Tilskud med L-ornithin men ikke L-arginin øger tætheden af ​​CD68+ og CD163+ makrofager ved paradentose

Undersøgelsesdesign Nærværende arbejde var det oprindelige forskningsstudie. 75 personer med diagnosen generaliseret paradentose i stadier II-III og grad B (38 kvinder og 37 mænd, henholdsvis 51 % og 49 %) blev inkluderet i undersøgelsen. Paradentose blev diagnosticeret ved at bruge kriterierne i klassifikationen af ​​periodontale og peri-implantatsygdomme og tilstande 2017. Stadium II af parodontitis blev diagnosticeret i nærvær af 3 til 4 mm interdental CAL på stedet for det største tab, 4 til maksimalt 5 mm PPD, det radiografiske knogletab ved den koronale rod tredjedel og intet tandtab på grund af parodontitis. Stadium III blev diagnosticeret i nærvær af ≥5 mm interdental CAL, det radiografiske knogletab strækker sig til den midterste eller apikale tredjedel af roden, ≤4 tændertab på grund af parodontitis. I alle tilfælde havde parodontitis et generaliseret mønster (>30 % af tænderne involveret) og grad B som mønstre for progressionen, baseret på indirekte beviser (radiografisk knogletab udtrykt som en procentdel af rodlængden divideret med forsøgspersonens alder var fra 0,25 til 1,0).

Patienterne blev grupperet ved stratificeret randomisering i tre grupper: SRP-gruppen (patienter modtog skalering og rodplaning som en fuldmundsprocedure, n=25); Arg-gruppen (patienter modtog oralt L-argininaspartat (Yuria-Pharm, Ukraine) i en dosis på 1 g t.i.d. i 10 dage efter SRP, n=25); og Orn-gruppen (patienter modtog oralt L-ornithin-aspartat (Farmak, Ukraine) i en dosis på 3 g t.i.d. i 15 dage efter SRP, n=25). Vi brugte arginin og ornithin i henhold til instruktionerne for disse lægemidler, der er tilgængelige til brug i Ukraine. Under undersøgelsen var alle patienter på en stabil diæt uden at ændre deres rationer og regimenter.

For alle deltagere blev køn og alder registreret, og parodontale parametre såsom periodontal lommedybde (PPD), klinisk tilknytningsniveau (CAL) og blødning ved sondering (BoP) målinger blev taget fra seks parodontale steder på alle tænder (undtagen den tredje kindtænder) af en enkelt kalibreret undersøger ved hjælp af en manuel parodontalsonde (dental explorer-værktøj mærket 0106.DT06.CP10, Den Tag, Italien). PPD og CAL blev målt til nærmeste 1 mm.

Alle patienter blev klinisk undersøgt før behandling og efter 1 måned ± 5 dage.

Indsamling af tandkødsvævsprøver Til den præcise immunhistokemiske undersøgelse blev tandkødsbiopsien på ca. 3x3 mm skåret ud under lokalbedøvelse før behandling og 1 måned senere hos 5 udvalgte patienter pr. gruppe. Biopsier blev opnået på de samme tidspunkter fra et enkelt sted med den dybeste lomme omkring passende tand- og parodontale procedurer. Fjernelse af disse vævsbiopsier interfererede ikke med den indledende behandlingsplan eller indflydelse på de forventede kliniske resultater. Efter indsamling blev biopsier fikseret i en 4% formalinopløsning i 24 timers fiksering, dehydreret og indlejret i paraffin.

Immunhistokemi og antistoffer Paraffinsnit, 2-3 μm i tykkelse blev afparaffineret og dehydreret. Varme-induceret epitopudvinding i citratbuffer, effekt af brint (pH) 6, blev udført ved successiv opvarmning af objektglassene i mikrobølgeovnen, fik derefter lov til at køle af, skyllet med fosfatpufret saltvand (PBS), inkuberet med blokeret reagens, skyllet og inkuberet med muse monoklonale CD68-antistoffer (1:30, klon PG-M1, Diagnostic BioSystems, Haag, Holland) eller anti-CD163 (1:100, klon 10D6, Diagnostic BioSystems, Haag, Holland). Derefter blev sektioner farvet med 2-trins Mouse/Rabbit PolyVue Plus™ HRP/DAB Detection System (Diagnostic BioSystems, Haag, Holland) og modfarvet med Mayers hæmalaun. PBS blev brugt som negativ kontrol, lymfeknudevævet - som positiv kontrol.

Evaluering af immunhistokemisk farvning CD68+ og CD163+ makrofager (Mφs) blev estimeret ved at tælle antallet af celler ved lysmikroskop ×400 i intensive infiltrative områder, 5 regioner fra hver skive blev udvalgt, og alle 5 tællinger blev taget til statistik. Vi talte immunopositive Mφ'er i områderne med celleinfiltration, da de er direkte relateret til inflammation. Antallet af celler pr. 10 000 μm2 blev beregnet som immunopositiv celletæthed. Fotos blev taget ved hjælp af lysmikroskopet Axio Lab.A1 (Carl Zeiss, Göttingen, Tyskland) (×400).

Statistisk analyse Lille stikprøvestørrelse blev begrundet med forventningen om en høj effektstørrelse, ukendt nulfordeling og kompenseret med tilstrækkelig magt, ikke-parametrisk statistik. Præcis prøvestørrelsesberegning blev ikke udført.

Gennemsnit af PPD og CAL blev beregnet for steder med PD>4 mm (berørte steder). Statistisk analyse blev udført ved hjælp af GraphPad Prism 5-software (GraphPad Software, San Diego, USA) ved hjælp af beskrivende statistik, chi-kvadrat-test, envejs ANOVA og ikke-parametriske ANOVA-test til flere sammenligninger: Friedman - for afhængige variabler, Kruskal-Wallis test - for uafhængige variable, med post-hoc analyse. Til beskrivende statistik over celletal blev percentilområderne også brugt på grund af ikke-normale fordelinger. CD68+/CD163+-forholdet blev vurderet ved inter-gruppe t-test sammenligninger og Spearman korrelationskontrol. P værdier af