Tilskudd med L-ornitin men ikke L-arginin øker tettheten av CD68+ og CD163+ makrofager ved periodontitt

Studiedesign Dette arbeidet var den opprinnelige forskningsstudien. 75 individer med diagnosen generalisert periodontitt i stadier II-III og grad B (henholdsvis 38 kvinner og 37 menn, 51 % og 49 %) ble inkludert i studien. Periodontitt ble diagnostisert ved å bruke kriteriene i Klassifikasjon av periodontale og periimplantatsykdommer og tilstander 2017. Stadium II av periodontitt ble diagnostisert i nærvær av 3 til 4 mm interdental CAL på stedet med størst tap, 4 til maksimalt 5 mm PPD, radiografisk bentap ved roten koronal tredjedel, og ingen tanntap på grunn av periodontitt. Stadium III ble diagnostisert i nærvær av ≥5 mm interdental CAL, det radiografiske beintapet strekker seg til den midtre eller apikale tredjedelen av roten, ≤4 tap av tenner på grunn av periodontitt. I alle tilfeller hadde periodontitt et generalisert mønster (>30 % av tennene involvert) og grad B som mønster av progresjonen, basert på indirekte bevis (radiografisk bentap uttrykt som en prosentandel av rotlengde delt på forsøkspersonens alder var fra 0,25 til 1,0).

Pasientene ble gruppert etter stratifisert randomisering i tre grupper: SRP-gruppen (pasienter mottok skalering og rotplaning som en full-munnprosedyre, n=25); Arg-gruppen (pasienter fikk oralt L-argininaspartat (Yuria-Pharm, Ukraina) i en dose på 1 g t.i.d. i 10 dager etter SRP, n=25); og Orn-gruppen (pasienter fikk oralt L-ornitinaspartat (Farmak, Ukraina) i en dose på 3 g t.i.d. i 15 dager etter SRP, n=25). Vi brukte arginin og ornitin i henhold til instruksjonene for disse medisinene som er tilgjengelige for bruk i Ukraina. Under studien var alle pasienter på et stabilt kosthold, uten å endre rasjoner og regimenter.

For alle deltakerne ble kjønn og alder registrert, og periodontale parametere som periodontal lommedybde (PPD), klinisk tilknytningsnivå (CAL) og blødning ved sondering (BoP) målinger ble tatt fra seks periodontale steder på alle tenner (unntatt den tredje molarer) av en enkelt kalibrert undersøker ved bruk av en manuell periodontal sonde (dental explorer-verktøy merket 0106.DT06.CP10, Den Tag, Italia). PPD og CAL ble målt til nærmeste 1 mm.

Alle pasienter ble klinisk undersøkt før behandling og etter 1 måned ± 5 dager.

Innsamling av gingivalvevsprøver For den nøyaktige immunhistokjemiske studien ble tannkjøttbiopsien på ca. 3x3 mm skåret ut under lokalbedøvelse før behandling og 1 måned senere hos 5 utvalgte pasienter per gruppe. Biopsier ble tatt på de samme tidspunktene, fra et enkelt sted med den dypeste lommen rundt passende tann- og periodontale prosedyrer. Fjerning av disse vevsbiopsiene forstyrret ikke den første behandlingsplanen eller påvirket de forventede kliniske resultatene. Etter innsamling ble biopsier fiksert i en 4% formalinløsning i 24 timers fiksering, dehydrert og innebygd i parafin.

Immunhistokjemi og antistoffer Parafinsnitt, 2-3 μm i tykkelse ble avparafinisert og dehydrert. Varmeindusert epitopinnhenting i sitratbuffer, kraft av hydrogen (pH) 6, ble utført ved suksessiv oppvarming av objektglassene i mikrobølgeovnen, deretter avkjølt, skylt med fosfatbufret saltvann (PBS), inkubert med blokkert reagens, skylt , og inkubert med muse monoklonale CD68-antistoffer (1:30, klon PG-M1, Diagnostic BioSystems, Haag, Nederland) eller anti-CD163 (1:100, klon 10D6, Diagnostic BioSystems, Haag, Nederland). Deretter ble seksjoner farget med 2-trinns mus/kanin PolyVue Plus™ HRP/DAB-deteksjonssystem (Diagnostic BioSystems, Haag, Nederland), og motfarget med Mayers hemalaun. PBS ble brukt som negativ kontroll, lymfeknutevevet - som positiv kontroll.

Evaluering av immunhistokjemisk farging CD68+ og CD163+ makrofager (Mφs) ble estimert ved å telle antall celler ved lysmikroskop ×400 i intensive infiltrative områder, 5 regioner fra hver skive ble valgt, og alle 5 tellingene ble tatt for statistikk. Vi telte immunopositive Mφ-er i områdene med celleinfiltrasjon, siden de er direkte relatert til betennelse. Antall celler per 10 000 μm2 ble beregnet som immunopositiv celletetthet. Bilder ble tatt med lysmikroskopet Axio Lab.A1 (Carl Zeiss, Göttingen, Tyskland) (×400).

Statistisk analyse Liten prøvestørrelse ble begrunnet med forventningen om en høy effektstørrelse, ukjent nullfordeling og kompensert med tilstrekkelig kraft ikke-parametrisk statistikk. Nøyaktig beregning av prøvestørrelse ble ikke utført.

Gjennomsnitt av PPD og CAL ble beregnet for steder med PD>4 mm (påvirkede steder). Statistisk analyse ble utført ved bruk av GraphPad Prism 5-programvare (GraphPad Software, San Diego, USA) ved hjelp av beskrivende statistikk, kjikvadrattest, enveis ANOVA og ikke-parametriske ANOVA-tester for flere sammenligninger: Friedman - for avhengige variabler, Kruskal-Wallis test - for uavhengige variabler, med post-hoc analyse. For beskrivende statistikk over celletall ble persentilområdene også brukt på grunn av ikke-normale fordelinger. CD68+/CD163+-forholdet ble vurdert ved sammenligninger mellom grupper av t-tester og Spearman-korrelasjonskontroll. P-verdier av