Detecção de Marcadores de Câncer Gástrico e Desenvolvimento de seu Kit (GCMDKD)

1 Triagem preliminar de marcadores precoces de câncer gástrico e verificação de anticorpos

(1) Recrutamento e preparação de amostras de pacientes e pessoas saudáveis: Este projeto requer quatro lotes de indivíduos, três lotes de pessoas saudáveis, grupos de câncer gástrico precoce e câncer gástrico avançado, com uma média de 30 casos em cada grupo. O outro lote (o segundo lote) é de pessoas saudáveis ​​e 30 casos de gastrite atrófica crônica, câncer gástrico precoce e 30 casos de gastrite atrófica crônica. Houve 100 casos em cada grupo de câncer gástrico avançado e 20 casos em cada um de câncer de fígado, câncer colorretal e câncer de mama. Amostras de soro e plasma obtidas de indivíduos são usadas para rastrear potenciais marcadores tumorais de câncer gástrico, verificar a viabilidade de modelos de diagnóstico de marcadores tumorais de câncer gástrico estabelecidos e kits de teste.

1. Recrutamento de pacientes com câncer gástrico: 30 casos de pacientes com câncer gástrico precoce (T1, T2) e pacientes com câncer gástrico avançado (T3, T4) são selecionados, respectivamente. O estadiamento do câncer gástrico é baseado no estadiamento TNM da oitava edição da UICC (International Union Against Cancer). Os indivíduos foram selecionados de acordo com os requisitos do formulário de consentimento informado.
2. Recrutamento de pessoas saudáveis: 30 voluntários sem doenças subjacentes são selecionados como grupo controle saudável. Os indivíduos foram selecionados de acordo com os requisitos do formulário de consentimento informado.
3. Preparo da amostra: coleta intravenosa para obtenção de amostras de sangue total de pacientes e controles saudáveis. O requisito de amostra para cada indivíduo é de 600ul de soro e plasma.

(2) Triagem de chip de anticorpo para potenciais marcadores tumorais de câncer gástrico pela primeira vez Para rastrear potenciais marcadores de proteína de câncer gástrico, o chip de anticorpo quantitativo de alto rendimento da Raybiotech (AAH-BLG-2000) foi usado para medir 640 no primeiro lote de indivíduos (câncer gástrico precoce, câncer gástrico avançado e controles saudáveis ​​a cada 30). Tipo de proteína humana. Faça uma triagem preliminar de proteínas diferenciais, conduza análises de bioinformática e, finalmente, faça uma triagem de proteínas diferencialmente expressas relevantes para a pesquisa.

2 Chip de anticorpo personalizado para verificar marcadores tumorais de câncer gástrico Para verificar ainda mais os marcadores tumorais candidatos ao diagnóstico de câncer gástrico, as proteínas diferenciais rastreadas na etapa anterior foram personalizadas para chips de anticorpos. Use amostras de soro do indivíduo (segundo lote) para verificação de biomarcador potencial. De acordo com os resultados do teste, as proteínas pouco específicas são descartadas e as proteínas mais específicas são mantidas.

3. Estabelecimento do modelo de diagnóstico Use a análise de regressão para combinar e comparar várias proteínas diferenciais, realizar análises quantitativas, estabelecer uma curva padrão, estabelecer um modelo de diagnóstico para proteínas diferenciais altamente específicas e medir ainda mais a viabilidade do modelo de diagnóstico de proteínas diferenciais altamente específicas.

4 Desenvolvimento do kit Anticorpos monoclonais foram produzidos como anticorpos de captura para vários marcadores tumorais de alta especificidade e, finalmente, um kit de diagnóstico de câncer gástrico foi estabelecido e promovido na prática clínica.

Estabelecimento e medição de desempenho do kit de diagnóstico de câncer gástrico.

1. Estabelecer kits de diagnóstico de câncer gástrico, materiais de referência de controle de qualidade e formular padrões relevantes com base nos resultados da pesquisa acima.
2. Teste de precisão: Dilua os materiais de referência de controle de qualidade feitos por você mesmo em 3 concentrações de alto, médio e baixo, cada um com 3 orifícios replicados, repita o teste 10 vezes e calcule a média, o desvio padrão e o valor de teste de cada controle de qualidade produto de referência. Valor do Coeficiente de Variação (CV).
3. Detecção de sensibilidade: Pegue o padrão de referência zero (proteína de diferença específica) como amostra e substitua o valor médio do valor de fluorescência medido 20 vezes mais 2 vezes o desvio padrão na equação da curva padrão para calcular o volume mínimo de detecção.
4. Teste de estabilidade: Divida os kits caseiros em dois grupos e coloque-os em um freezer de 4 ℃ por 6 meses e 37 ℃ por 7 dias. A aparência física do kit, a linearidade da curva dose-resposta, precisão, sensibilidade e volume mínimo de detecção e outros indicadores são medidos, e o método de detecção específico é o mesmo das etapas (2) e (3) acima.
5. Comparação com outros métodos de detecção de câncer gástrico: use kits de detecção autopreparados para detectar 30 casos de amostras de soro de câncer gástrico precoce, 30 casos de amostras de soro de câncer gástrico avançado e 30 amostras de soro humano saudável e analisar os resultados do teste.
6. Promoção e otimização do kit. A amostragem aleatória é realizada entre os pacientes que usam este kit para observar a taxa de diagnóstico de câncer gástrico clínico precoce e o prognóstico correspondente e analisar os resultados da consulta de retorno. De acordo com os resultados da visita de retorno, continue realizando os experimentos correspondentes para otimizar o desempenho do kit, por exemplo: melhorar sua precisão, sensibilidade e assim por diante.