Обнаружение маркеров рака желудка и разработка его набора (GCMDKD)

1 Предварительный скрининг ранних маркеров рака желудка и проверка антител

(1) Набор и подготовка образцов пациентов и здоровых людей: для этого проекта требуется четыре группы субъектов, три группы здоровых людей, группы раннего рака желудка и запущенного рака желудка, в среднем по 30 случаев в каждой группе. Другая партия (вторая партия) – здоровые люди и 30 больных хроническим атрофическим гастритом, ранним раком желудка и 30 больных хроническим атрофическим гастритом. Было 100 случаев в каждой из групп поздних стадий рака желудка и по 20 случаев в каждой группе рака печени, колоректального рака и рака молочной железы. Образцы сыворотки и плазмы, полученные от субъектов, используются для скрининга потенциальных опухолевых маркеров рака желудка, проверки применимости установленных диагностических моделей опухолевых маркеров рака желудка и тест-наборов.

1. Набор пациентов с раком желудка: выбрано 30 случаев пациентов с ранним раком желудка (T1, T2) и пациентов с прогрессирующим раком желудка (T3, T4) соответственно. Стадирование рака желудка основано на стадировании TNM восьмого издания UICC (Международного противоракового союза). Субъекты были обследованы в соответствии с требованиями формы информированного согласия.
2. Набор здоровых людей: 30 добровольцев без сопутствующих заболеваний выбраны в качестве здоровой контрольной группы. Субъекты были обследованы в соответствии с требованиями формы информированного согласия.
3. Подготовка проб: внутривенный сбор для получения образцов цельной крови пациентов и здоровых контролей. Требуемый образец для каждого субъекта составляет 600 мкл сыворотки и плазмы.

(2) Впервые проведен скрининг потенциальных онкомаркеров рака желудка на чипе антител Для скрининга потенциальных белковых маркеров рака желудка был использован высокопроизводительный количественный чип антител Raybiotech (AAH-BLG-2000) для измерения 640 в первая группа субъектов (ранний рак желудка, запущенный рак желудка и здоровые контроли, каждые 30). Вид человеческого белка. Предварительно отсейте дифференциальные белки, проведите биоинформатический анализ и, наконец, отсейте дифференциально экспрессированные белки, имеющие отношение к исследованию.

2Индивидуальный чип антител для проверки онкомаркеров рака желудка. Для дальнейшей проверки кандидатных онкомаркеров для диагностики рака желудка дифференциальные белки, скринированные на предыдущем этапе, были адаптированы для чипов антител. Используйте образцы сыворотки субъекта (вторая партия) для проверки потенциального биомаркера. По результатам испытаний малоспецифичные белки отбрасываются, а более специфичные сохраняются.

3. Создание диагностической модели Используйте регрессионный анализ для объединения и сравнения нескольких дифференциальных белков, выполнения количественного анализа, построения стандартной кривой, создания диагностической модели для высокоспецифичных дифференциальных белков и дальнейшего измерения применимости высокоспецифичной дифференциальной диагностической модели белков.

4 Разработка набора Моноклональные антитела были получены в качестве захватывающих антител для различных высокоспецифичных опухолевых маркеров, и, наконец, был разработан и внедрен в клиническую практику набор для диагностики рака желудка.

Создание и измерение эффективности диагностического набора для рака желудка.

1. Создать диагностические наборы для рака желудка, эталонные материалы для контроля качества и сформулировать соответствующие стандарты на основе вышеуказанных результатов исследований.
2. Прецизионное тестирование: разбавьте самодельные эталонные материалы для контроля качества до 3 концентраций высокой, средней и низкой концентрации, каждая с 3 повторяющимися отверстиями, повторите тест 10 раз и рассчитайте среднее значение, стандартное отклонение и значение теста для каждого контроля качества. эталонный продукт. Значение коэффициента вариации (CV).
3. Определение чувствительности: возьмите нулевой эталонный стандарт (белок с удельной разницей) в качестве образца и подставьте среднее значение значения флуоресценции, измеренное 20 раз, плюс 2-кратное стандартное отклонение в уравнение стандартной кривой, чтобы рассчитать минимальный объем обнаружения.
4. Тест на стабильность: разделите самодельные наборы на две группы и поместите их в морозильную камеру при 4℃ на 6 месяцев и при 37℃ на 7 дней. Измеряют внешний вид набора, линейность кривой доза-реакция, точность, чувствительность и минимальный объем обнаружения. И другие показатели, а конкретный метод обнаружения такой же, как и в описанных выше шагах (2) и (3).
5. Сравнение с другими методами обнаружения рака желудка: используйте самостоятельно подготовленные наборы для обнаружения, чтобы обнаружить 30 случаев образцов сыворотки раннего рака желудка, 30 случаев образцов сыворотки запущенного рака желудка и 30 образцов сыворотки здорового человека, а также проанализировать результаты теста.
6. Продвижение и оптимизация комплекта. Случайная выборка проводится среди пациентов, использующих этот набор, для наблюдения за частотой диагностики раннего клинического рака желудка и соответствующего прогноза, а также для анализа результатов повторного визита. По результатам ответного визита продолжить проведение соответствующих экспериментов по оптимизации работы набора, например: повысить его точность, чувствительность и т.д.