Wykrywanie markera raka żołądka i opracowanie zestawu (GCMDKD)

1 Wstępne badanie przesiewowe markerów wczesnego raka żołądka i weryfikacja przeciwciał

(1) Rekrutacja i przygotowanie próbek pacjentów i osób zdrowych: Ten projekt wymaga czterech grup pacjentów, trzech grup osób zdrowych, grup wczesnego raka żołądka i zaawansowanego raka żołądka, ze średnią 30 przypadków w każdej grupie. Druga partia (druga partia) to osoby zdrowe i 30 przypadków przewlekłego zanikowego zapalenia błony śluzowej żołądka, wczesnego raka żołądka i 30 przypadków przewlekłego zanikowego zapalenia błony śluzowej żołądka. Było 100 przypadków w każdej grupie z zaawansowanym rakiem żołądka i 20 przypadków w każdej z raków wątroby, raka jelita grubego i raka piersi. Próbki surowicy i osocza uzyskane od pacjentów są wykorzystywane do badań przesiewowych potencjalnych markerów nowotworowych raka żołądka, weryfikacji praktyczności ustalonych modeli diagnostycznych markerów nowotworowych raka żołądka i zestawów testowych.

1. Rekrutacja pacjentów z rakiem żołądka: Wybrano 30 przypadków pacjentów z wczesnym rakiem żołądka (T1, T2) i zaawansowanym rakiem żołądka (T3, T4). Stopień zaawansowania raka żołądka opiera się na ósmej edycji klasyfikacji TNM UICC (International Union Against Cancer). Pacjenci zostali przebadani zgodnie z wymaganiami formularza świadomej zgody.
2. Rekrutacja zdrowych osób: 30 ochotników bez chorób współistniejących wybiera się jako zdrową grupę kontrolną. Pacjenci zostali przebadani zgodnie z wymaganiami formularza świadomej zgody.
3. Przygotowanie próbki: pobranie dożylne w celu uzyskania próbek krwi pełnej pacjentów i zdrowych osób kontrolnych. Wymagana próbka dla każdego pacjenta to 600 ul surowicy i osocza.

(2) Po raz pierwszy badanie przesiewowe chipa przeciwciał pod kątem potencjalnych markerów nowotworowych raka żołądka pierwsza grupa pacjentów (wczesny rak żołądka, zaawansowany rak żołądka i zdrowe grupy kontrolne po 30). Rodzaj ludzkiego białka. Wstępnie odseparuj zróżnicowane białka, przeprowadź analizę bioinformatyczną, a na koniec przeszukaj białka o zróżnicowanej ekspresji istotne dla badań.

2Dostosowany chip przeciwciał do weryfikacji markerów nowotworowych raka żołądka W celu dalszej weryfikacji kandydujących markerów nowotworowych do diagnozy raka żołądka, białka różnicowe przebadane na poprzednim etapie zostały dostosowane do chipów przeciwciał. Użyj próbek surowicy pacjenta (druga partia) do potencjalnej weryfikacji biomarkerów. Zgodnie z wynikami testu, białka o niskiej specyficzności są odrzucane, a białka bardziej specyficzne są zatrzymywane.

3. Ustanowienie modelu diagnostycznego Wykorzystanie analizy regresji do łączenia i porównywania wielu różnicujących białek, przeprowadzania analizy ilościowej, ustalania krzywej wzorcowej, ustalania modelu diagnostycznego dla wysoce specyficznych różnicujących białek i dalszego mierzenia praktyczności wysoce specyficznego zróżnicowanego modelu diagnostycznego białek.

4 Opracowanie zestawu Wyprodukowano przeciwciała monoklonalne jako przeciwciała wychwytujące dla różnych wysoce specyficznych markerów nowotworowych, aw końcu opracowano i promowano w praktyce klinicznej zestaw do diagnozowania raka żołądka.

Założenie i pomiar wydajności zestawu do diagnostyki raka żołądka.

1. Opracować zestawy diagnostyczne raka żołądka, materiały odniesienia do kontroli jakości i sformułować odpowiednie standardy na podstawie powyższych wyników badań.
2. Precyzyjne testowanie: rozcieńcz samodzielnie wykonane materiały odniesienia do kontroli jakości do 3 stężeń wysokiego, średniego i niskiego, każdy z 3 powtórzonymi otworami, powtórz test 10 razy i oblicz średnią, odchylenie standardowe i wartość testu każdej kontroli jakości produkt referencyjny. Wartość współczynnika zmienności (CV).
3. Wykrywanie czułości: Jako próbkę weź zerowy wzorzec odniesienia (specyficzne białko różnicowe) i wstaw średnią wartość zmierzonej wartości fluorescencji 20 razy plus 2 razy odchylenie standardowe do równania krzywej standardowej, aby obliczyć minimalną objętość wykrywania.
4. Test stabilności: Podziel samodzielnie wykonane zestawy na dwie grupy i umieść je w zamrażarce o temperaturze 4 ℃ na 6 miesięcy i 37 ℃ na 7 dni. Fizyczny wygląd zestawu, liniowość krzywej dawka-odpowiedź, dokładność, czułość i minimalna objętość wykrywania Mierzone są inne wskaźniki, a specyficzna metoda wykrywania jest taka sama jak w powyższych krokach (2) i (3).
5. Porównanie z innymi metodami wykrywania raka żołądka: użyj samodzielnie przygotowanych zestawów do wykrywania próbek surowicy 30 przypadków wczesnego raka żołądka, próbek surowicy 30 przypadków zaawansowanego raka żołądka i 30 zdrowych próbek surowicy ludzkiej oraz przeanalizuj wyniki testu.
6. Promocja i optymalizacja zestawu. Wśród pacjentów korzystających z tego zestawu przeprowadza się losowe pobieranie próbek w celu obserwacji wskaźnika rozpoznania wczesnego klinicznego raka żołądka i odpowiadającego mu rokowania oraz analizy wyników wizyty ponownych. Zgodnie z wynikami ponownej wizyty, kontynuuj przeprowadzanie odpowiednich eksperymentów, aby zoptymalizować działanie zestawu, na przykład: poprawić jego dokładność, czułość i tak dalej.