위암 표지자 검출 및 Kit 개발 (GCMDKD)

1 조기위암 표지자 1차 스크리닝 및 항체검증

(1) 환자 및 건강한 사람의 모집 및 샘플 준비: 이 프로젝트에는 4개 배치의 피험자, 3개 배치의 건강한 사람, 조기 위암 및 진행성 위암 그룹이 필요하며 각 그룹에 평균 30건의 사례가 있습니다. 다른 배치(제2 배치)는 건강한 사람과 만성 위축성 위염 30건, 조기 위암 30건, 만성 위축 위염 30건이다. 진행성 위암군은 각각 100건, 간암, 대장암, 유방암은 각각 20건이었다. 피험자로부터 얻은 혈청 및 혈장 샘플은 잠재적인 위암 종양 마커를 스크리닝하고 확립된 위암 종양 마커 진단 모델 및 테스트 키트의 실행 가능성을 확인하는 데 사용됩니다.

1. 위암 환자 모집: 조기 위암 환자(T1, T2)와 진행성 위암 환자(T3, T4) 각각 30명을 선발한다. 위암의 병기는 UICC(International Union Against Cancer) TNM 병기 8판을 기반으로 합니다. 피험자는 정보에 입각한 동의서의 요구 사항에 따라 선별되었습니다.
2. 건강한 사람 모집: 기저질환이 없는 지원자 30명을 건강한 대조군으로 선정합니다. 피험자는 정보에 입각한 동의서의 요구 사항에 따라 선별되었습니다.
3. 샘플 준비: 환자 및 건강한 대조군의 전혈 샘플을 얻기 위한 정맥 내 수집. 각 피험자에 대한 샘플 요구 사항은 600ul의 혈청 및 혈장입니다.

(2) 위암의 잠재적인 종양표지자에 대한 항체칩 최초 스크리닝 첫 번째 피험자 배치(조기 위암, 진행성 위암 및 건강한 대조군 각 30명). 인간 단백질의 일종. 1차적으로 감별 단백질을 선별하고, 생물정보학 분석을 수행하고, 최종적으로 연구와 관련된 차별적으로 발현된 단백질을 선별합니다.

2위암 종양표지자 검증을 위한 맞춤형 항체칩 위암 진단을 위한 종양표지자 후보물질을 추가로 검증하기 위해 이전 단계에서 선별한 차등 단백질을 맞춤형 항체칩으로 만들었다. 잠재적인 바이오마커 확인을 위해 대상 혈청 샘플(두 번째 배치)을 사용하십시오. 테스트 결과에 따르면, 특이성이 낮은 단백질은 폐기되고 보다 특이적인 단백질이 유지됩니다.

3. 진단 모델 수립 회귀 분석을 통해 여러 감별 단백질을 조합 및 비교하고, 정량 분석을 수행하고, 표준 곡선을 설정하고, 고특이성 감별 단백질 진단 모델을 수립하고, 추가로 고특이성 감별 단백질 진단 모델의 실행 가능성을 측정합니다.

4 Kit 개발 단일클론항체가 다양한 고특이성 종양 표지자에 대한 포획항체로 생산되었고 최종적으로 위암 진단키트가 확립되어 임상에 추진되었다.

위암진단키트 구축 및 성능 측정

1. 위 연구 결과를 바탕으로 위암 진단키트, 품질관리 참고자료를 확립하고 관련 기준을 마련한다.
2. 정밀검사 : 자체제작 품질관리기준물질을 고,중,저 3가지 농도로 희석하여 각각 3개의 반복구멍을 두고 테스트를 10회 반복하여 각 정도관리의 평균, 표준편차, 검사값을 산출한다. 참조 제품. 변동 계수(CV) 값.
3. 민감도 검출: 영점 참조 표준(특이차 단백질)을 시료로 하고, 20배 측정된 형광값의 평균값에 표준편차를 2배 더한 값을 표준 곡선 방정식에 대입하여 최소 검출 부피를 계산합니다.
4. 안정성 테스트 : 자체 제작 키트를 두 그룹으로 나누어 4℃ 냉동고에서 6개월, 37℃에서 7일간 보관합니다. 키트의 외형, 용량-반응곡선의 직선성, 정확도, 민감도, 최소검출량 등의 지표를 측정하며, 구체적인 검출방법은 상기 (2), (3)단계와 동일하다.
5. 타 위암 진단법과 비교 : 자체 제작한 진단키트를 이용하여 조기 위암 혈청 시료 30건, 진행성 위암 혈청 시료 30건, 정상인 혈청 시료 30건을 검출하고 검사 결과를 분석한다.
6. 키트 홍보 및 최적화. 이 키트를 사용하는 환자를 대상으로 무작위 샘플링을 실시하여 조기임상위암의 진단율과 그에 따른 예후를 관찰하고 재방문 결과를 분석한다. 재방문 결과에 따라 해당 실험을 계속 수행하여 키트의 성능을 최적화합니다. 예를 들어 정확도, 감도 등을 개선합니다.