L-ornitin kiegészítés, de L-arginin nem, növeli a CD68+ és CD163+ makrofágok sűrűségét parodontitisben

Tanulmánytervezés A jelen munka az eredeti kutatási tanulmány volt. 75 személyt vontak be a vizsgálatba, akiknél II-III. stádiumú és B fokozatú generalizált parodontitis diagnosztizáltak (38 nő és 37 férfi, 51%, illetve 49%). A fogágygyulladást a 2017-es fogágybetegségek és -állapotok osztályozási kritériumai alapján diagnosztizálták. A periodontitis II. stádiumát a legnagyobb veszteség helyén 3-4 mm-es interdentalis CAL, 4-től maximum 5 mm-es PPD, a radiológiai csontvesztés a gyökérkoronális harmadban és a parodontitis miatti fogveszteség hiányában diagnosztizálták. A III. stádiumot ≥5 mm-es interdentalis CAL jelenlétében diagnosztizálták, a radiológiai csontvesztés a gyökér középső vagy apikális harmadáig terjedt, ≤4 fogvesztés parodontitis miatt. A parodontitis minden esetben általánosított mintázatot mutatott (az érintett fogak több mint 30%-a), és a progresszió mintázata B fokozatú volt, közvetett bizonyítékok alapján (a radiográfiás csontvesztést a gyökérhossz százalékában kifejezve osztva az alany életkorával 0,25-1,0).

A betegeket rétegzett randomizálással három csoportba soroltuk: az SRP-csoportba (a betegek teljes szájú eljárásként kaptak skálázást és gyökérgyalulást, n=25); az Arg-csoport (a betegek szájon át L-arginin-aszpartátot (Yuria-Pharm, Ukrajna) kaptak napi 1 g dózisban az SRP után 10 napig, n=25); és az Orn-csoport (a betegek szájon át L-ornitin-aszpartátot (Farmak, Ukrajna) kaptak napi 3 g dózisban az SRP után 15 napig, n=25). Arginint és ornitint használtunk az Ukrajnában kapható gyógyszerekhez az utasítások szerint. A vizsgálat során minden beteg stabil étrenden volt, anélkül, hogy megváltoztatta volna az étrendjét és az étrendjét.

Minden résztvevőnél feljegyezték a nemet és az életkort, és a parodontális paramétereket, például a parodontális zsebmélységet (PPD), a klinikai kötődési szintet (CAL) és a vérzés szondázáskor (BoP) méréseket végeztek hat fogágyhelyről (a harmadik kivételével). őrlőfogak) egyetlen kalibrált vizsgálóval, kézi periodontális szondával (0106.DT06.CP10 jelzésű fogászati ​​felfedező eszköz, Den Tag, Olaszország). A PPD-t és a CAL-t 1 mm-es pontossággal mértük.

Minden beteget klinikailag megvizsgáltak a kezelés előtt és 1 hónap ± 5 nap után.

Fogínyszövetminták gyűjtése A precíz immunhisztokémiai vizsgálathoz a kb. 3x3 mm-es ínybiopsziát helyi érzéstelenítésben kimetsszük a kezelés előtt, majd 1 hónappal később csoportonként 5 kiválasztott betegnél. A biopsziákat ugyanabban az időpontban vettük, egyetlen helyről, ahol a legmélyebb zseb látható a megfelelő fogászati ​​és parodontológiai eljárások körül. Ezen szövetbiopsziák eltávolítása nem befolyásolta a kezdeti kezelési tervet, és nem befolyásolta a várható klinikai eredményeket. Az összegyűjtés után a biopsziákat 4%-os formalin oldatban rögzítettük 24 órás fixálásig, dehidratáltuk és paraffinba ágyaztuk.

Immunhisztokémia és antitestek A 2-3 μm vastag paraffin metszeteket paraffinmentesítettük és dehidratáltuk. Hő által kiváltott epitóp-kinyerést citrát pufferben, hidrogénteljesítmény (pH) 6, a tárgylemezek mikrohullámú sütőben történő egymás utáni melegítésével, majd hagytuk lehűlni, foszfáttal pufferolt sóoldattal (PBS) öblítettük, blokkolt reagenssel inkubáltuk, öblítettük. és egér monoklonális CD68 antitestekkel (1:30, PG-M1 klón, Diagnostic BioSystems, Hága, Hollandia) vagy anti-CD163-mal (1:100, 10D6 klón, Diagnostic BioSystems, Hága, Hollandia) inkubáltuk. Ezután a metszeteket a 2-lépéses Mouse/Rabbit PolyVue Plus™ HRP/DAB detektáló rendszerrel (Diagnostic BioSystems, Hága, Hollandia) megfestettük, majd Mayer-féle haemalaunnal ellenfestettük. Negatív kontrollként PBS-t, pozitív kontrollként a nyirokcsomószövetet használtuk.

Az immunhisztokémiai festődés értékelése A CD68+ és CD163+ makrofágokat (Mφ) úgy becsültük meg, hogy fénymikroszkóppal megszámoltuk a sejtek számát × 400 az intenzív infiltratív területeken, mindegyik szeletből 5 régiót választottunk ki, és mind az 5 számlálást statisztikai célból vettük. Immunpozitív Mφ-eket számoltunk a sejtinfiltráció területein, mivel ezek közvetlenül kapcsolódnak a gyulladáshoz. A 10 000 μm2-re jutó sejtek számát immunpozitív sejtsűrűségként számítottuk ki. A fényképeket az Axio Lab.A1 fénymikroszkóppal (Carl Zeiss, Göttingen, Németország) (×400) készítettük.

Statisztikai elemzés A kis mintaméretet a nagy hatásméret, az ismeretlen nulleloszlás elvárása indokolta, és megfelelő teljesítményű, nem parametrikus statisztikákkal kompenzálták. Pontos mintanagyság-számításra nem került sor.

A PPD és CAL átlagát azokra a helyekre számítottuk, amelyeknél a PD > 4 mm (érintett helyek). A statisztikai elemzést GraphPad Prism 5 szoftverrel (GraphPad Software, San Diego, USA) végeztük leíró statisztikák, khi-négyzet teszt, egyutas ANOVA és nem paraméteres ANOVA tesztek segítségével többszörös összehasonlításhoz: Friedman - függő változókra, Kruskal-Wallis teszt - független változókra, post-hoc elemzéssel. A cellaszámok leíró statisztikáihoz a százalékos tartományokat is használták a nem normális eloszlások miatt. A CD68+/CD163+ arányt csoportok közötti t-próbák összehasonlításával és Spearman korreláció-ellenőrzéssel határoztuk meg. P értékei