Detekce markerů rakoviny žaludku a vývoj sady (GCMDKD)

1 Předběžný screening časných markerů rakoviny žaludku a ověření protilátek

(1) Nábor a příprava vzorků pacientů a zdravých lidí: Tento projekt vyžaduje čtyři skupiny subjektů, tři skupiny zdravých lidí, skupiny raného karcinomu žaludku a pokročilého karcinomu žaludku, s průměrem 30 případů v každé skupině. Druhá várka (druhá várka) jsou zdraví lidé a 30 případů chronické atrofické gastritidy, časného karcinomu žaludku a 30 případů chronické atrofické gastritidy. V každé skupině s pokročilou rakovinou žaludku bylo 100 případů a 20 případů v každé z rakoviny jater, kolorektálního karcinomu a rakoviny prsu. Vzorky séra a plazmy získané od subjektů se používají ke screeningu potenciálních nádorových markerů rakoviny žaludku, ověření použitelnosti zavedených diagnostických modelů markerů rakoviny žaludku a testovacích souprav.

1. Nábor pacientů s rakovinou žaludku: Je vybráno 30 případů pacientů s časnou rakovinou žaludku (T1, T2) a pacientů s pokročilým karcinomem žaludku (T3, T4). Stanovení stagingu rakoviny žaludku je založeno na osmém vydání UICC (International Union Against Cancer) TNM stagingu. Subjekty byly prověřovány podle požadavků formuláře informovaného souhlasu.
2. Nábor zdravých lidí: 30 dobrovolníků bez základního onemocnění je vybráno jako zdravá kontrolní skupina. Subjekty byly prověřovány podle požadavků formuláře informovaného souhlasu.
3. Příprava vzorku: nitrožilní odběr k získání vzorků plné krve pacientů a zdravých kontrol. Potřebný vzorek pro každého pacienta je 600 ul séra a plazmy.

(2) Poprvé screening protilátek na potenciální nádorové markery rakoviny žaludku Pro screening potenciálních proteinových markerů rakoviny žaludku byl použit vysoce výkonný kvantitativní protilátkový čip Raybiotech (AAH-BLG-2000) k měření 640 v první várka subjektů (raná rakovina žaludku, pokročilá rakovina žaludku a zdravé kontroly po 30). Druh lidské bílkoviny. Předběžně proveďte screening diferenciálních proteinů, proveďte bioinformatickou analýzu a nakonec screenujte odlišně exprimované proteiny relevantní pro výzkum.

2Upravený protilátkový čip pro ověření nádorových markerů rakoviny žaludku Aby bylo možné dále ověřit kandidátní nádorové markery pro diagnózu rakoviny žaludku, byly diferenciální proteiny testované v předchozí fázi přizpůsobeny pro protilátkové čipy. Pro potenciální ověření biomarkerů použijte vzorky séra (druhá šarže). Podle výsledků testu jsou špatně specifické proteiny vyřazeny a specifičtější proteiny jsou zachovány.

3. Sestavení diagnostického modelu Pomocí regresní analýzy lze kombinovat a porovnávat více diferenciálních proteinů, provádět kvantitativní analýzu, sestavit standardní křivku, stanovit diagnostický model pro vysoce specifické diferenciální proteiny a dále měřit praktičnost vysoce specifického diferenciálního diagnostického modelu proteinů.

4 Vývoj soupravy Byly vyrobeny monoklonální protilátky jako záchytné protilátky pro různé vysoce specifické nádorové markery a nakonec byla vytvořena a propagována souprava pro diagnostiku karcinomu žaludku, která byla propagována v klinické praxi.

Zřízení a měření výkonu diagnostické soupravy pro rakovinu žaludku.

1. Na základě výše uvedených výsledků výzkumu vytvořit diagnostické soupravy pro rakovinu žaludku, referenční materiály pro kontrolu kvality a formulovat příslušné normy.
2. Testování přesnosti: Zřeďte vlastnoručně vyrobené referenční materiály pro kontrolu kvality na 3 koncentrace vysoké, střední a nízké, každou se 3 duplicitními otvory, opakujte test 10krát a vypočítejte průměr, standardní odchylku a testovací hodnotu každé kontroly kvality referenční produkt. Hodnota variačního koeficientu (CV).
3. Detekce citlivosti: Jako vzorek vezměte nulový referenční standard (specifický rozdílový protein) a do rovnice standardní křivky dosaďte průměrnou hodnotu hodnoty fluorescence naměřenou 20krát plus 2násobek standardní odchylky, abyste vypočítali minimální objem detekce.
4. Test stability: Vlastní vyrobené soupravy rozdělte do dvou skupin a umístěte je na 6 měsíců do mrazáku při teplotě 4 °C a na 7 dní při teplotě 37 °C. Měří se fyzický vzhled soupravy, linearita křivky dávka-odpověď, přesnost, citlivost a minimální detekční objem a další indikátory a specifická detekční metoda je stejná jako ve výše uvedených krocích (2) a (3).
5. Porovnání s jinými metodami detekce rakoviny žaludku: použijte samostatně připravené detekční soupravy k detekci 30 případů vzorků séra časného karcinomu žaludku, 30 případů vzorků séra pokročilého karcinomu žaludku a 30 vzorků zdravého lidského séra a analyzujte výsledky testu.
6. Propagace a optimalizace stavebnice. Náhodný odběr vzorků se provádí mezi pacienty, kteří používají tuto soupravu, aby se sledovala míra diagnózy časného klinického karcinomu žaludku a odpovídající prognóza a analyzovaly se výsledky zpětné návštěvy. Podle výsledků zpětné návštěvy pokračujte v provádění odpovídajících experimentů pro optimalizaci výkonu soupravy, například: zlepšit její přesnost, citlivost a tak dále.