Deteksjon av gastrisk kreftmarkør og dens utvikling av kit (GCMDKD)

1 Foreløpig screening av tidlige markører for magekreft og antistoffverifisering

(1) Rekruttering og prøveforberedelse av pasienter og friske personer: Dette prosjektet krever fire grupper av forsøkspersoner, tre grupper av friske personer, tidlig gastrisk kreft og avansert gastrisk kreft grupper, med et gjennomsnitt på 30 tilfeller i hver gruppe. Den andre gruppen (den andre gruppen) er friske mennesker og 30 tilfeller av kronisk atrofisk gastritt, tidlig magekreft og 30 tilfeller av kronisk atrofisk gastritt. Det var 100 tilfeller i hver av den avanserte magekreftgruppen, og 20 tilfeller i hver av leverkreft, tykktarmskreft og brystkreft. Serum- og plasmaprøver innhentet fra forsøkspersoner brukes til å screene potensielle tumormarkører for magekreft, verifisere gjennomførbarheten av etablerte diagnostiske modeller for magekrefttumormarkører og testsett.

1. Rekruttering av magekreftpasienter: 30 tilfeller av henholdsvis tidlige magekreftpasienter (T1, T2) og avanserte magekreftpasienter (T3, T4) velges ut. Iscenesettelsen av magekreft er basert på den åttende utgaven av UICC (International Union Against Cancer) TNM iscenesettelse. Forsøkspersonene ble screenet i henhold til kravene i skjemaet for informert samtykke.
2. Rekruttering av friske personer: 30 frivillige uten underliggende sykdommer velges ut som frisk kontrollgruppe. Forsøkspersonene ble screenet i henhold til kravene i skjemaet for informert samtykke.
3. Prøveforberedelse: intravenøs innsamling for å få fullblodsprøver fra pasienter og friske kontroller. Prøvebehovet for hvert individ er 600 ul serum og plasma.

(2) Antistoffbrikkescreening for potensielle tumormarkører for magekreft for første gang For å screene for potensielle proteinmarkører for magekreft, ble Raybiotechs kvantitative antistoffbrikke (AAH-BLG-2000) brukt til å måle 640 i første gruppe med forsøkspersoner (tidlig magekreft, avansert magekreft og friske kontroller hver 30.). En slags menneskelig protein. Foreløpig sile ut differensialproteiner, gjennomføre bioinformatikkanalyse, og til slutt screene differensielt uttrykte proteiner som er relevante for forskningen.

2Tilpasset antistoffbrikke for å verifisere tumormarkører for magekreft For ytterligere å verifisere kandidattumormarkørene for diagnosen magekreft, ble differensialproteinene screenet i forrige trinn tilpasset for antistoffchips. Bruk emneserumprøver (andre batch) for potensiell biomarkørverifisering. I følge testresultatene blir de dårlig spesifikke proteinene kastet, og de mer spesifikke proteinene beholdes.

3. Etablering av diagnostisk modell Bruk regresjonsanalyse for å kombinere og sammenligne flere differensialproteiner, utføre kvantitativ analyse, etablere en standardkurve, etablere en diagnostisk modell for svært spesifikke differensialproteiner, og videre måle gjennomførbarheten av den svært spesifikke differensialproteindiagnostiske modellen.

4 Kitutvikling Monoklonale antistoffer ble produsert som fangeantistoffer for ulike høyspesifikke tumormarkører, og til slutt ble et diagnosesett for magekreft etablert og promotert i klinisk praksis.

Etablering og ytelsesmåling av diagnosesett for magekreft.

1. Etablere diagnostiske sett for magekreft, kvalitetskontroll referansemateriale og formulere relevante standarder på grunnlag av forskningsresultatene ovenfor.
2. Presisjonstesting: Fortynn de selvlagde kvalitetskontrollreferansematerialene til 3 konsentrasjoner av høy, middels og lav, hver med 3 replikathull, gjenta testen 10 ganger, og beregn gjennomsnittet, standardavviket og testverdien for hver kvalitetskontroll referanseprodukt. Variasjonskoeffisient (CV) verdi.
3. Sensitivitetsdeteksjon: Ta nullreferansestandarden (spesifikt forskjellsprotein) som prøven, og bytt inn gjennomsnittsverdien av fluorescensverdien målt 20 ganger pluss 2 ganger standardavviket i standardkurveligningen for å beregne minimum deteksjonsvolum.
4. Stabilitetstest: Del de selvlagde settene i to grupper og plasser dem i en 4℃ fryser i 6 måneder og 37℃ i 7 dager. Det fysiske utseendet til settet, lineariteten til dose-responskurven, nøyaktighet, følsomhet og minimum deteksjonsvolum Og andre indikatorer måles, og den spesifikke deteksjonsmetoden er den samme som trinnene (2) og (3) ovenfor.
5. Sammenligning med andre metoder for påvisning av magekreft: bruk selvforberedte deteksjonssett for å oppdage 30 tilfeller av tidlige serumprøver for magekreft, 30 tilfeller av avanserte serumprøver for magekreft og 30 friske serumprøver fra mennesker, og analyser testresultatene.
6. Markedsføring og optimalisering av settet. Tilfeldig prøvetaking utføres blant pasienter som bruker dette settet for å observere diagnosefrekvensen for tidlig klinisk magekreft og den tilsvarende prognosen, og analysere resultatene av gjenbesøket. I henhold til resultatene fra tilbakebesøket, fortsett å utføre tilsvarende eksperimenter for å optimalisere ytelsen til settet, for eksempel: forbedre nøyaktigheten, følsomheten og så videre.