Detectie van maagkankermarkers en de ontwikkeling ervan (GCMDKD)

1 Voorlopige screening van vroege maagkankermarkers en verificatie van antilichamen

(1) Werving en monstervoorbereiding van patiënten en gezonde mensen: dit project vereist vier batches proefpersonen, drie batches gezonde mensen, vroege maagkanker en gevorderde maagkankergroepen, met een gemiddelde van 30 gevallen in elke groep. De andere batch (de tweede batch) is gezonde mensen en 30 gevallen van chronische atrofische gastritis, vroege maagkanker en 30 gevallen van chronische atrofische gastritis. Er waren 100 gevallen in elk van de gevorderde maagkankergroepen en 20 gevallen in elk van leverkanker, colorectale kanker en borstkanker. Serum- en plasmamonsters verkregen van proefpersonen worden gebruikt om potentiële maagkankertumormarkers te screenen, de uitvoerbaarheid van gevestigde diagnostische modellen voor maagkankertumormarkers en testkits te verifiëren.

1. Rekrutering van maagkankerpatiënten: 30 gevallen van respectievelijk vroege maagkankerpatiënten (T1, T2) en gevorderde maagkankerpatiënten (T3, T4) zijn geselecteerd. De stadiëring van maagkanker is gebaseerd op de achtste editie van UICC (International Union Against Cancer) TNM-stadiëring. Onderwerpen werden gescreend volgens de vereisten van het formulier voor geïnformeerde toestemming.
2. Rekrutering van gezonde mensen: 30 vrijwilligers zonder onderliggende ziekten worden geselecteerd als gezonde controlegroep. Onderwerpen werden gescreend volgens de vereisten van het formulier voor geïnformeerde toestemming.
3. Monstervoorbereiding: intraveneuze verzameling om volbloedmonsters van patiënten en gezonde controles te verkrijgen. De monstervereiste voor elk onderwerp is 600 µl serum en plasma.

(2) Antilichaamchipscreening voor het eerst op potentiële tumormarkers van maagkanker Om te screenen op potentiële eiwitmarkers van maagkanker, werd Raybiotech's high-throughput kwantitatieve antilichaamchip (AAH-BLG-2000) gebruikt om 640 te meten in de eerste groep proefpersonen (vroege maagkanker, gevorderde maagkanker en gezonde controles elk 30). Een soort menselijk eiwit. Voorlopig differentiële eiwitten screenen, bioinformatica-analyse uitvoeren en ten slotte differentieel tot expressie gebrachte eiwitten screenen die relevant zijn voor het onderzoek.

2Aangepaste antilichaamchip om tumormarkers maagkanker te verifiëren Om de kandidaat-tumormarkers voor de diagnose maagkanker verder te verifiëren, werden de in de vorige fase gescreende differentiële eiwitten aangepast voor antilichaamchips. Gebruik proefserummonsters (tweede batch) voor potentiële biomarkerverificatie. Volgens de testresultaten worden de slecht specifieke eiwitten weggegooid en blijven de meer specifieke eiwitten behouden.

3. Vaststelling van diagnostisch model Gebruik regressieanalyse om meerdere differentiële eiwitten te combineren en te vergelijken, kwantitatieve analyse uit te voeren, een standaardcurve vast te stellen, een diagnostisch model voor zeer specifieke differentiële eiwitten vast te stellen en de uitvoerbaarheid van het zeer specifieke diagnostische model voor differentiële eiwitten verder te meten.

4 Kitontwikkeling Er werden monoklonale antilichamen geproduceerd als capture-antilichamen voor verschillende hoog-specifieke tumormarkers, en ten slotte werd een diagnosekit voor maagkanker ontwikkeld en gepromoot in de klinische praktijk.

Oprichting en prestatiemeting van een diagnostische kit voor maagkanker.

1. Stel diagnostische kits voor maagkanker op, referentiematerialen voor kwaliteitscontrole en formuleer relevante normen op basis van de bovenstaande onderzoeksresultaten.
2. Precisietesten: verdun de zelfgemaakte kwaliteitscontrolereferentiematerialen tot 3 concentraties van hoog, gemiddeld en laag, elk met 3 herhaalde gaten, herhaal de test 10 keer en bereken het gemiddelde, de standaarddeviatie en de testwaarde van elke kwaliteitscontrole referentieproduct. Variatiecoëfficiënt (CV) waarde.
3. Gevoeligheidsdetectie: neem de nulreferentiestandaard (specifiek verschilproteïne) als monster en vervang de gemiddelde waarde van de fluorescentiewaarde 20 keer gemeten plus 2 keer de standaarddeviatie in de standaardkrommevergelijking om het minimale detectievolume te berekenen.
4. Stabiliteitstest: Verdeel de zelfgemaakte kits in twee groepen en plaats ze in een vriezer van 4℃ gedurende 6 maanden en 37℃ gedurende 7 dagen. Het fysieke uiterlijk van de kit, de lineariteit van de dosis-responscurve, nauwkeurigheid, gevoeligheid en minimaal detectievolume en andere indicatoren worden gemeten, en de specifieke detectiemethode is hetzelfde als de bovenstaande stappen (2) en (3).
5. Vergelijking met andere maagkankerdetectiemethoden: gebruik zelfbereide detectiekits om 30 gevallen van vroege maagkankerserummonsters, 30 gevallen van geavanceerde maagkankerserummonsters en 30 gezonde menselijke serummonsters te detecteren en analyseer de testresultaten.
6. Promotie en optimalisatie van de kit. Willekeurige bemonstering wordt uitgevoerd onder patiënten die deze kit gebruiken om het diagnosepercentage van vroege klinische maagkanker en de bijbehorende prognose te observeren en de resultaten van het nabezoek te analyseren. Ga volgens de resultaten van het tegenbezoek door met het uitvoeren van overeenkomstige experimenten om de prestaties van de kit te optimaliseren, bijvoorbeeld: verbeter de nauwkeurigheid, gevoeligheid, enzovoort.