Suppletie met L-ornithine maar niet L-arginine verhoogt de dichtheid van CD68+ en CD163+ macrofagen bij parodontitis

Studieopzet Het huidige werk was de oorspronkelijke onderzoeksstudie. 75 personen met een diagnose van gegeneraliseerde parodontitis in stadia II-III en graad B (38 vrouwen en 37 mannen, respectievelijk 51% en 49%) werden in het onderzoek opgenomen. Parodontitis werd gediagnosticeerd met behulp van de criteria van de classificatie van parodontale en peri-implantaire ziekten en aandoeningen 2017. Stadium II van parodontitis werd gediagnosticeerd in aanwezigheid van 3 tot 4 mm interdentale CAL op de plaats van het grootste verlies, 4 tot maximaal 5 mm PPD, het radiografisch botverlies bij het wortelcoronale derde deel en geen tandverlies als gevolg van parodontitis. Stadium III werd gediagnosticeerd in aanwezigheid van ≥5 mm interdentale CAL, het radiografisch botverlies strekte zich uit tot het middelste of apicale derde deel van de wortel, ≤4 tandverlies als gevolg van parodontitis. In alle gevallen had parodontitis een algemeen patroon (>30% van de betrokken tanden) en graad B als patronen van de progressie, gebaseerd op indirect bewijs (röntgenfotografisch botverlies uitgedrukt als een percentage van de wortellengte gedeeld door de leeftijd van de proefpersoon was van 0,25 tot 1,0).

Patiënten werden gegroepeerd door gestratificeerde randomisatie in drie groepen: de SRP-groep (patiënten kregen scaling en rootplaning als een volledige mondprocedure, n=25); de Arg-groep (patiënten kregen oraal L-arginine aspartaat (Yuria-Pharm, Oekraïne) in een dosis van 1 g driemaal daags gedurende 10 dagen na SRP, n=25); en de Orn-groep (patiënten kregen oraal L-ornithine aspartaat (Farmak, Oekraïne) in een dosis van 3 g driemaal daags gedurende 15 dagen na SRP, n=25). We gebruikten arginine en ornithine volgens de instructies voor deze geneesmiddelen die beschikbaar zijn voor gebruik in Oekraïne. Tijdens de studie volgden alle patiënten een stabiel dieet, zonder hun rantsoenen en regimenten te veranderen.

Voor alle deelnemers werden geslacht en leeftijd geregistreerd en parodontale parameters zoals parodontale pocketdiepte (PPD), klinisch hechtingsniveau (CAL) en bloeding bij sonderen (BoP) werden gemeten op zes parodontale locaties op alle tanden (behalve de derde). kiezen) door een enkele gekalibreerde onderzoeker met behulp van een handmatige parodontale sonde (dental explorer tool gelabeld 0106.DT06.CP10, Den Tag, Italië). PPD en CAL werden gemeten tot op 1 mm nauwkeurig.

Alle patiënten werden vóór de behandeling en na 1 maand ± 5 dagen klinisch onderzocht.

Verzameling van weefselmonsters van het tandvlees Voor de precieze immunohistochemische studie werd de gingivabiopsie van ongeveer 3x3 mm uitgesneden onder lokale anesthesie vóór de behandeling en 1 maand later bij 5 geselecteerde patiënten per groep. Biopsieën werden verkregen op dezelfde tijdstippen, vanaf een enkele locatie met de diepste uitsparing rond geschikte tandheelkundige en parodontale procedures. Het verwijderen van deze weefselbiopten had geen invloed op het initiële behandelplan en had geen invloed op de verwachte klinische resultaten. Na verzameling werden biopsieën gefixeerd in een 4% formaline-oplossing gedurende 24 uur fixatie, gedehydrateerd en ingebed in paraffine.

Immunohistochemie en antilichamen Paraffinecoupes met een dikte van 2-3 μm werden gedeparaffineerd en gedehydrateerd. Warmte-geïnduceerde epitoopterugwinning in citraatbuffer, waterstofvermogen (pH) 6, werd uitgevoerd door de glaasjes achtereenvolgens in de magnetron te verwarmen, daarna af te laten koelen, gespoeld met fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS), geïncubeerd met geblokkeerd reagens, gespoeld en geïncubeerd met muis monoklonale CD68 antilichamen (1:30, kloon PG-M1, Diagnostic BioSystems, Den Haag, Nederland) of anti-CD163 (1:100, kloon 10D6, Diagnostic BioSystems, Den Haag, Nederland). Vervolgens werden secties gekleurd met het 2-stappen Mouse/Rabbit PolyVue Plus™ HRP/DAB-detectiesysteem (Diagnostic BioSystems, Den Haag, Nederland) en tegengekleurd met Mayer's haemalaun. PBS werd gebruikt als een negatieve controle, het lymfeklierweefsel - als een positieve controle.

Evaluatie van immunohistochemische kleuring CD68+- en CD163+-macrofagen (Mφs) werden geschat door het aantal cellen te tellen met een lichtmicroscoop × 400 in intensieve infiltratieve gebieden, 5 regio's van elke plak werden geselecteerd en alle 5 tellingen werden genomen voor statistieken. We hebben immunopositieve Mφ's geteld in de gebieden van celinfiltratie, omdat ze direct verband houden met ontsteking. Het aantal cellen per 10.000 μm2 werd berekend als immunopositieve celdichtheid. Foto's werden verkregen met behulp van de lichtmicroscoop Axio Lab.A1 (Carl Zeiss, Göttingen, Duitsland) (× 400).

Statistische analyse Kleine steekproefomvang werd gerechtvaardigd door de verwachting van een hoge effectgrootte, onbekende nulverdeling, en gecompenseerd met voldoende power niet-parametrische statistieken. Er is geen nauwkeurige berekening van de steekproefomvang uitgevoerd.

Middelen van PPD en CAL werden berekend voor sites met PD> 4 mm (aangetaste sites). Statistische analyse werd uitgevoerd met behulp van GraphPad Prism 5-software (GraphPad Software, San Diego, VS) door middel van beschrijvende statistiek, chikwadraattest, eenrichtings-ANOVA en niet-parametrische ANOVA-tests voor meerdere vergelijkingen: Friedman - voor afhankelijke variabelen, Kruskal-Wallis test - voor onafhankelijke variabelen, met post-hocanalyse. Voor beschrijvende statistieken van celaantallen werden ook de percentielbereiken gebruikt vanwege niet-normale verdelingen. De CD68+/CD163+-ratio werd beoordeeld door middel van t-testvergelijkingen tussen groepen en Spearman-correlatiecontrole. P-waarden van