Rilevamento del marker del cancro gastrico e sviluppo del relativo kit (GCMDKD)

1 Screening preliminare dei marcatori precoci del cancro gastrico e verifica degli anticorpi

(1) Reclutamento e preparazione del campione di pazienti e persone sane: questo progetto richiede quattro lotti di soggetti, tre lotti di persone sane, gruppi di carcinoma gastrico precoce e carcinoma gastrico avanzato, con una media di 30 casi in ciascun gruppo. L'altro lotto (il secondo lotto) è costituito da persone sane e 30 casi di gastrite atrofica cronica, cancro gastrico precoce e 30 casi di gastrite atrofica cronica. Ci sono stati 100 casi in ciascuno dei gruppi di cancro gastrico avanzato e 20 casi in ciascuno di cancro al fegato, cancro del colon-retto e cancro al seno. I campioni di siero e plasma ottenuti dai soggetti vengono utilizzati per vagliare potenziali marcatori tumorali del cancro gastrico, verificare la praticabilità di modelli diagnostici di marcatori tumorali del cancro gastrico e kit di test consolidati.

1. Reclutamento di pazienti con carcinoma gastrico: vengono selezionati rispettivamente 30 casi di pazienti con carcinoma gastrico in fase iniziale (T1, T2) e di pazienti con carcinoma gastrico avanzato (T3, T4). La stadiazione del cancro gastrico si basa sull'ottava edizione della stadiazione TNM dell'UICC (International Union Against Cancer). I soggetti sono stati sottoposti a screening in base ai requisiti del modulo di consenso informato.
2. Reclutamento di persone sane: 30 volontari senza patologie sottostanti vengono selezionati come gruppo di controllo sano. I soggetti sono stati sottoposti a screening in base ai requisiti del modulo di consenso informato.
3. Preparazione del campione: raccolta endovenosa per ottenere campioni di sangue intero di pazienti e controlli sani. Il requisito del campione per ogni soggetto è di 600 ul di siero e plasma.

(2) Screening con chip anticorpale per potenziali marcatori tumorali di cancro gastrico per la prima volta Per eseguire lo screening di potenziali marcatori proteici di cancro gastrico, è stato utilizzato il chip quantitativo per anticorpi ad alta produttività di Raybiotech (AAH-BLG-2000) per misurare 640 nel primo lotto di soggetti (carcinoma gastrico in fase iniziale, carcinoma gastrico avanzato e controlli sani ogni 30). Una specie di proteina umana. Escludere in via preliminare proteine ​​differenziali, condurre analisi bioinformatiche e infine schermare proteine ​​espresse in modo differenziato rilevanti per la ricerca.

2Chip di anticorpi personalizzato per verificare i marcatori tumorali del cancro gastrico Al fine di verificare ulteriormente i marcatori tumorali candidati per la diagnosi di cancro gastrico, le proteine ​​differenziali esaminate nella fase precedente sono state personalizzate per i chip di anticorpi. Utilizzare i campioni di siero del soggetto (secondo lotto) per la potenziale verifica dei biomarcatori. In base ai risultati del test, le proteine ​​scarsamente specifiche vengono scartate e le proteine ​​più specifiche vengono conservate.

3. Istituzione del modello diagnostico Utilizzare l'analisi di regressione per combinare e confrontare più proteine ​​differenziali, eseguire analisi quantitative, stabilire una curva standard, stabilire un modello diagnostico per proteine ​​differenziali altamente specifiche e misurare ulteriormente la praticabilità del modello diagnostico di proteine ​​differenziali altamente specifiche.

4 Sviluppo del kit Sono stati prodotti anticorpi monoclonali come anticorpi di cattura per vari marcatori tumorali ad alta specificità e infine è stato istituito e promosso nella pratica clinica un kit per la diagnosi del cancro gastrico.

Istituzione e misurazione delle prestazioni del kit diagnostico del cancro gastrico.

1. Stabilire kit diagnostici per il cancro gastrico, materiali di riferimento per il controllo della qualità e formulare standard pertinenti sulla base dei risultati della ricerca di cui sopra.
2. Test di precisione: diluire i materiali di riferimento per il controllo di qualità autoprodotti a 3 concentrazioni di alta, media e bassa, ciascuna con 3 fori replicati, ripetere il test 10 volte e calcolare la media, la deviazione standard e il valore del test di ciascun controllo di qualità prodotto di riferimento. Valore del coefficiente di variazione (CV).
3. Rilevamento della sensibilità: prendere lo standard di riferimento zero (proteina di differenza specifica) come campione e sostituire il valore medio del valore di fluorescenza misurato 20 volte più 2 volte la deviazione standard nell'equazione della curva standard per calcolare il volume minimo di rilevamento.
4. Test di stabilità: dividi i kit fatti da te in due gruppi e mettili in un congelatore a 4 ℃ per 6 mesi e 37 ℃ per 7 giorni. Vengono misurati l'aspetto fisico del kit, la linearità della curva dose-risposta, l'accuratezza, la sensibilità e il volume minimo di rilevamento e altri indicatori e il metodo di rilevamento specifico è lo stesso dei passaggi precedenti (2) e (3).
5. Confronto con altri metodi di rilevamento del cancro gastrico: utilizzare kit di rilevamento auto-preparati per rilevare 30 casi di campioni di siero di cancro gastrico precoce, 30 casi di campioni di siero di cancro gastrico avanzato e 30 campioni di siero umano sano e analizzare i risultati del test.
6. Promozione e ottimizzazione del kit. Il campionamento casuale viene eseguito tra i pazienti che utilizzano questo kit per osservare il tasso di diagnosi di carcinoma gastrico clinico precoce e la prognosi corrispondente e analizzare i risultati della visita di ritorno. In base ai risultati della visita di ritorno, continuare a condurre esperimenti corrispondenti per ottimizzare le prestazioni del kit, ad esempio: migliorarne l'accuratezza, la sensibilità e così via.