Magenkrebs-Marker-Erkennung und seine Kit-Entwicklung (GCMDKD)

1 Vorläufiges Screening von Frühmarkern für Magenkrebs und Antikörperverifizierung

(1) Rekrutierung und Probenvorbereitung von Patienten und gesunden Personen: Dieses Projekt erfordert vier Chargen von Probanden, drei Chargen von gesunden Personen, Gruppen mit frühem Magenkrebs und fortgeschrittenem Magenkrebs mit durchschnittlich 30 Fällen in jeder Gruppe. Die andere Charge (die zweite Charge) besteht aus gesunden Menschen und 30 Fällen von chronisch atrophischer Gastritis, Magenfrühkrebs und 30 Fällen von chronisch atrophischer Gastritis. Es gab 100 Fälle in jeder der fortgeschrittenen Magenkrebsgruppen und 20 Fälle in jeder von Leberkrebs, Darmkrebs und Brustkrebs. Von Probanden erhaltene Serum- und Plasmaproben werden verwendet, um potenzielle Magenkrebs-Tumormarker zu screenen und die Praktikabilität etablierter Magenkrebs-Tumormarker-Diagnosemodelle und Testkits zu überprüfen.

1. Rekrutierung von Patienten mit Magenkrebs: Es werden jeweils 30 Fälle von Patienten mit Magenkrebs im Frühstadium (T1, T2) und Patienten mit fortgeschrittenem Magenkrebs (T3, T4) ausgewählt. Die Einstufung von Magenkrebs basiert auf der achten Ausgabe der TNM-Einstufung der UICC (International Union Against Cancer). Die Probanden wurden gemäß den Anforderungen des Einwilligungsformulars gescreent.
2. Rekrutierung von Gesunden: Als gesunde Kontrollgruppe werden 30 Probanden ohne Grunderkrankungen ausgewählt. Die Probanden wurden gemäß den Anforderungen des Einwilligungsformulars gescreent.
3. Probenvorbereitung: intravenöse Entnahme zur Gewinnung von Vollblutproben von Patienten und gesunden Kontrollpersonen. Der Probenbedarf für jeden Probanden beträgt 600 ul Serum und Plasma.

(2) Antikörperchip-Screening zum ersten Mal auf potenzielle Tumormarker von Magenkrebs Um auf potenzielle Proteinmarker von Magenkrebs zu screenen, wurde der quantitative Hochdurchsatz-Antikörperchip (AAH-BLG-2000) von Raybiotech verwendet, um 640 in der erste Gruppe von Probanden (früher Magenkrebs, fortgeschrittener Magenkrebs und gesunde Kontrollen jeweils 30). Eine Art menschliches Protein. Screenen Sie vorläufig differentielle Proteine, führen Sie bioinformatische Analysen durch und screenen Sie schließlich differentiell exprimierte Proteine, die für die Forschung relevant sind.

2Maßgeschneiderter Antikörper-Chip zur Verifizierung von Magenkrebs-Tumormarkern Um die Kandidaten-Tumormarker für die Diagnose von Magenkrebs weiter zu verifizieren, wurden die im vorherigen Schritt gescreenten differenziellen Proteine ​​für Antikörper-Chips maßgefertigt. Verwenden Sie Serumproben des Probanden (zweite Charge) für die potenzielle Biomarker-Verifizierung. Entsprechend den Testergebnissen werden die wenig spezifischen Proteine ​​verworfen und die spezifischeren Proteine ​​behalten.

3. Etablierung eines diagnostischen Modells Verwenden Sie die Regressionsanalyse, um mehrere differenzielle Proteine ​​zu kombinieren und zu vergleichen, führen Sie eine quantitative Analyse durch, erstellen Sie eine Standardkurve, erstellen Sie ein diagnostisches Modell für hochspezifische differenzielle Proteine ​​und messen Sie weiter die Praktikabilität des hochspezifischen differenziellen Proteindiagnosemodells.

4 Kit-Entwicklung Monoklonale Antikörper wurden als Fangantikörper für verschiedene hochspezifische Tumormarker hergestellt und schließlich wurde ein Magenkrebs-Diagnose-Kit etabliert und in der klinischen Praxis beworben.

Etablierung und Leistungsmessung von Magenkrebs-Diagnostik-Kits.

1. Erstellung von Magenkrebs-Diagnosekits, Qualitätskontroll-Referenzmaterialien und Formulierung relevanter Standards auf der Grundlage der oben genannten Forschungsergebnisse.
2. Präzisionstest: Verdünnen Sie die selbst hergestellten Qualitätskontroll-Referenzmaterialien auf 3 Konzentrationen von hoch, mittel und niedrig, jeweils mit 3 Wiederholungslöchern, wiederholen Sie den Test 10 Mal und berechnen Sie den Mittelwert, die Standardabweichung und den Testwert jeder Qualitätskontrolle Referenzprodukt. Wert des Variationskoeffizienten (CV).
3. Empfindlichkeitsnachweis: Nehmen Sie den Null-Referenzstandard (spezifisches Differenzprotein) als Probe und setzen Sie den Mittelwert des gemessenen Fluoreszenzwerts 20 mal plus 2 mal die Standardabweichung in die Standardkurvengleichung ein, um das minimale Nachweisvolumen zu berechnen.
4. Stabilitätstest: Teilen Sie die selbstgebauten Kits in zwei Gruppen und legen Sie sie für 6 Monate in einen 4℃-Gefrierschrank und 7 Tage bei 37℃. Das physische Erscheinungsbild des Kits, die Linearität der Dosis-Wirkungs-Kurve, Genauigkeit, Empfindlichkeit und minimales Nachweisvolumen und andere Indikatoren werden gemessen, und das spezifische Nachweisverfahren ist das gleiche wie in den obigen Schritten (2) und (3).
5. Vergleich mit anderen Methoden zur Erkennung von Magenkrebs: Verwenden Sie selbst hergestellte Erkennungskits, um 30 Fälle von Serumproben von Magenkrebs im Frühstadium, 30 Fälle von Serumproben von fortgeschrittenem Magenkrebs und 30 Serumproben von gesunden Menschen zu erkennen und die Testergebnisse zu analysieren.
6. Promotion und Optimierung des Kits. Unter Patienten, die dieses Kit verwenden, wird eine Zufallsstichprobe durchgeführt, um die Diagnoserate von frühem klinischem Magenkrebs und die entsprechende Prognose zu beobachten und die Ergebnisse des Gegenbesuchs zu analysieren. Führen Sie gemäß den Ergebnissen des Gegenbesuchs weiterhin entsprechende Experimente durch, um die Leistung des Kits zu optimieren, z. B.: Verbesserung seiner Genauigkeit, Empfindlichkeit usw.