「胃がんにおける現在の標的療法に対する反応と耐性のメカニズムとバイオマーカー」（THERRES） (THERRES)

研究デザインは前向きであり、18か月間に登録されたEUS局所病期分類のために、クライオバ医科大学および薬局の消化器科に紹介された胃腫瘍の患者が含まれます。

各参加者について収集されるデータには以下が含まれます。個人データ (名前、姓、年齢、性別)。以前の調査の結果 (血球数、肝臓および腎機能検査、腫瘍マーカー、胃鏡検査、コンピューター断層撮影)、EUS 変数 (CEH-EUS を含む)、組織学的および免疫組織化学的所見、TNM および pTNM 状態 (可能であれば)、分子分析所見。

画像検査 すべての患者は、ラジアル EUS 器具を使用して、EUS および CEH-EUS によって評価されます。 検査の前に、少なくとも 8 時間は胃を空にしておく必要があります。 検査中、生検は遺伝子発現分析のために正常および腫瘍組織から採取されます。 EUS検査の場合、患者は左側臥位になります。 EUS スコープは直視下に挿入され、腫瘍を通過し、検査は 7.5 MHz での離脱中に開始する必要があります。 腫瘍は、そのエコー原性、エコー構造、サイズ、壁および周囲構造への広がりを記述して特徴付けられ、TNM 分類の修正を使用して病期分類されます。 パワードップラー信号の有無が記録されます。 すべてのリンパ節は、最大サイズ、エコー原性、形状、および余白とともに報告されます。 直径が 5 mm を超え、低エコーの外観、円形 (卵形または平坦ではなく)、境界がはっきりしていて、腫瘍の近くに位置する結節は、悪性が疑われます。

CEH-EUS 手順: 事前に確立されたプリセットに従って、通常の従来のグレースケール B モード EUS 画像を右側に、コントラスト高調波画像を左側に持つ 2 パネル画像が使用されます。 検査は、0.2 の低機械的インデックス (動的広帯域コントラスト高調波イメージング モード) で実行されます。 タイマーの開始点は、静脈造影剤注入 (SonoVue 2,4 mL) の瞬間と見なされ、ムービー全体 (T0-T120s) が後で分析するために超音波システムの組み込み HDD に記録されます。 腫瘍灌流の客観的測定のパラメータには、増強の最大強度、平均通過時間、ピークまでの時間（ウォッシュイン時間）、ウォッシュイン勾配、GC 患者の血流または血液量を間接的に表す曲線下面積が含まれます。

EUS 中に合併症が発生することがありますが、まれです。 これらは生検部位での出血で構成されており、通常は最小限で自己制限的であり、フォローアップを必要とすることはめったにありません。 胃の穿孔は非常にまれです。 超音波造影剤（Sonovue®）の安全性プロファイルは、副作用の発生率が非常に低いことを示しました。 腎毒性がなく、過敏症や重度のアレルギーの発生率は、現在の X 線治療薬よりも低く、他の磁気共鳴造影剤に匹敵します。 Sono-Vue は、EU 諸国での臨床使用が承認されています。

研究中に収集された生物学的材料は凍結保存されます。 これには、1 ml の全血と、それぞれ 2 ～ 3 mm の 4 つの組織生検 (正常組織から 2 つ、腫瘍から 2 つ) が含まれます。 参加者の予想数に達すると、プロトコルでさらに詳しく説明されているように、サンプルは血管新生のマーカーを評価するための分子研究を受けます。 生物学的材料は、試験開始から推定 20 か月間保存および分析されます。 免疫組織化学のための生検サンプルは、ホルマリン溶液に含まれ、病理検査室に送られます。

分子検査

• 血液分析。 全血（１ｍｌ）をＥＤＴＡ溶液上でエッペンドルフ管に撮像する前に採取し、すぐに４℃で最大２４時間放置し、その後の血管形成因子の分析のために−８０℃に保つ。
• 正常および GC 組織の生検サンプル。 遺伝子発現は、Taqman® 標識プローブを用いた qPCR を使用して分析されます。 リアルタイム RT-PCR によって得られた結果を定量化するために、標準曲線法が使用されます。 対になったサンプルを RNAlater (Ambion) に収集し、40℃で 12 〜 24 時間保存した後、-80℃ で保存します。 後の分析では、血管新生マーカーの遺伝子発現を評価します。

免疫組織化学 IHC は、血管新生マーカーである VEGF-A ファミリーとその受容体である VEGFR およびチロシンキナーゼ受容体 (RTK) に焦点を当てます。

腫瘍サンプルにおける VEGF-C 発現 (リンパ管新生のマーカー) が定量化されます。 さらに、EUS 所見 (N ステージ) と VEGF-C 発現の間の相関関係が確立されます。

微小血管密度 (MVD) は、CD105 の免疫組織化学を使用して計算されます。

統計分析 研究に登録された推定参加者数は、最初の 24 か月間で少なくとも 50 人です。 記述的データ分析と統計的推論の両方が実行されます。

CE-EUS パラメーターと病理学的および遺伝的所見との相関関係は、T 検定と連続データのピアソン相関係数 (r) を使用して分析され、カイ 2 乗検定がカテゴリ データに適用されます。 一元配置分散分析 (ANOVA) は、異なるサブグループ (T ステージ) 間の比較のために実行されます。 診断の瞬間からの生存分析は、カプラン・マイヤー曲線を使用して評価されます。 TNMステージ、治療タイプなどの従来のパラメーターが分析されます。 統計的有意性は、0.05 未満の p 値として定義されます。

これらの最小限のリスクは、将来の患者ケアに対する潜在的な影響よりも重要です。

研究対象は、研究に含める前に、書面および口頭の情報に代わって同意を受け取ります。 インタビューでは、プロジェクトの予測可能なリスクと副作用、予想される結果、および研究から得られる利点を理解できるように説明するなど、詳細な情報を取り上げます。

予定外の出来事や悪影響は、生物医学研究に関する地域倫理委員会に直ちに報告されます。