L-アルギニンではなく L-オルニチンの補給は、歯周炎における CD68+ および CD163+ マクロファージの密度を増加させます

研究デザイン 本研究は、元の研究研究でした。 ステージ II ～ III およびグレード B の全身性歯周炎と診断された 75 人 (女性 38 人、男性 37 人、それぞれ 51% および 49%) が研究に含まれました。 歯周炎は、歯周およびインプラント周囲疾患および状態の分類2017の基準を使用して診断されました。 ステージ II の歯周炎は、最大損失部位の歯間 CAL が 3 ～ 4 mm、PPD が 4 ～最大 5 mm、X 線で歯根冠状 3 分の 1 に骨損失があり、歯周炎による歯の損失がない場合に診断されました。 ステージ III は、歯間 CAL が 5 mm 以上、X 線写真による骨損失が歯根の中央または根尖 3 分の 1 に達している、歯周炎による歯の損失が 4 以下の場合に診断されました。 すべての場合において、歯周炎は一般化されたパターン (関与する歯の 30% を超える) を有し、間接的な証拠に基づいて、進行のパターンとしてグレード B を示しました (歯根の長さを被験者の年齢で割ったパーセンテージとして表される X 線写真による骨損失は、 0.25 ～ 1.0)。

患者は層別無作為化によって次の 3 つのグループに分類されました。 Argグループ（患者は、SRP後10日間、経口L-アルギニンアスパラギン酸（Yuria-Pharm、ウクライナ）を1g t.i.d.の用量で投与された、n = 25）。 Orn グループ (患者は、SRP 後 15 日間、1 日 3 回 3 g の用量で経口 L-オルニチン アスパラギン酸 (Farmak、ウクライナ) を投与された、n = 25)。 アルギニンとオルニチンは、ウクライナで使用可能なこれらの医薬品の指示に従って使用しました. 研究中、すべての患者は、配給量とレジメンを変更することなく、安定した食事をとっていました。

すべての参加者について、性別と年齢が記録され、歯周ポケットの深さ (PPD)、臨床付着レベル (CAL)、プロービング時の出血 (BoP) などの歯周パラメーターが、すべての歯の 6 つの歯周部位から測定されました (3 番目の歯を除く)。大臼歯) 手動歯周プローブ (0106.DT06.CP10、Den Tag、イタリアとラベル付けされた歯科用エクスプローラー ツール) を使用して、1 人の校正済み検査官によって行われます。 PPD と CAL は 1 mm 単位で測定されました。

すべての患者は、治療前と1か月±5日後に臨床検査を受けました。

歯肉組織サンプルの収集 正確な免疫組織化学的研究のために、治療前と 1 か月後に局所麻酔下で 1 グループあたり 5 人の選択された患者で約 3x3 mm の歯肉生検を切除しました。 生検は、適切な歯科および歯周処置の周囲の最も深いポケットを示す単一の部位から、同じ時点で得られました。 これらの組織生検の除去は、最初の治療計画を妨げたり、予想される臨床転帰に影響を与えたりしませんでした。 収集後、生検を 4% ホルマリン溶液で 24 時間固定し、脱水し、パラフィンに包埋しました。

免疫組織化学および抗体 厚さ２～３μｍのパラフィン切片を脱パラフィンし、脱水した。 クエン酸バッファー、水素の力 (pH) 6 での熱誘導エピトープ回復は、電子レンジでスライドを連続的に加熱することによって実行され、その後冷却し、リン酸緩衝生理食塩水 (PBS) ですすぎ、ブロックされた試薬とインキュベートし、すすぎました、およびマウスモノクローナルCD68抗体（1:30、クローンPG-M1、Diagnostic BioSystems、ハーグ、オランダ）または抗CD163（1：100、クローン10D6、Diagnostic BioSystems、ハーグ、オランダ）とインキュベートしました。 次に切片を 2-steps Mouse/Rabbit PolyVue Plus™ HRP/DAB Detection System (Diagnostic BioSystems, The Hague, The Netherlands) で染色し、Mayer's haemalaun で対比染色しました。 ＰＢＳを陰性対照として使用し、リンパ節組織を陽性対照として使用した。

免疫組織化学染色の評価 CD68+ および CD163+ マクロファージ (Mφ) は、光学顕微鏡 × 400 で細胞数をカウントすることによって推定され、各スライスから 5 つの領域が選択され、5 つのカウントすべてが統計用に取得されました。 細胞浸潤領域は炎症に直接関係しているため、免疫陽性 Mφ をカウントしました。 10,000 μm2 あたりの細胞数は、免疫陽性細胞密度として計算されました。 写真は、光学顕微鏡Axio Lab.A1（Carl Zeiss、ゲッティンゲン、ドイツ）（×400）を使用して取得しました。

統計分析 小さなサンプル サイズは、高い効果サイズ、不明な帰無分布、および適切な検出力のノンパラメトリック統計による補償の期待によって正当化されました。 正確なサンプル サイズの計算は実行されませんでした。

PPD と CAL の平均値は、PD が 4mm を超える部位 (患部) について計算されました。 GraphPad Prism 5ソフトウェア（GraphPad Software、サンディエゴ、米国）を使用して、記述統計、カイ二乗検定、一方向ANOVA、および多重比較のためのノンパラメトリックANOVA検定により、統計分析を実行しました：Friedman - 従属変数の場合、Kruskal-Wallis test - 事後分析による独立変数用。 細胞数の記述統計では、非正規分布のためにパーセンタイル範囲も使用されました。 CD68+/CD163+ 比は、グループ間の t 検定比較とスピアマン相関チェックによって評価されました。 のP値