补充 L-鸟氨酸而非 L-精氨酸可增加牙周炎中 CD68+ 和 CD163+ 巨噬细胞的密度

研究设计 目前的工作是原始研究。 该研究包括 75 名诊断为 II-III 期和 B 级广泛性牙周炎的个体（38 名女性和 37 名男性，分别占 51% 和 49%）。 使用 2017 年牙周和种植体周围疾病分类标准诊断牙周炎。 牙周炎的 II 期诊断为在最大损失部位存在 3 至 4 毫米的牙间 CAL，4 至最大 5 毫米的 PPD，根冠三分之一处的影像学骨丢失，并且没有因牙周炎导致的牙齿丢失。 III期诊断为存在≥5mm的牙间CAL，影像学骨质流失延伸至牙根中部或根尖1/3，牙周炎导致的牙齿缺失≤4颗。 在所有情况下，牙周炎都具有普遍模式（>30% 的牙齿受累）和 B 级作为进展模式，基于间接证据（放射照相骨丢失表示为牙根长度除以受试者年龄的百分比来自0.25 至 1.0)。

患者通过分层随机分组分为三组：SRP 组（患者接受刮治和牙根平整作为全口手术，n=25）； Arg 组（患者在 SRP 后 10 天接受口服 L-精氨酸天冬氨酸（Yuria-Pharm，乌克兰），剂量为 1 g t.i.d.，n=25）；和 Orn 组（患者在 SRP 后 15 天接受口服 L-鸟氨酸天门冬氨酸（Farmak，乌克兰），剂量为 3 g t.i.d.，n=25）。 我们根据可在乌克兰使用的这些药物的说明使用精氨酸和鸟氨酸。 在研究期间，所有患者都保持稳定的饮食，没有改变他们的口粮和团。

对于所有参与者，记录性别和年龄，并从所有牙齿的六个牙周部位（第三个除外）获取牙周袋深度（PPD）、临床附着水平（CAL）和探诊出血（BoP）等牙周参数磨牙）由单个校准检查员使用手动牙周探针（牙科探险家工具标记为 0106.DT06.CP10，Den Tag，意大利）。 PPD 和 CAL 的测量精确到 1 mm。

所有患者在治疗前和治疗后 1 个月±5 天后进行临床检查。

牙龈组织样本的收集为了进行精确的免疫组织化学研究，在治疗前和 1 个月后，每组选择 5 名患者，在局部麻醉下切除约 3x3 毫米的牙龈活检。 活组织检查是在相同的时间点，从显示合适的牙科和牙周手术周围最深袋的单个部位获得的。 移除这些组织活检不会干扰初始治疗计划或影响预期的临床结果。 收集后，将活组织检查固定在 4% 福尔马林溶液中固定 24 小时，脱水并包埋在石蜡中。

免疫组织化学和抗体 石蜡切片，2-3 μm 厚，脱石蜡并脱水。 柠檬酸盐缓冲液中的热诱导表位修复，氢的功率 (pH) 6，通过在微波炉中连续加热载玻片，然后冷却，用磷酸盐缓冲盐水 (PBS) 冲洗，用封闭试剂孵育，冲洗, 并与小鼠单克隆 CD68 抗体（1:30，克隆 PG-M1，Diagnostic BioSystems，荷兰海牙）或抗 CD163（1：100，克隆 10D6，Diagnostic BioSystems，荷兰海牙）一起孵育。 然后用 2-steps Mouse/Rabbit PolyVue Plus™ HRP/DAB Detection System（Diagnostic BioSystems，The Hague，The Netherlands）对切片进行染色，并用 Mayer's haemalaun 进行复染。 PBS用作阴性对照，淋巴结组织-用作阳性对照。

免疫组织化学染色的评价CD68+和CD163+巨噬细胞(Mφs)通过光学显微镜×400计数密集浸润区的细胞数来估计，每片选择5个区域，并统计所有5个计数。 我们计算了细胞浸润区域的免疫阳性 Mφs，因为它们与炎症直接相关。 每 10 000 μm2 的细胞数计算为免疫阳性细胞密度。 照片是使用光学显微镜 Axio Lab.A1（Carl Zeiss，Göttingen，Germany）（×400）获得的。

统计分析 小样本量的合理性在于高效应量的预期、未知的零分布，并用足够的非参数统计数据进行补偿。 没有进行精确的样本量计算。

计算 PD > 4mm 的部位（受影响的部位）的 PPD 和 CAL 平均值。 使用 GraphPad Prism 5 软件（GraphPad Software, San Diego, USA）通过描述性统计、卡方检验、单向方差分析和非参数方差分析进行多重比较的统计分析：Friedman - 对于因变量，Kruskal-Wallis测试 - 对于自变量，具有事后分析。 对于细胞数量的描述性统计，由于非正态分布，还使用了百分位数范围。 CD68+/CD163+ 比率通过组间 t 检验比较和 Spearman 相关检查进行评估。 P 值