"Mekanismer och biomarkörer för svar och resistens mot nuvarande riktade terapier vid magcancer" (THERRES) (THERRES)

Studiens design är prospektiv och kommer att inkludera patienter med gastriska tumörer som hänvisats till gastroenterologiska avdelningen från University of Medicine and Pharmacy of Craiova för EUS lokal staging inskrivna under 18 månader.

Data som samlas in för varje deltagare kommer att omfatta: Personuppgifter (namn, efternamn, ålder, kön); resultat från tidigare undersökningar (blodantal, lever- och njurfunktionstester, tumörmarkörer, gastroskopi, datortomografi), EUS-variabler (inklusive CEH-EUS), histologiska och immunhistokemiska fynd, TNM- och pTNM-status (om möjligt), fynd från molekylär analys.

Avbildningstester Alla patienter kommer att utvärderas av EUS och CEH-EUS med hjälp av radiella EUS-instrument. Innan undersökningen påbörjas måste magen vara tom i minst 8 timmar. Under undersökningen kommer biopsier att tas från normal- och tumörvävnad för genuttrycksanalys. För EUS-undersökning kommer patienten att placeras i vänster sidoläge. EUS-skopet kommer att sättas in under direkt syn, passeras av tumören och undersökningen bör påbörjas under utsättningen vid 7,5 MHz. Tumören kommer att karakteriseras genom att beskriva dess ekogenicitet, ekostruktur, storlek, utsträckning in i väggen och omgivande strukturer, och den kommer att iscensättas med hjälp av modifieringen av TNM-klassificeringen. Närvaron/frånvaron av Doppler-effektsignaler kommer att noteras. Alla lymfkörtlar kommer att rapporteras med maximal storlek, ekogenicitet, form och marginaler. Noder som är större än 5 mm i diameter, med hypoechoiskt utseende, rund form (snarare än äggformad eller platt), skarpt avgränsade gränser och placerade i närheten av tumören kommer att misstänkas för malignitet.

CEH-EUS-procedur: En bild med två paneler med den vanliga EUS-bilden i gråskala B-läge på höger sida och med den kontrasterande harmoniska bilden på vänster sida kommer att användas, enligt förinställda förinställningar. Undersökningen kommer att utföras vid ett lågt mekaniskt index (dynamiskt bredbandskontrast harmonisk bildåtergivningsläge) på 0,2. Startpunkten för timern kommer att betraktas som ögonblicket för intravenös kontrastinjektion (SonoVue 2,4 mL), med hela filmen (T0-T120s) inspelad på ultraljudssystemets inbyggda hårddisk för senare analys. Parametrar för objektiv mätning av tumörperfusion kommer att inkludera maximal intensitet av förstärkning, genomsnittlig transittid, tid till topp (intvättningstid), insköljningslutning, area under kurvan, som representerar indirekt blodflöde eller blodvolym hos GC-patienter.

Komplikationer kan uppstå under EUS, men de är sällsynta. Dessa består av blödning vid biopsistället som vanligtvis är minimal, självbegränsande och sällan kräver uppföljning. Perforering av magen är extremt sällsynt. Säkerhetsprofilen för ultraljudskontrastmedlet (Sonovue®) visade en mycket låg förekomst av biverkningar. Det är inte nefrotoxiskt och förekomsten av överkänslighet eller allvarliga allergiska händelser är lägre än med nuvarande röntgenmedel och jämförbar med den för andra magnetisk resonanskontrastmedel. Sono-Vue är godkänd för klinisk användning i EU-länder.

Det biologiska material som samlas in under studien kommer att frysas och lagras. Detta kommer att inkludera en ml helblod och 4 vävnadsbiopsier (2 från normal vävnad och 2 från tumören) på 2 till 3 mm vardera. När det förväntade antalet deltagare har uppnåtts kommer proverna att genomgå molekylära studier för att bedöma markörerna för angiogenes som beskrivs närmare i protokollet. Det biologiska materialet kommer att lagras och analyseras under en beräknad tid på 20 månader från försökets början. Biopsiprover för immunhistokemi kommer att inkluderas i formalinlösning och skickas till patologilaboratorium.

Molekylära tester

• Blodanalys. Helblod (1 ml) samlas in före avbildningsprocedurer i ett Eppendorf-rör på EDTA-lösning, placeras omedelbart vid 40°C i maximalt 24 timmar och hålls sedan vid -80°C för senare analys av angiogena faktorer.
• Biopsiprover av normal och GC vävnad. Genuttryck kommer att analyseras med qPCR med Taqman®-märkta prober. För att kvantifiera resultaten som erhålls med realtids-RT-PCR kommer standardkurvmetoden att användas. De parade proverna kommer att samlas in i RNAlater (Ambion), förvaras vid 40°C i 12-24 timmar och sedan förvaras vid -800°C. Senare analys kommer att bedöma genuttrycket av angiogena markörer.

Immunhistokemi IHC kommer att fokuseras på angiogena markörer: VEGF-A-familjen och deras receptorer: VEGFR såväl som tyrosinkinasreceptorer (RTK).

VEGF-C-uttrycket i tumörprover (markör för lymfangiogenes) kommer att kvantifieras. Dessutom kommer en korrelation mellan EUS-fynd (N-stadium) och VEGF-C-uttryck att fastställas.

Mikrokärldensiteten (MVD) kommer att beräknas med hjälp av immunhistokemi för CD105.

Statistisk analys Det uppskattade antalet deltagare som är inskrivna i studien är minst 50 under de första 24 månaderna. Både beskrivande dataanalys och statistisk slutledning kommer att utföras.

Korrelationer mellan CE-EUS parametrar och patologiska och genetiska fynd kommer att analyseras med hjälp av T-testet och Pearsons korrelationskoefficient (r) för kontinuerliga data, medan Chi-kvadrattestet kommer att tillämpas för kategoriska data. Envägsvariansanalys (ANOVA) kommer att utföras för jämförelse mellan olika undergrupper (T-stadier). Överlevnadsanalys från diagnostillfället kommer att utvärderas med hjälp av Kaplan-Meyer-kurvor. Traditionella parametrar som TNM-stadium, typ av behandling kommer att analyseras. Statistisk signifikans kommer att definieras som ett p-värde mindre än 0,05.

Dessa minimala risker kommer att uppvägas av de potentiella konsekvenserna för framtida patientvård.

Forskningspersoner kommer att få samtycke på uppdrag av skriftlig och muntlig information innan inkludering i studien. Intervjun kommer att täcka detaljerad information, inklusive en begriplig presentation av projektet med dess förutsägbara risker och biverkningar, förväntade resultat och fördelar från forskningen.

Eventuella oplanerade händelser eller negativa effekter kommer att rapporteras omedelbart till den regionala etiska kommittén för biomedicinsk forskning.