Détection des marqueurs du cancer gastrique et développement de son kit (GCMDKD)

1 Dépistage préliminaire des marqueurs précoces du cancer gastrique et vérification des anticorps

(1) Recrutement et préparation des échantillons de patients et de personnes en bonne santé : Ce projet nécessite quatre lots de sujets, trois lots de personnes en bonne santé, les groupes cancer gastrique précoce et cancer gastrique avancé, avec une moyenne de 30 cas dans chaque groupe. L'autre lot (le deuxième lot) est composé de personnes en bonne santé et de 30 cas de gastrite atrophique chronique, de cancer gastrique précoce et de 30 cas de gastrite atrophique chronique. Il y avait 100 cas dans chacun des groupes de cancer gastrique avancé et 20 cas dans chacun des cancers du foie, du cancer colorectal et du cancer du sein. Des échantillons de sérum et de plasma obtenus à partir de sujets sont utilisés pour dépister les marqueurs tumoraux potentiels du cancer gastrique, vérifier la praticabilité des modèles de diagnostic établis des marqueurs tumoraux du cancer gastrique et des kits de test.

1. Recrutement de patients atteints de cancer gastrique : 30 cas de patients atteints de cancer gastrique précoce (T1, T2) et de patients atteints de cancer gastrique avancé (T3, T4) sont sélectionnés respectivement. La stadification du cancer gastrique est basée sur la huitième édition de la stadification TNM de l'UICC (Union internationale contre le cancer). Les sujets ont été sélectionnés selon les exigences du formulaire de consentement éclairé.
2. Recrutement de personnes en bonne santé : 30 volontaires sans maladies sous-jacentes sont sélectionnés comme groupe témoin en bonne santé. Les sujets ont été sélectionnés selon les exigences du formulaire de consentement éclairé.
3. Préparation des échantillons : collecte intraveineuse pour obtenir des échantillons de sang total de patients et de témoins sains. L'échantillon requis pour chaque sujet est de 600 ul de sérum et de plasma.

(2) Dépistage par puce d'anticorps des marqueurs tumoraux potentiels du cancer gastrique pour la première fois Afin de dépister les marqueurs protéiques potentiels du cancer gastrique, la puce d'anticorps quantitative à haut débit de Raybiotech (AAH-BLG-2000) a été utilisée pour mesurer 640 dans le premier lot de sujets (cancer gastrique précoce, cancer gastrique avancé et témoins sains tous les 30). Sorte de protéine humaine. Éliminer au préalable les protéines différentielles, effectuer une analyse bioinformatique et enfin filtrer les protéines exprimées de manière différentielle pertinentes pour la recherche.

2Puce à anticorps personnalisée pour vérifier les marqueurs tumoraux du cancer gastrique Afin de vérifier davantage les marqueurs tumoraux candidats pour le diagnostic du cancer gastrique, les protéines différentielles criblées à l'étape précédente ont été personnalisées pour les puces à anticorps. Utiliser les échantillons de sérum du sujet (deuxième lot) pour la vérification potentielle des biomarqueurs. Selon les résultats des tests, les protéines peu spécifiques sont éliminées et les protéines plus spécifiques sont conservées.

3. Établissement d'un modèle de diagnostic Utiliser l'analyse de régression pour combiner et comparer plusieurs protéines différentielles, effectuer une analyse quantitative, établir une courbe standard, établir un modèle de diagnostic pour des protéines différentielles hautement spécifiques et mesurer davantage la praticabilité du modèle de diagnostic de protéines différentielles hautement spécifiques.

4 Développement du kit Des anticorps monoclonaux ont été produits comme anticorps de capture pour divers marqueurs tumoraux hautement spécifiques, et enfin un kit de diagnostic du cancer gastrique a été créé et promu dans la pratique clinique.

Mise en place et mesure des performances du kit de diagnostic du cancer gastrique.

1. Établir des trousses de diagnostic du cancer gastrique, des matériaux de référence pour le contrôle de la qualité et formuler des normes pertinentes sur la base des résultats de recherche ci-dessus.
2. Test de précision : diluez les matériaux de référence de contrôle de qualité fabriqués par vous-même à 3 concentrations élevées, moyennes et faibles, chacune avec 3 trous répétés, répétez le test 10 fois et calculez la moyenne, l'écart type et la valeur de test de chaque contrôle de qualité. produit de référence. Valeur du coefficient de variation (CV).
3. Détection de sensibilité : Prenez l'étalon de référence zéro (protéine de différence spécifique) comme échantillon et remplacez la valeur moyenne de la valeur de fluorescence mesurée 20 fois plus 2 fois l'écart type dans l'équation de la courbe standard pour calculer le volume de détection minimum.
4. Test de stabilité : Divisez les kits faits maison en deux groupes et placez-les dans un congélateur à 4℃ pendant 6 mois et à 37℃ pendant 7 jours. L'apparence physique du kit, la linéarité de la courbe dose-réponse, la précision, la sensibilité et le volume de détection minimum et d'autres indicateurs sont mesurés, et la méthode de détection spécifique est la même que les étapes ci-dessus (2) et (3).
5. Comparaison avec d'autres méthodes de détection du cancer gastrique : utilisez des kits de détection auto-préparés pour détecter 30 cas d'échantillons de sérum de cancer gastrique précoce, 30 cas d'échantillons de sérum de cancer gastrique avancé et 30 échantillons de sérum humain sain, et analysez les résultats des tests.
6. Promotion et optimisation du kit. Un échantillonnage aléatoire est effectué parmi les patients utilisant ce kit pour observer le taux de diagnostic de cancer gastrique clinique précoce et le pronostic correspondant, et analyser les résultats de la visite de retour. Selon les résultats de la visite de retour, continuez à mener des expériences correspondantes pour optimiser les performances du kit, par exemple : améliorer sa précision, sa sensibilité, etc.