Detektion af mavekræftmarkør og dens udvikling af kit (GCMDKD)

1 Foreløbig screening af tidlige mavekræftmarkører og antistofverifikation

(1) Rekruttering og prøveforberedelse af patienter og raske mennesker: Dette projekt kræver fire partier af forsøgspersoner, tre grupper af raske mennesker, tidlig gastrisk cancer og fremskredne mavekræftgrupper, med et gennemsnit på 30 tilfælde i hver gruppe. Den anden batch (den anden batch) er raske mennesker og 30 tilfælde af kronisk atrofisk gastritis, tidlig gastrisk cancer og 30 tilfælde af kronisk atrofisk gastritis. Der var 100 tilfælde i hver af den fremskredne mavekræftgruppe og 20 tilfælde i hver af leverkræft, tyktarmskræft og brystkræft. Serum- og plasmaprøver opnået fra forsøgspersoner bruges til at screene potentielle mavekræfttumormarkører, verificere anvendeligheden af ​​etablerede mavekræfttumormarkørdiagnostiske modeller og testsæt.

1. Rekruttering af mavekræftpatienter: 30 tilfælde af henholdsvis tidlige mavekræftpatienter (T1, T2) og fremskredne mavekræftpatienter (T3, T4) udvælges. Stadieinddelingen af ​​mavekræft er baseret på den ottende udgave af UICC (International Union Against Cancer) TNM-stadieinddeling. Forsøgspersonerne blev screenet i henhold til kravene i formularen til informeret samtykke.
2. Rekruttering af raske mennesker: 30 frivillige uden underliggende sygdomme udvælges som rask kontrolgruppe. Forsøgspersonerne blev screenet i henhold til kravene i formularen til informeret samtykke.
3. Prøveforberedelse: intravenøs indsamling for at få fuldblodsprøver fra patienter og raske kontroller. Prøvebehovet for hvert individ er 600 ul serum og plasma.

(2) Antistofchipscreening for potentielle tumormarkører for mavekræft for første gang For at screene for potentielle proteinmarkører for mavekræft blev Raybiotechs kvantitative antistofchip med høj gennemstrømning (AAH-BLG-2000) brugt til at måle 640 i første gruppe af forsøgspersoner (tidlig gastrisk cancer, fremskreden mavecancer og raske kontroller hver 30). En slags menneskeligt protein. Foreløbig screene differentielle proteiner ud, udføre bioinformatiske analyser og til sidst screene differentielt udtrykte proteiner, der er relevante for forskningen.

2Tilpasset antistofchip til at verificere mavekræfttumormarkører For yderligere at verificere kandidattumormarkørerne til diagnosticering af mavekræft, blev de differentielle proteiner screenet i det foregående trin tilpasset til antistofchips. Brug emneserumprøver (anden batch) til potentiel biomarkørverifikation. Ifølge testresultaterne kasseres de dårligt specifikke proteiner, og de mere specifikke proteiner bibeholdes.

3. Etablering af diagnostisk model Brug regressionsanalyse til at kombinere og sammenligne flere differentielle proteiner, udføre kvantitativ analyse, etablere en standardkurve, etablere en diagnostisk model for meget specifikke differentielle proteiner og yderligere måle den praktiske anvendelighed af den meget specifikke differentialproteindiagnostiske model.

4 Udvikling af kit Monoklonale antistoffer blev produceret som indfangningsantistoffer for forskellige højspecifikke tumormarkører, og endelig blev der etableret et mavekræftdiagnosekit og promoveret i klinisk praksis.

Etablering og præstationsmåling af mavekræftdiagnostiksæt.

1. Etablere diagnostiske kits for mavekræft, kvalitetskontrol referencematerialer og formulere relevante standarder på baggrund af ovenstående forskningsresultater.
2. Præcisionstest: Fortynd de selvfremstillede kvalitetskontrolreferencematerialer til 3 koncentrationer af høj, medium og lav, hver med 3 replikathuller, gentag testen 10 gange, og beregn gennemsnittet, standardafvigelsen og testværdien for hver kvalitetskontrol referenceprodukt. Variationskoefficient (CV) værdi.
3. Følsomhedsdetektion: Tag nulreferencestandarden (specifikt forskelsprotein) som prøven, og indsæt den gennemsnitlige værdi af fluorescensværdien målt 20 gange plus 2 gange standardafvigelsen i standardkurveligningen for at beregne det mindste detektionsvolumen.
4. Stabilitetstest: Opdel de selvfremstillede sæt i to grupper og anbring dem i en 4℃ fryser i 6 måneder og 37℃ i 7 dage. Kittets fysiske udseende, lineariteten af ​​dosis-respons-kurven, nøjagtighed, følsomhed og minimum detektionsvolumen Og andre indikatorer måles, og den specifikke detektionsmetode er den samme som ovenstående trin (2) og (3).
5. Sammenligning med andre metoder til påvisning af mavekræft: Brug selvforberedte detektionssæt til at detektere 30 tilfælde af tidlige mavekræftserumprøver, 30 tilfælde af avanceret mavekræftserumprøver og 30 sunde humane serumprøver og analysere testresultaterne.
6. Promovering og optimering af sættet. Tilfældig prøveudtagning udføres blandt patienter, der bruger dette kit til at observere diagnosefrekvensen for tidlig klinisk mavekræft og den tilsvarende prognose og analysere resultaterne af det tilbagevendende besøg. Ifølge resultaterne af genbesøget skal du fortsætte med at udføre tilsvarende eksperimenter for at optimere sættets ydeevne, for eksempel: forbedre dets nøjagtighed, følsomhed og så videre.