"Mecanismos y biomarcadores de respuesta y resistencia a las terapias dirigidas actuales en el cáncer gástrico" (THERRES) (THERRES)

El diseño del estudio es prospectivo e incluirá pacientes con tumores gástricos remitidos al Departamento de Gastroenterología de la Universidad de Medicina y Farmacia de Craiova para la estadificación local de EUS inscritos durante 18 meses.

Los datos recopilados para cada participante incluirán: Datos personales (nombre, apellido, edad, sexo); resultados de investigaciones previas (hemograma, pruebas de función hepática y renal, marcadores tumorales, gastroscopia, tomografía computarizada), variables EUS (incluyendo CEH-EUS), hallazgos histológicos e inmunohistoquímicos, estado TNM y pTNM (si es posible), hallazgos de análisis molecular.

Pruebas de imagen Todos los pacientes serán evaluados por USE y CEH-USE, utilizando instrumentos de USE radial. Antes de la investigación, el estómago debe estar vacío durante al menos 8 horas. Durante el examen, se tomarán biopsias de tejido normal y tumoral para el análisis de la expresión génica. Para el examen EUS, el paciente se colocará en posición lateral izquierda. El endoscopio EUS se insertará bajo visión directa, pasará por el tumor y el examen debe comenzar durante la extracción a 7,5 MHz. Se caracterizará el tumor describiendo su ecogenicidad, ecoestructura, tamaño, extensión en la pared y estructuras circundantes, y se estadificará mediante la modificación de la clasificación TNM. Se anotará la presencia/ausencia de señales Doppler de potencia. Todos los ganglios linfáticos se informarán con su tamaño máximo, ecogenicidad, forma y márgenes. Los ganglios mayores de 5 mm de diámetro, con apariencia hipoecogénica, forma redonda (en lugar de ovoide o plana), bordes claramente delimitados y ubicados cerca del tumor serán sospechosos de malignidad.

Procedimiento CEH-USE: Se utilizará una imagen de dos paneles con la imagen de USE en modo B en escala de grises convencional habitual en el lado derecho y con la imagen armónica de contraste en el lado izquierdo, de acuerdo con los valores predeterminados preestablecidos. El examen se realizará con un índice mecánico bajo (modo dinámico de imágenes armónicas de contraste de banda ancha) de 0,2. El punto de partida del cronómetro se considerará el momento de la inyección de contraste intravenoso (SonoVue 2,4 mL), con la película completa (T0-T120s) grabada en el disco duro integrado del sistema de ultrasonido para su posterior análisis. Los parámetros para la medición objetiva de la perfusión tumoral incluirán la intensidad máxima de realce, el tiempo de tránsito medio, el tiempo hasta el pico (tiempo de lavado), la pendiente de lavado, el área bajo la curva, que representan indirectamente el flujo sanguíneo o el volumen sanguíneo en pacientes con GC.

Pueden ocurrir complicaciones durante la USE, pero son raras. Estos consisten en sangrado en el sitio de la biopsia que suele ser mínimo, autolimitado y rara vez requiere seguimiento. La perforación del estómago es extremadamente rara. El perfil de seguridad del agente de contraste de ultrasonido (Sonovue®) mostró una incidencia muy baja de efectos secundarios. No es nefrotóxico y la incidencia de hipersensibilidad o eventos alérgicos graves es menor que con los agentes de rayos X actuales y comparable a la de otros agentes de contraste de resonancia magnética. Sono-Vue está aprobado para uso clínico en países de la UE.

El material biológico recolectado durante el estudio será congelado y almacenado. Esto incluirá un ml de sangre total y 4 biopsias de tejido (2 de tejido normal y 2 del tumor) de 2 a 3 mm cada una. Cuando se alcance el número esperado de participantes, las muestras se someterán a estudios moleculares para evaluar los marcadores de angiogénesis como se detalla más adelante en el protocolo. Los materiales biológicos serán almacenados y analizados durante un tiempo estimado de 20 meses desde el inicio del ensayo. Las muestras de biopsia para inmunohistoquímica se incluirán en solución de formalina y se enviarán al laboratorio de patología.

Pruebas moleculares

• Análisis de sangre. Se recolectará sangre completa (1 ml) antes de los procedimientos de imagen en un tubo Eppendorf en solución de EDTA, se colocará inmediatamente a 40 °C durante un máximo de 24 horas y luego se mantendrá a -800 °C para el análisis posterior de los factores angiogénicos.
• Muestras de biopsia de tejido normal y GC. La expresión génica se analizará mediante qPCR con sondas marcadas con Taqman®. Para cuantificar los resultados obtenidos por RT-PCR en tiempo real se utilizará el método de la curva estándar. Las muestras pareadas se recolectarán en RNAlater (Ambion), se almacenarán a 40 °C durante 12 a 24 horas y luego se mantendrán a -80 °C. Análisis posteriores evaluarán la expresión de genes de marcadores angiogénicos.

La inmunohistoquímica IHC se centrará en los marcadores angiogénicos: la familia VEGF-A y sus receptores: VEGFR, así como los receptores de tirosina quinasas (RTK).

Se cuantificará la expresión de VEGF-C en muestras tumorales (marcador de linfangiogénesis). Además, se establecerá una correlación entre los hallazgos de la USE (etapa N) y la expresión de VEGF-C.

La densidad de microvasos (MVD) se calculará mediante inmunohistoquímica para CD105.

Análisis estadístico El número estimado de participantes inscritos en el estudio es de al menos 50 durante los primeros 24 meses. Se realizará tanto el análisis descriptivo de datos como la inferencia estadística.

Las correlaciones entre los parámetros CE-EUS y los hallazgos patológicos y genéticos se analizarán mediante la prueba T y el coeficiente de correlación de Pearson (r) para datos continuos, mientras que se aplicará la prueba de Chi-cuadrado para datos categóricos. Se realizará un análisis de varianza de una vía (ANOVA) para la comparación entre diferentes subgrupos (etapas T). El análisis de supervivencia desde el momento del diagnóstico se evaluará mediante curvas de Kaplan-Meyer. Se analizarán parámetros tradicionales como estadio TNM, tipo de tratamiento. La significación estadística se definirá como un valor de p inferior a 0,05.

Estos riesgos mínimos se verán superados por las implicaciones potenciales para la atención futura de los pacientes.

Los sujetos de investigación recibirán el consentimiento en nombre de la información escrita y oral antes de su inclusión en el estudio. La entrevista cubrirá información detallada, incluida una presentación comprensible del proyecto con sus riesgos y efectos secundarios predecibles, los resultados esperados y los beneficios de la investigación.

Cualquier evento no planificado o efecto adverso será informado de inmediato al Comité Regional de Ética en investigación biomédica.