L-ornitiinin täydentäminen, mutta ei L-arginiinilla, lisää CD68+- ja CD163+-makrofagien tiheyttä parodontiittissa

Tutkimuksen suunnittelu Tämä työ oli alkuperäinen tutkimustutkimus. Tutkimukseen osallistui 75 henkilöä, joilla oli diagnosoitu yleistynyt parodontiitti vaiheissa II-III ja aste B (38 naista ja 37 miestä, vastaavasti 51 % ja 49 %). Parodontiitti diagnosoitiin vuoden 2017 periodontaali- ja periimplanttitautien ja -tilojen luokituksen kriteereillä. Parodontiitin II vaihe diagnosoitiin 3–4 mm:n hampaiden välisen CAL:n läsnä ollessa suurimman menetyskohdassa, 4–5 mm:n PPD, röntgenluukado juurikoronaalikolmanneksessa, eikä parodontiittista johtuvaa hampaiden menetystä. Vaihe III diagnosoitiin ≥5 mm:n hampaiden välisen CAL:n läsnä ollessa, radiografinen luukato ulottui juuren keski- tai apikaaliseen kolmannekseen, ≤4 hampaan menetys parodontiitin vuoksi. Kaikissa tapauksissa parodontiitti oli yleistynyt (> 30 % hampaista) ja aste B etenemismallina, perustuen epäsuoraan näyttöön (radiografinen luukado ilmaistuna prosentteina juuren pituudesta jaettuna kohteen iällä 0,25 - 1,0).

Potilaat ryhmiteltiin ositetun satunnaistuksen perusteella kolmeen ryhmään: SRP-ryhmä (potilaat saivat skaalaus- ja juuren höyläyksen koko suun toimenpiteenä, n=25); Arg-ryhmä (potilaat saivat suun kautta L-arginiiniaspartaattia (Yuria-Pharm, Ukraina) annoksella 1 g t.i.d. 10 päivän ajan SRP:n jälkeen, n = 25); ja Orn-ryhmä (potilaat saivat suun kautta L-ornitiiniaspartaattia (Farmak, Ukraina) annoksella 3 g t.i.d. 15 päivän ajan SRP:n jälkeen, n = 25). Käytimme arginiinia ja ornitiinia näiden Ukrainassa käytettävien lääkkeiden ohjeiden mukaan. Tutkimuksen aikana kaikki potilaat olivat vakaalla ruokavaliolla muuttamatta annosta ja rykmenttiä.

Kaikilta osallistujilta rekisteröitiin sukupuoli ja ikä, ja periodontaaliset parametrit, kuten periodontaalisen taskun syvyys (PPD), kliinisen kiinnittymisen taso (CAL) ja verenvuoto koetusmittauksissa (BoP) otettiin kuudesta periodontaalisesta kohdasta kaikista hampaista (kolmatta lukuun ottamatta). poskihampaista) yhdellä kalibroidulla tutkijalla käyttäen manuaalista parodontaalianturia (hammastutkimustyökalu, joka on merkitty 0106.DT06.CP10, Den Tag, Italia). PPD ja CAL mitattiin 1 mm:n tarkkuudella.

Kaikki potilaat tutkittiin kliinisesti ennen hoitoa ja 1 kuukauden ± 5 päivän kuluttua.

Ienkudosnäytteiden kerääminen Tarkkaa immunohistokemiallista tutkimusta varten noin 3x3 mm:n ienbiopsia leikattiin paikallispuudutuksessa ennen hoitoa ja kuukauden kuluttua viideltä valitulta potilaalta ryhmää kohden. Biopsiat otettiin samoissa aikapisteissä yhdestä paikasta, jossa oli syvin tasku sopivien hammas- ja parodontaalitoimenpiteiden ympärillä. Näiden kudosbiopsioiden poistaminen ei vaikuttanut alkuperäiseen hoitosuunnitelmaan tai odotettuihin kliinisiin tuloksiin. Keräyksen jälkeen biopsiat kiinnitettiin 4-prosenttisessa formaliiniliuoksessa 24 tunnin kiinnityksen ajaksi, dehydratoitiin ja upotettiin parafiiniin.

Immunohistokemia ja vasta-aineet Parafiinileikkeet, paksuus 2-3 μm, deparafiini poistettiin ja dehydratoitiin. Lämmön aiheuttama epitooppihaku sitraattipuskurissa, vedyn teho (pH) 6, suoritettiin kuumentamalla objektilasit peräkkäin mikroaaltouunissa, annettiin sitten jäähtyä, huuhdeltiin fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella (PBS), inkuboitiin estettyjen reagenssien kanssa, huuhdeltiin ja inkuboitiin hiiren monoklonaalisten CD68-vasta-aineiden (1:30, klooni PG-M1, Diagnostic BioSystems, Haag, Alankomaat) tai anti-CD163:n (1:100, klooni 10D6, Diagnostic BioSystems, Haag, Alankomaat) kanssa. Sitten leikkeet värjättiin 2-vaiheisella Mouse/Rabbit PolyVue Plus™ HRP/DAB -tunnistusjärjestelmällä (Diagnostic BioSystems, Haag, Alankomaat) ja vastavärjättiin Mayerin haemalaunilla. PBS:ää käytettiin negatiivisena kontrollina, imusolmukekudosta - positiivisena kontrollina.

Immunohistokemiallisen värjäytymisen arviointi CD68+- ja CD163+-makrofagit (Mφ:t) arvioitiin laskemalla solujen lukumäärä valomikroskoopilla × 400 intensiivisillä infiltratiivisilla alueilla, kustakin viipaleesta valittiin 5 aluetta ja kaikki 5 laskentaa otettiin tilastoja varten. Laskemme immunopositiiviset Mφ:t solujen infiltraatioalueilla, koska ne liittyvät suoraan tulehdukseen. Solujen lukumäärä per 10 000 μm2 laskettiin immunopositiivisten solutiheyksinä. Valokuvat saatiin käyttämällä valomikroskooppia Axio Lab.A1 (Carl Zeiss, Göttingen, Saksa) (×400).

Tilastollinen analyysi Pieni otoskoko perusteltiin suuren tehosteen koon, tuntemattoman nollajakauman odotuksella ja kompensoimalla riittävän tehon ei-parametrisilla tilastoilla. Tarkkaa otoskoon laskemista ei tehty.

PPD:n ja CAL:n keskiarvot laskettiin kohdille, joiden PD > 4 mm (sairaat kohdat). Tilastollinen analyysi suoritettiin GraphPad Prism 5 -ohjelmistolla (GraphPad Software, San Diego, USA) kuvailevien tilastojen, khin neliötestin, yksisuuntaisen ANOVA- ja ei-parametristen ANOVA-testien avulla useita vertailuja varten: Friedman - riippuvaisille muuttujille, Kruskal-Wallis testi - riippumattomille muuttujille, post-hoc-analyysillä. Solujen lukumäärän kuvaaviin tilastoihin käytettiin myös prosenttipistealueita epänormaalien jakautumien vuoksi. CD68+/CD163+-suhde arvioitiin ryhmien välisillä t-testeillä ja Spearman-korrelaatiotarkistuksella. P-arvot