Die Supplementierung mit L-Ornithin, aber nicht mit L-Arginin, erhöht die Dichte von CD68+- und CD163+-Makrophagen bei Parodontitis

Studiendesign Die vorliegende Arbeit war die ursprüngliche Forschungsstudie. 75 Personen mit der Diagnose einer generalisierten Parodontitis in den Stadien II-III und Grad B (38 Frauen und 37 Männer, 51 % bzw. 49 %) wurden in die Studie eingeschlossen. Parodontitis wurde anhand der Kriterien der Klassifikation parodontaler und periimplantärer Erkrankungen und Zustände 2017 diagnostiziert. Stadium II der Parodontitis wurde bei Vorhandensein von 3 bis 4 mm interdentaler CAL an der Stelle des größten Verlusts, 4 bis maximal 5 mm PPD, dem röntgenologischen Knochenverlust im koronalen Drittel der Wurzel und keinem Zahnverlust aufgrund von Parodontitis diagnostiziert. Stadium III wurde bei Vorhandensein von ≥5 mm interdentaler CAL diagnostiziert, der röntgenologische Knochenverlust erstreckte sich bis zum mittleren oder apikalen Drittel der Wurzel, ≤4 Zahnverlust aufgrund von Parodontitis. In allen Fällen hatte die Parodontitis ein generalisiertes Muster (> 30 % der Zähne betroffen) und Grad B als Progressionsmuster, basierend auf indirekten Beweisen (röntgenologischer Knochenverlust, ausgedrückt als Prozentsatz der Wurzellänge dividiert durch das Alter des Probanden). 0,25 bis 1,0).

Die Patienten wurden durch stratifizierte Randomisierung in drei Gruppen eingeteilt: die SRP-Gruppe (Patienten erhielten Scaling und Wurzelglättung als Full-Mouth-Verfahren, n = 25); die Arg-Gruppe (Patienten erhielten orales L-Arginin-Aspartat (Yuria-Pharm, Ukraine) in einer Dosis von 1 g t.i.d. für 10 Tage nach SRP, n=25); und die Orn-Gruppe (Patienten erhielten orales L-Ornithin-Aspartat (Farmak, Ukraine) in einer Dosis von 3 g t.i.d. für 15 Tage nach SRP, n=25). Wir haben Arginin und Ornithin gemäß den Anweisungen für diese in der Ukraine erhältlichen Arzneimittel verwendet. Während der Studie befanden sich alle Patienten auf einer stabilen Diät, ohne ihre Rationen und Regimenter zu ändern.

Bei allen Teilnehmern wurden Geschlecht und Alter erfasst, und an allen Zähnen (mit Ausnahme des dritten) wurden parodontale Parameter wie parodontale Taschentiefe (PPD), Clinical Attachment Level (CAL) und Blutung bei Sondierung (BoP) an sechs parodontalen Stellen gemessen Molaren) durch einen einzigen kalibrierten Untersucher mit einer manuellen Parodontalsonde (Dental Explorer Tool mit der Bezeichnung 0106.DT06.CP10, Den Tag, Italien). PPD und CAL wurden auf 1 mm genau gemessen.

Alle Patienten wurden vor der Behandlung und nach 1 Monat ± 5 Tagen klinisch untersucht.

Entnahme von Zahnfleischproben Für die genaue immunhistochemische Untersuchung wurde bei 5 ausgewählten Patienten pro Gruppe die Zahnfleischbiopsie von ca. 3 x 3 mm unter Lokalanästhesie vor der Behandlung und 1 Monat später entnommen. Biopsien wurden zu den gleichen Zeitpunkten von einer einzigen Stelle entnommen, die die tiefste Tasche um geeignete zahnärztliche und parodontale Verfahren zeigte. Die Entnahme dieser Gewebebiopsien beeinträchtigte weder den ursprünglichen Behandlungsplan noch beeinflusste sie die erwarteten klinischen Ergebnisse. Nach der Entnahme wurden die Biopsien in einer 4%igen Formalinlösung für 24 Stunden Fixierung fixiert, dehydriert und in Paraffin eingebettet.

Immunhistochemie und Antikörper Paraffinschnitte mit einer Dicke von 2–3 μm wurden entparaffiniert und dehydriert. Die wärmeinduzierte Epitop-Wiedergewinnung in Citratpuffer, Leistung von Wasserstoff (pH) 6, wurde durch aufeinanderfolgendes Erhitzen der Objektträger im Mikrowellenofen durchgeführt, dann abkühlen gelassen, mit phosphatgepufferter Salzlösung (PBS) gespült, mit blockiertem Reagenz inkubiert, gespült und mit monoklonalen Maus-CD68-Antikörpern (1:30, Klon PG-M1, Diagnostic BioSystems, Den Haag, Niederlande) oder Anti-CD163 (1:100, Klon 10D6, Diagnostic BioSystems, Den Haag, Niederlande) inkubiert. Dann wurden die Schnitte mit dem zweistufigen Maus/Kaninchen-PolyVue Plus™ HRP/DAB-Nachweissystem (Diagnostic BioSystems, Den Haag, Niederlande) gefärbt und mit Mayer's Hämalaun gegengefärbt. PBS wurde als negative Kontrolle verwendet, das Lymphknotengewebe – als positive Kontrolle.

Bewertung der immunhistochemischen Färbung CD68+- und CD163+-Makrophagen (Mφs) wurden durch Zählen der Anzahl der Zellen mit einem Lichtmikroskop × 400 in intensiv infiltrierenden Bereichen geschätzt, 5 Regionen aus jeder Scheibe wurden ausgewählt und alle 5 Zählungen wurden für die Statistik genommen. Wir haben immunpositive Mφs in den Bereichen der Zellinfiltration gezählt, da sie in direktem Zusammenhang mit Entzündungen stehen. Als immunpositive Zelldichte wurde die Anzahl der Zellen pro 10 000 μm2 berechnet. Fotos wurden mit dem Lichtmikroskop Axio Lab.A1 (Carl Zeiss, Göttingen, Deutschland) (x400) erhalten.

Statistische Analyse Eine kleine Stichprobengröße wurde durch die Erwartung einer hohen Effektgröße und einer unbekannten Nullverteilung gerechtfertigt und durch nichtparametrische Statistiken mit angemessener Power kompensiert. Eine genaue Berechnung der Stichprobengröße wurde nicht durchgeführt.

Mittelwerte von PPD und CAL wurden für Stellen mit PD > 4 mm (betroffene Stellen) berechnet. Die statistische Analyse wurde unter Verwendung der Software GraphPad Prism 5 (GraphPad Software, San Diego, USA) mittels deskriptiver Statistik, Chi-Quadrat-Test, einfacher ANOVA und nichtparametrischer ANOVA-Tests für multiple Vergleiche durchgeführt: Friedman – für abhängige Variablen, Kruskal-Wallis Test - für unabhängige Variablen, mit Post-hoc-Analyse. Für die deskriptive Statistik der Zellenzahlen wurden aufgrund von Nicht-Normalverteilungen auch die Perzentilbereiche verwendet. Das CD68+/CD163+-Verhältnis wurde durch Intergruppen-t-Tests-Vergleiche und Spearman-Korrelationsprüfung bewertet. P-Werte von