胃癌标志物检测及其试剂盒开发 (GCMDKD)

1 早期胃癌标志物的初步筛选及抗体验证

(1)患者和健康人的招募及样本制备：本项目需要受试者4批次，健康人3批次，早期胃癌组和晚期胃癌组，平均每组30例。 另一批（第二批）健康人和慢性萎缩性胃炎30例，早期胃癌和慢性萎缩性胃炎30例。 晚期胃癌组各100例，肝癌、结直肠癌、乳腺癌各20例。 从受试者获得的血清和血浆样本用于筛选潜在的胃癌肿瘤标志物，验证已建立的胃癌肿瘤标志物诊断模型和检测试剂盒的实用性。

1. 胃癌患者招募：分别选取30例早期胃癌患者(T1、T2)和晚期胃癌患者(T3、T4)。 胃癌的分期是基于第八版的UICC（国际抗癌联盟）TNM分期。 根据知情同意书的要求筛选受试者。
2. 健康人招募：选取30名无基础疾病的志愿者作为健康对照组。 根据知情同意书的要求筛选受试者。
3. 样本制备：静脉采集患者和健康对照者的全血样本。 每个受试者的样品要求是600ul血清和血浆。

(2) 首次胃癌潜在肿瘤标志物抗体芯片筛选为了筛选胃癌潜在蛋白标志物，瑞鼎生物的高通量定量抗体芯片（AAH-BLG-2000）在胃癌中检测640第一批受试者（早期胃癌、晚期胃癌、健康对照各30名）。 一种人类蛋白质。 初步筛选出差异蛋白，进行生物信息学分析，最终筛选出与研究相关的差异表达蛋白。

2定制化抗体芯片验证胃癌肿瘤标志物为了进一步验证胃癌诊断的候选肿瘤标志物，将前一阶段筛选出的差异蛋白进行抗体芯片定制化。 使用主题血清样本（第二批）进行潜在的生物标志物验证。 根据测试结果，丢弃特异性较差的蛋白质，保留特异性较高的蛋白质。

3.诊断模型的建立利用回归分析将多种差异蛋白进行组合比较，进行定量分析，建立标准曲线，建立高特异性差异蛋白诊断模型，进一步衡量高特异性差异蛋白诊断模型的实用性。

4 试剂盒开发 针对多种高特异性肿瘤标志物制备单克隆抗体作为捕获抗体，最终建立了胃癌诊断试剂盒并推广到临床。

胃癌诊断试剂盒的建立及性能检测。

1. 在上述研究成果的基础上建立胃癌诊断试剂盒、质控标准品并制定相关标准。
2. 精密度检测：将自制质控标准品稀释成高、中、低3个浓度，各3个重复孔，重复检测10次，计算各质控的均值、标准差和检测值参考产品。 变异系数 (CV) 值。
3. 灵敏度检测：以零参考标准（特异性差异蛋白）为样品，将20次测定荧光值的平均值加上2倍标准差代入标准曲线方程，计算最小检测体积。
4. 稳定性试验：将自制试剂盒分成两组，分别置于4℃冰箱6个月和37℃7天。 对试剂盒的物理外观、量效曲线的线性度、准确度、灵敏度、最小检测体积等指标进行测定，具体检测方法同上述步骤（2）和（3）。
5. 与其他胃癌检测方法比较：采用自制检测试剂盒对30例早期胃癌血清样本、30例晚期胃癌血清样本和30例健康人血清样本进行检测，并对检测结果进行分析。
6. 套件的推广和优化。 对使用该试剂盒的患者进行随机抽样，观察早期临床胃癌的诊断率及相应的预后情况，并对回访结果进行分析。 根据回访结果，继续进行相应的实验，优化试剂盒的性能，例如：提高其准确度、灵敏度等。