"Mekanismer og biomarkører for respons og modstand mod aktuelle målrettede terapier i mavekræft" (THERRES) (THERRES)

Undersøgelsesdesignet er prospektivt og vil omfatte patienter med gastriske tumorer henvist til Gastroenterology Department fra University of Medicine and Pharmacy of Craiova for EUS lokal stadieinddeling i løbet af 18 måneder.

Data indsamlet for hver deltager vil omfatte: Personlige data (navn, efternavn, alder, køn); resultater fra tidligere undersøgelser (blodtælling, lever- og nyrefunktionstest, tumormarkører, gastroskopi, computertomografi), EUS-variabler (inklusive CEH-EUS), histologiske og immunhistokemiske fund, TNM- og pTNM-status (hvis muligt), molekylære analysefund.

Billeddiagnostiske tests Alle patienter vil blive evalueret af EUS og CEH-EUS ved hjælp af radiale EUS-instrumenter. Forud for undersøgelsen skal maven være tom i mindst 8 timer. Under undersøgelsen vil der blive taget biopsier fra normalt væv og tumorvæv til genekspressionsanalyse. Ved EUS undersøgelse vil patienten blive placeret i venstre sideleje. EUS-skopet vil blive indsat under direkte syn, bestået af tumoren, og undersøgelsen bør begynde under tilbagetrækningen ved 7,5 MHz. Tumoren vil blive karakteriseret ved at beskrive dens ekkogenicitet, ekkostruktur, størrelse, udstrækning ind i væggen og omgivende strukturer, og den vil blive iscenesat ved hjælp af modifikationen af ​​TNM-klassifikationen. Tilstedeværelsen/fraværet af Doppler-effektsignaler vil blive noteret. Alle lymfeknuder vil blive rapporteret med deres maksimale størrelse, ekkogenicitet, form og marginer. Noder større end 5 mm i diameter, med hypoekkoisk udseende, rund form (snarere end ægformede eller flad), skarpt afgrænsede kanter og placeret i nærheden af ​​tumoren vil blive mistænkt for malignitet.

CEH-EUS-procedure: Et billede med to paneler med det sædvanlige, konventionelle B-tilstand EUS-billede i gråskala på højre side og med det harmoniske kontrastbillede på venstre side vil blive brugt i henhold til forudindstillede forudindstillinger. Undersøgelsen vil blive udført ved et lavt mekanisk indeks (dynamisk bredbåndskontrast harmonisk billeddannelsestilstand) på 0,2. Timerens startpunkt vil blive betragtet som tidspunktet for intravenøs kontrastinjektion (SonoVue 2,4 mL), med hele filmen (T0-T120s) optaget på den indbyggede HDD i ultralydssystemet til senere analyse. Parametre for objektiv måling af tumorperfusion vil omfatte maksimal intensitet af forstærkning, gennemsnitlig transittid, tid til peak (indvaskningstid), indvaskningshældning, areal under kurven, der repræsenterer indirekte blodgennemstrømning eller blodvolumen hos GC-patienter.

Komplikationer kan forekomme under EUS, men de er sjældne. Disse består af blødning på biopsistedet, som normalt er minimal, selvbegrænsende og sjældent kræver opfølgning. Perforering af maven er yderst sjælden. Sikkerhedsprofilen for ultralydskontrastmidlet (Sonovue®) viste en meget lav forekomst af bivirkninger. Det er ikke nefrotoksisk, og forekomsten af ​​overfølsomhed eller alvorlige allergiske hændelser er lavere end med nuværende røntgenmidler og sammenlignelig med andre magnetiske resonanskontrastmidler. Sono-Vue er godkendt til klinisk brug i EU-lande.

Det biologiske materiale indsamlet under undersøgelsen vil blive frosset og opbevaret. Dette vil omfatte 1 ml fuldblod og 4 vævsbiopsier (2 fra normalt væv og 2 fra tumoren) på 2 til 3 mm hver. Når det forventede antal deltagere er nået, vil prøverne gennemgå molekylære undersøgelser til vurdering af markørerne for angiogenese som beskrevet yderligere i protokollen. De biologiske materialer vil blive opbevaret og analyseret i en estimeret periode på 20 måneder fra forsøgets start. Biopsiprøver til immunhistokemi vil blive inkluderet i formalinopløsning og sendt til patologisk laboratorium.

Molekylære tests

• Blodanalyse. Fuldblod (1 ml) vil blive opsamlet før billeddannelsesprocedurer i et Eppendorf-rør på EDTA-opløsning, anbragt umiddelbart ved 40C i maksimalt 24 timer og derefter opbevaret ved -800C til senere analyse af angiogene faktorer.
• Biopsiprøver af normalt og GC væv. Genekspression vil blive analyseret ved hjælp af qPCR med Taqman®-mærkede prober. For at kvantificere resultaterne opnået ved RT-PCR i realtid vil standardkurvemetoden blive brugt. De parrede prøver vil blive opsamlet i RNAlater (Ambion), opbevaret ved 40C i 12-24 timer og derefter opbevaret ved -800C. Senere analyse vil vurdere genernes ekspression af angiogene markører.

Immunhistokemi IHC vil være fokuseret på angiogene markører: VEGF-A-familien og deres receptorer: VEGFR samt tyrosinkinaser-receptorer (RTK'er).

VEGF-C-ekspressionen i tumorprøver (markør for lymfangiogenese) vil blive kvantificeret. Endvidere vil der blive etableret en sammenhæng mellem EUS-fund (N-stadium) og VEGF-C-ekspression.

Mikrokardensiteten (MVD) vil blive beregnet ved hjælp af immunhistokemi for CD105.

Statistisk analyse Det anslåede antal deltagere, der er tilmeldt undersøgelsen, er mindst 50 i løbet af de første 24 måneder. Både deskriptiv dataanalyse og statistisk inferens vil blive udført.

Korrelationer mellem CE-EUS parametre og patologiske og genetiske fund vil blive analyseret ved hjælp af T-testen og Pearson korrelationskoefficienten (r) for kontinuerlige data, mens Chi-square testen vil blive anvendt for kategoriske data. Envejsvariansanalyse (ANOVA) vil blive udført til sammenligning mellem forskellige undergrupper (T-stadier). Overlevelsesanalyse fra diagnoseøjeblikket vil blive evalueret ved hjælp af Kaplan-Meyer-kurver. Traditionelle parametre som TNM-stadie, type behandling vil blive analyseret. Statistisk signifikans vil blive defineret som en p-værdi mindre end 0,05.

Disse minimale risici vil blive opvejet af de potentielle implikationer for fremtidig patientbehandling.

Forsøgspersoner vil modtage samtykke på vegne af skriftlig og mundtlig information før optagelse i undersøgelsen. Interviewet vil dække detaljerede oplysninger, herunder en forståelig præsentation af projektet med dets forudsigelige risici og bivirkninger, forventede resultater og fordele fra forskningen.

Eventuelle uplanlagte hændelser eller uønskede virkninger vil straks blive rapporteret til den regionale etiske komité for biomedicinsk forskning.