"Mekanismit ja biomarkkerit vasteen ja resistenssin suhteen nykyisille kohdistetuille hoidoille mahasyövässä" (THERRES) (THERRES)

Tutkimussuunnitelma on tulevaisuudennäkyvä, ja se sisältää potilaita, joilla on mahakasvaimet, jotka on lähetetty Craiovan lääketieteen ja farmasian yliopiston gastroenterologian osastolle EUS:n paikalliseen vaiheeseen 18 kuukauden ajan.

Jokaisesta osallistujasta kerätyt tiedot sisältävät: Henkilötiedot (nimi, sukunimi, ikä, sukupuoli); tulokset aikaisemmista tutkimuksista (verenkuva, maksan ja munuaisten toimintakokeet, kasvainmarkkerit, gastroskopia, tietokonetomografia), EUS-muuttujat (mukaan lukien CEH-EUS), histologiset ja immunohistokemialliset löydökset, TNM- ja pTNM-tila (jos mahdollista), molekyylianalyysilöydökset.

Kuvantamistutkimukset Kaikki potilaat arvioidaan EUS:n ja CEH-EUS:n avulla käyttäen radiaalisia EUS-instrumentteja. Ennen tutkimusta mahan tulee olla tyhjä vähintään 8 tuntia. Tutkimuksen aikana normaalista ja kasvainkudoksesta otetaan biopsiat geeniekspressioanalyysiä varten. EUS-tutkimusta varten potilas asetetaan vasemmalle sivulle. EUS-kiikari asetetaan suoran näön alle, ohitetaan kasvain ja tutkimus tulee aloittaa poistumisen yhteydessä 7,5 MHz:llä. Kasvain karakterisoidaan kuvaamalla sen kaikugeenisyyttä, kaikurakennetta, kokoa, leviämistä seinään ja ympäröiviin rakenteisiin, ja se lavastetaan TNM-luokituksen modifikaatiolla. Teho-Doppler-signaalien läsnäolo/puute huomioidaan. Kaikki imusolmukkeet raportoidaan niiden enimmäiskoon, kaikukyvyn, muodon ja marginaalien kanssa. Solmuja, joiden halkaisija on yli 5 mm, ulkonäöltään kielteinen, pyöreä muoto (eikä munamainen tai litteä), jyrkästi rajattu ja lähellä kasvainta, epäillään pahanlaatuisiksi.

CEH-EUS-menettely: Käytetään kahden paneelin kuvaa, jossa oikealla puolella on tavanomainen harmaasävy B-moodin EUS-kuva ja vasemmalla puolella kontrasti harmoninen kuva, ennalta määritettyjen esiasetusten mukaisesti. Tutkimus suoritetaan alhaisella mekaanisella indeksillä (dynaaminen laajakaistakontrastinen harmoninen kuvaustila) 0,2. Ajastimen aloituspisteenä pidetään suonensisäisen varjoaineen injektion (SonoVue 2,4 ml) hetkeä, jolloin koko elokuva (T0-T120s) tallennetaan ultraäänijärjestelmän sulautettuun kiintolevyyn myöhempää analysointia varten. Tuumorin perfuusion objektiivisen mittauksen parametreja ovat tehostumisen maksimiintensiteetti, keskimääräinen kulkuaika, huipulle saavuttamisaika (pesuaika), sisäänpesun kaltevuus, käyrän alla oleva pinta-ala, jotka edustavat epäsuorasti verenkiertoa tai veren määrää GC-potilailla.

Komplikaatioita voi esiintyä EUS:n aikana, mutta ne ovat harvinaisia. Nämä koostuvat verenvuodosta biopsiakohdassa, joka on yleensä vähäistä, itsestään rajoittuvaa ja vaatii harvoin seurantaa. Vatsan perforaatio on erittäin harvinaista. Ultraäänivarjoaineen (Sonovue®) turvallisuusprofiili osoitti erittäin vähäistä sivuvaikutusten ilmaantuvuutta. Se ei ole munuaistoksinen, ja yliherkkyyden tai vakavien allergisten tapahtumien ilmaantuvuus on pienempi kuin nykyisillä röntgensädeaineilla ja verrattavissa muihin magneettiresonanssivarjoaineisiin. Sono-Vue on hyväksytty kliiniseen käyttöön EU-maissa.

Tutkimuksen aikana kerätty biologinen materiaali pakastetaan ja varastoidaan. Tämä sisältää yhden ml:n kokoverta ja 4 kudosbiopsiaa (2 normaalista kudoksesta ja 2 kasvaimesta), kukin 2–3 mm. Kun odotettu osallistujamäärä saavutetaan, näytteille tehdään molekyylitutkimukset angiogeneesimarkkerien arvioimiseksi, kuten protokollassa on tarkemmin kuvattu. Biologisia aineita säilytetään ja analysoidaan arviolta 20 kuukauden ajan kokeen alkamisesta. Biopsianäytteet immunohistokemiaa varten sisällytetään formaliiniliuokseen ja lähetetään patologian laboratorioon.

Molekyylitestit

• Verianalyysi. Kokoveri (1 ml) kerätään ennen kuvantamista Eppendorf-putkeen EDTA-liuoksella, sijoitetaan välittömästi 40 °C:seen enintään 24 tunniksi ja säilytetään sitten -80 °C:ssa angiogeenisten tekijöiden myöhempää analysointia varten.
• Biopsianäytteet normaalista ja GC-kudoksesta. Geeniekspressio analysoidaan käyttämällä qPCR:ää Taqman®-leimattujen koettimien kanssa. Reaaliaikaisella RT-PCR:llä saatujen tulosten kvantifioimiseksi käytetään standardikäyrämenetelmää. Parinäytteet kerätään RNAlateriin (Ambion), säilytetään 40 °C:ssa 12–24 tuntia ja säilytetään sitten -80 °C:ssa. Myöhemmin analyysi arvioi angiogeenisten markkerien geenien ilmentymisen.

Immunohistokemia IHC keskittyy angiogeenisiin markkereihin: VEGF-A-perhe ja niiden reseptorit: VEGFR sekä tyrosiinikinaasireseptorit (RTK:t).

VEGF-C:n ilmentyminen kasvainnäytteissä (lymfangiogeneesin merkki) määritetään. Lisäksi määritetään korrelaatio EUS-löydösten (N-vaihe) ja VEGF-C:n ilmentymisen välillä.

Mikroverisuonitiheys (MVD) lasketaan käyttämällä CD105:n immunohistokemiaa.

Tilastollinen analyysi Tutkimukseen ilmoittautuneiden arvioitu määrä on vähintään 50 ensimmäisen 24 kuukauden aikana. Suoritetaan sekä kuvaava data-analyysi että tilastollinen päättely.

CE-EUS-parametrien ja patologisten ja geneettisten löydösten välisiä korrelaatioita analysoidaan käyttämällä T-testiä ja Pearson-korrelaatiokerrointa (r) jatkuvalle datalle, kun taas Chi-neliötestiä sovelletaan kategorisille tiedoille. Yksisuuntainen varianssianalyysi (ANOVA) suoritetaan vertailua varten eri alaryhmien (T-vaiheet) välillä. Eloonjäämisanalyysi diagnoosihetkestä lähtien arvioidaan Kaplan-Meyer-käyrien avulla. Perinteiset parametrit, kuten TNM-vaihe, hoidon tyyppi, analysoidaan. Tilastollinen merkitsevyys määritellään p-arvoksi, joka on pienempi kuin 0,05.

Nämä minimaaliset riskit ovat suurempia kuin mahdolliset vaikutukset tulevaan potilaiden hoitoon.

Tutkittavat saavat suostumuksen kirjallisten ja suullisten tietojen puolesta ennen tutkimukseen ottamista. Haastattelussa käsitellään yksityiskohtaista tietoa, mukaan lukien ymmärrettävä esittely hankkeesta sen ennustettavissa olevine riskeineen ja sivuvaikutuksineen, odotettavissa olevista tuloksista ja tutkimuksen hyödyistä.

Mahdollisista odottamattomista tapahtumista tai haittavaikutuksista ilmoitetaan välittömästi alueelliselle biolääketieteen eettiselle toimikunnalle.