specifika detektionsmetoden är densamma som ovanstående steg (2) och (3).
5. Jämförelse med andra metoder för att upptäcka magcancer: använd självförberedda detektionssatser för att upptäcka 30 fall av tidiga magcancerserumprover, 30 fall av avancerade magcancerserumprover och 30 friska humana serumprover och analysera testresultaten.
6. Marknadsföring och optimering av kitet. Slumpmässig provtagning utförs bland patienter som använder detta kit för att observera diagnosfrekvensen av tidig klinisk magcancer och motsvarande prognos, och analysera resultaten av återbesöket. Enligt resultaten av återbesöket, fortsätt att utföra motsvarande experiment för att optimera satsens prestanda, till exempel: förbättra dess noggrannhet, känslighet och så vidare.