Detección de marcadores de cáncer gástrico y desarrollo de su kit (GCMDKD)

1 Detección preliminar de marcadores de cáncer gástrico temprano y verificación de anticuerpos

(1) Reclutamiento y preparación de muestras de pacientes y personas sanas: este proyecto requiere cuatro lotes de sujetos, tres lotes de personas sanas, grupos de cáncer gástrico temprano y cáncer gástrico avanzado, con un promedio de 30 casos en cada grupo. El otro lote (el segundo lote) son personas sanas y 30 casos de gastritis atrófica crónica, cáncer gástrico temprano y 30 casos de gastritis atrófica crónica. Hubo 100 casos en cada grupo de cáncer gástrico avanzado y 20 casos en cada uno de cáncer de hígado, cáncer colorrectal y cáncer de mama. Las muestras de suero y plasma obtenidas de los sujetos se utilizan para detectar posibles marcadores tumorales de cáncer gástrico, verificar la viabilidad de modelos de diagnóstico y kits de prueba de marcadores tumorales de cáncer gástrico establecidos.

1. Reclutamiento de pacientes con cáncer gástrico: se seleccionan 30 casos de pacientes con cáncer gástrico temprano (T1, T2) y pacientes con cáncer gástrico avanzado (T3, T4) respectivamente. La estadificación del cáncer gástrico se basa en la octava edición de la estadificación TNM de la UICC (Unión Internacional contra el Cáncer). Los sujetos fueron seleccionados de acuerdo con los requisitos del formulario de consentimiento informado.
2. Reclutamiento de personas sanas: 30 voluntarios sin enfermedades de base son seleccionados como grupo de control sano. Los sujetos fueron seleccionados de acuerdo con los requisitos del formulario de consentimiento informado.
3. Preparación de muestras: recogida intravenosa para obtener muestras de sangre entera de pacientes y controles sanos. El requisito de muestra para cada sujeto es de 600 ul de suero y plasma.

(2) Detección con chip de anticuerpos para posibles marcadores tumorales de cáncer gástrico por primera vez Para detectar posibles marcadores proteicos de cáncer gástrico, se utilizó el chip de anticuerpos cuantitativos de alto rendimiento de Raybiotech (AAH-BLG-2000) para medir 640 en el primer lote de sujetos (cáncer gástrico temprano, cáncer gástrico avanzado y controles sanos cada 30). Tipo de proteína humana. Excluya preliminarmente proteínas diferenciales, realice análisis bioinformáticos y, finalmente, evalúe proteínas expresadas diferencialmente relevantes para la investigación.

2Chip de anticuerpos personalizado para verificar marcadores tumorales de cáncer gástrico Con el fin de verificar aún más los marcadores tumorales candidatos para el diagnóstico de cáncer gástrico, las proteínas diferenciales analizadas en la etapa anterior se personalizaron para chips de anticuerpos. Utilice muestras de suero del sujeto (segundo lote) para la posible verificación de biomarcadores. De acuerdo con los resultados de la prueba, las proteínas poco específicas se descartan y las proteínas más específicas se conservan.

3. Establecimiento del modelo de diagnóstico Use el análisis de regresión para combinar y comparar múltiples proteínas diferenciales, realizar análisis cuantitativos, establecer una curva estándar, establecer un modelo de diagnóstico para proteínas diferenciales altamente específicas y medir aún más la viabilidad del modelo de diagnóstico de proteínas diferenciales altamente específicas.

4 Desarrollo del kit Se produjeron anticuerpos monoclonales como anticuerpos de captura para varios marcadores tumorales de alta especificidad y, finalmente, se estableció y promovió un kit de diagnóstico de cáncer gástrico en la práctica clínica.

Establecimiento y medición de rendimiento de kit de diagnóstico de cáncer gástrico.

1. Establecer kits de diagnóstico de cáncer gástrico, materiales de referencia de control de calidad y formular estándares relevantes sobre la base de los resultados de investigación anteriores.
2. Pruebas de precisión: diluya los materiales de referencia de control de calidad hechos a sí mismos en 3 concentraciones de alta, media y baja, cada una con 3 orificios repetidos, repita la prueba 10 veces y calcule la media, la desviación estándar y el valor de prueba de cada control de calidad. producto de referencia. Valor del coeficiente de variación (CV).
3. Detección de sensibilidad: tome el estándar de referencia cero (proteína de diferencia específica) como muestra y sustituya el valor promedio del valor de fluorescencia medido 20 veces más 2 veces la desviación estándar en la ecuación de la curva estándar para calcular el volumen mínimo de detección.
4. Prueba de estabilidad: divida los kits de fabricación propia en dos grupos y colóquelos en un congelador a 4 ℃ durante 6 meses y a 37 ℃ durante 7 días. Se miden la apariencia física del kit, la linealidad de la curva dosis-respuesta, la precisión, la sensibilidad y el volumen mínimo de detección y otros indicadores, y el método de detección específico es el mismo que los pasos anteriores (2) y (3).
5. Comparación con otros métodos de detección de cáncer gástrico: use kits de detección preparados por usted mismo para detectar 30 casos de muestras de suero de cáncer gástrico temprano, 30 casos de muestras de suero de cáncer gástrico avanzado y 30 muestras de suero humano sano, y analice los resultados de la prueba.
6. Promoción y optimización del kit. Se realiza un muestreo aleatorio entre los pacientes que utilizan este kit para observar la tasa de diagnóstico de cáncer gástrico clínico temprano y el pronóstico correspondiente, y analizar los resultados de la visita de regreso. De acuerdo con los resultados de la visita de regreso, continúe realizando los experimentos correspondientes para optimizar el rendimiento del kit, por ejemplo: mejorar su precisión, sensibilidad, etc.