La supplémentation en L-ornithine mais pas en L-arginine augmente la densité des macrophages CD68+ et CD163+ dans la parodontite

Conception de l'étude Le présent travail était l'étude de recherche originale. 75 personnes avec un diagnostic de parodontite généralisée aux stades II-III et grade B (38 femmes et 37 hommes, 51 % et 49 %, respectivement) ont été incluses dans l'étude. La parodontite a été diagnostiquée en utilisant les critères de la Classification des maladies et affections parodontales et péri-implantaires 2017. Le stade II de la parodontite a été diagnostiqué en présence d'un CAL interdentaire de 3 à 4 mm au site de la plus grande perte, d'un PPD de 4 à 5 mm maximum, d'une perte osseuse radiographique au tiers coronaire radiculaire et d'aucune perte de dent due à la parodontite. Le stade III a été diagnostiqué en présence d'un CAL interdentaire ≥ 5 mm, la perte osseuse radiographique s'étendant jusqu'au tiers moyen ou apical de la racine, ≤ 4 pertes de dents dues à la parodontite. Dans tous les cas, la parodontite avait un schéma généralisé (> 30 % des dents atteintes) et le grade B comme schémas de progression, sur la base de preuves indirectes (la perte osseuse radiographique exprimée en pourcentage de la longueur de la racine divisée par l'âge du sujet était de 0,25 à 1,0).

Les patients ont été regroupés par randomisation stratifiée en trois groupes : le groupe SRP (les patients ont reçu un détartrage et un surfaçage radiculaire dans le cadre d'une procédure buccale complète, n = 25 ); le groupe Arg (les patients ont reçu de l'aspartate de L-arginine par voie orale (Yuria-Pharm, Ukraine) à une dose de 1 g t.i.d. pendant 10 jours après le SRP, n = 25 ); et le groupe Orn (les patients ont reçu de l'aspartate de L-ornithine par voie orale (Farmak, Ukraine) à une dose de 3 g t.i.d. pendant 15 jours après le SRP, n = 25). Nous avons utilisé l'arginine et l'ornithine conformément aux instructions de ces médicaments disponibles pour une utilisation en Ukraine. Au cours de l'étude, tous les patients suivaient un régime alimentaire stable, sans changer leurs rations et régiments.

Pour tous les participants, le sexe et l'âge ont été enregistrés, et les paramètres parodontaux tels que la profondeur de la poche parodontale (PPD), le niveau d'attache clinique (CAL) et les mesures du saignement au sondage (BoP) ont été relevés à partir de six sites parodontaux sur toutes les dents (à l'exception de la troisième molaires) par un seul examinateur calibré à l'aide d'une sonde parodontale manuelle (outil d'exploration dentaire étiqueté 0106.DT06.CP10, Den Tag, Italie). PPD et CAL ont été mesurés à 1 mm près.

Tous les patients ont été examinés cliniquement avant le traitement et après 1 mois ± 5 jours.

Prélèvement d'échantillons de tissu gingival Pour l'étude immunohistochimique précise, la biopsie gingivale d'environ 3x3 mm a été excisée sous anesthésie locale avant le traitement et 1 mois plus tard chez 5 patients sélectionnés par groupe. Des biopsies ont été obtenues aux mêmes moments, à partir d'un site unique présentant la poche la plus profonde autour des procédures dentaires et parodontales appropriées. Le retrait de ces biopsies tissulaires n'a pas interféré avec le plan de traitement initial ni influencé les résultats cliniques attendus. Après collecte, les biopsies ont été fixées dans une solution de formol à 4% pendant 24 heures de fixation, déshydratées et incluses dans de la paraffine.

Immunohistochimie et anticorps Des coupes de paraffine de 2-3 μm d'épaisseur ont été déparaffinées et déshydratées. La récupération d'épitopes induite par la chaleur dans un tampon citrate, puissance d'hydrogène (pH) 6, a été réalisée en chauffant successivement les lames au four à micro-ondes, puis laissées refroidir, rincées avec une solution saline tamponnée au phosphate (PBS), incubées avec du réactif bloqué, rincées , et incubé avec des anticorps monoclonaux de souris CD68 (1:30, clone PG-M1, Diagnostic BioSystems, La Haye, Pays-Bas) ou anti-CD163 (1:100, clone 10D6, Diagnostic BioSystems, La Haye, Pays-Bas). Ensuite, les sections ont été colorées avec le système de détection HRP/DAB en 2 étapes pour souris/lapin PolyVue Plus™ (Diagnostic BioSystems, La Haye, Pays-Bas) et contre-colorées avec l'hémalun de Mayer. Le PBS a été utilisé comme contrôle négatif, le tissu des ganglions lymphatiques - comme contrôle positif.

L'évaluation de la coloration immunohistochimique des macrophages CD68 + et CD163 + (Mφs) a été estimée en comptant le nombre de cellules au microscope optique × 400 dans des zones d'infiltration intensive, 5 régions de chaque tranche ont été sélectionnées et les 5 comptages ont été effectués à des fins statistiques. Nous avons compté les Mφ immunopositives dans les zones d'infiltration cellulaire, car elles sont directement liées à l'inflammation. Le nombre de cellules par 10 000 μm2 a été calculé comme densité de cellules immunopositives. Les photos ont été obtenues à l'aide du microscope optique Axio Lab.A1 (Carl Zeiss, Göttingen, Allemagne) (×400).

Analyse statistique La petite taille de l'échantillon était justifiée par l'attente d'une taille d'effet élevée, d'une distribution nulle inconnue et compensée par des statistiques non paramétriques de puissance adéquate. Le calcul précis de la taille de l'échantillon n'a pas été effectué.

Les moyennes de PPD et CAL ont été calculées pour les sites avec PD > 4 mm (sites affectés). L'analyse statistique a été réalisée à l'aide du logiciel GraphPad Prism 5 (GraphPad Software, San Diego, États-Unis) au moyen de statistiques descriptives, d'un test du chi carré, d'une ANOVA unidirectionnelle et de tests ANOVA non paramétriques pour des comparaisons multiples : Friedman - pour les variables dépendantes, Kruskal-Wallis test - pour les variables indépendantes, avec analyse post-hoc. Pour les statistiques descriptives du nombre de cellules, les plages de centiles ont également été utilisées en raison de distributions non normales. Le rapport CD68+/CD163+ a été évalué par des comparaisons de tests t inter-groupes et une vérification de corrélation de Spearman. Valeurs P de