La suplementación con L-ornitina pero no con L-arginina aumenta la densidad de macrófagos CD68+ y CD163+ en la periodontitis

Diseño del estudio El presente trabajo fue el estudio de investigación original. Se incluyeron en el estudio 75 individuos con diagnóstico de periodontitis generalizada en estadios II-III y grado B (38 mujeres y 37 hombres, 51% y 49%, respectivamente). La periodontitis se diagnosticó utilizando los criterios de la Clasificación de Enfermedades y Condiciones Periodontales y Periimplantarias 2017. El estadio II de periodontitis se diagnosticó en presencia de 3 a 4 mm de CAL interdental en el sitio de mayor pérdida, de 4 a un máximo de 5 mm de PPD, la pérdida ósea radiográfica en el tercio coronal de la raíz y sin pérdida de dientes debido a la periodontitis. El estadio III se diagnosticó en presencia de ≥ 5 mm de CAL interdental, la pérdida ósea radiográfica se extendía al tercio medio o apical de la raíz, ≤ 4 dientes perdidos debido a periodontitis. En todos los casos, la periodontitis tuvo un patrón generalizado (>30% de los dientes afectados) y un grado B como patrones de progresión, basados ​​en evidencia indirecta (la pérdida ósea radiográfica expresada como porcentaje de la longitud de la raíz dividida por la edad del sujeto era de 0,25 a 1,0).

Los pacientes se agruparon mediante aleatorización estratificada en tres grupos: el Grupo SRP (los pacientes recibieron raspado y alisado radicular como un procedimiento de boca completa, n=25); el Grupo Arg (los pacientes recibieron aspartato de L-arginina por vía oral (Yuria-Pharm, Ucrania) a una dosis de 1 g tres veces al día durante 10 días después de la SRP, n = 25); y el Grupo Orn (los pacientes recibieron aspartato de L-ornitina por vía oral (Farmak, Ucrania) en una dosis de 3 g tres veces al día durante 15 días después de la SRP, n = 25). Utilizamos arginina y ornitina de acuerdo con las instrucciones de estos medicamentos disponibles para su uso en Ucrania. Durante el estudio, todos los pacientes mantuvieron una dieta estable, sin cambiar sus raciones y regimientos.

Se registraron el sexo y la edad de todos los participantes, y se tomaron medidas de parámetros periodontales como la profundidad de la bolsa periodontal (PPD), el nivel de inserción clínica (CAL) y el sangrado al sondaje (BoP) de seis sitios periodontales en todos los dientes (excepto el tercero). molares) por un solo examinador calibrado usando una sonda periodontal manual (herramienta de exploración dental etiquetada 0106.DT06.CP10, Den Tag, Italia). Se midieron PPD y CAL con una precisión de 1 mm.

Todos los pacientes fueron examinados clínicamente antes del tratamiento y después de 1 mes ± 5 días.

Recolección de muestras de tejido gingival Para el estudio inmunohistoquímico preciso, se extirpó la biopsia gingival de aproximadamente 3x3 mm bajo anestesia local antes del tratamiento y 1 mes después en 5 pacientes seleccionados por grupo. Las biopsias se obtuvieron en los mismos puntos de tiempo, de un solo sitio que mostraba la bolsa más profunda alrededor de los procedimientos dentales y periodontales adecuados. La extracción de estas biopsias de tejido no interfirió con el plan de tratamiento inicial ni influyó en los resultados clínicos esperados. Después de la recolección, las biopsias se fijaron en una solución de formalina al 4 % durante 24 h de fijación, se deshidrataron y se incluyeron en parafina.

Inmunohistoquímica y anticuerpos Se desparafinizaron y deshidrataron secciones de parafina de 2-3 µm de espesor. La recuperación del epítopo inducida por calor en tampón de citrato, potencia de hidrógeno (pH) 6, se realizó calentando sucesivamente los portaobjetos en el horno de microondas, luego se dejó enfriar, se enjuagó con solución salina tamponada con fosfato (PBS), se incubó con reactivo bloqueado, se enjuagó , y se incubaron con anticuerpos monoclonales de ratón CD68 (1:30, clon PG-M1, Diagnostic BioSystems, La Haya, Países Bajos) o anti-CD163 (1:100, clon 10D6, Diagnostic BioSystems, La Haya, Países Bajos). A continuación, las secciones se tiñeron con el sistema de detección HRP/DAB PolyVue Plus™ de ratón/conejo de 2 pasos (Diagnostic BioSystems, La Haya, Países Bajos), y se contrastaron con hemalaun de Mayer. Se usó PBS como control negativo, el tejido del ganglio linfático, como control positivo.

Evaluación de la tinción inmunohistoquímica Los macrófagos CD68+ y CD163+ (Mφs) se estimaron contando el número de células al microscopio óptico ×400 en áreas de infiltración intensiva, se seleccionaron 5 regiones de cada corte y se tomaron los 5 recuentos para las estadísticas. Contamos Mφs inmunopositivos en las áreas de infiltración celular, ya que están directamente relacionados con la inflamación. El número de células por 10 000 μm2 se calculó como densidad de células inmunopositivas. Las fotografías se obtuvieron utilizando el microscopio óptico Axio Lab.A1 (Carl Zeiss, Göttingen, Alemania) (×400).

Análisis estadístico El tamaño pequeño de la muestra se justificó por la expectativa de un tamaño del efecto alto, distribución nula desconocida y compensado con estadísticas no paramétricas de potencia adecuada. No se realizó un cálculo preciso del tamaño de la muestra.

Se calcularon las medias de PPD y CAL para los sitios con PD>4 mm (sitios afectados). El análisis estadístico se realizó con el software GraphPad Prism 5 (GraphPad Software, San Diego, EE. UU.) mediante estadística descriptiva, prueba de chi-cuadrado, ANOVA unidireccional y pruebas ANOVA no paramétricas para comparaciones múltiples: Friedman - para variables dependientes, Kruskal-Wallis prueba - para variables independientes, con análisis post-hoc. Para las estadísticas descriptivas de los números de celdas, también se usaron los rangos de percentiles debido a las distribuciones no normales. La relación CD68+/CD163+ se evaluó mediante comparaciones de pruebas t entre grupos y verificación de correlación de Spearman. valores p de