"Meccanismi e biomarcatori di risposta e resistenza alle attuali terapie mirate nel cancro gastrico" (THERRES) (THERRES)

Il disegno dello studio è prospettico e includerà pazienti con tumori gastrici indirizzati al Dipartimento di Gastroenterologia dell'Università di Medicina e Farmacia di Craiova per la stadiazione locale EUS arruolati per 18 mesi.

I dati raccolti per ciascun partecipante includeranno: Dati anagrafici (nome, cognome, età, sesso); risultati di indagini precedenti (emocromo, test di funzionalità epatica e renale, marcatori tumorali, gastroscopia, tomografia computerizzata), variabili EUS (incluso CEH-EUS), risultati istologici e immunoistochimici, stato TNM e pTNM (se possibile), risultati di analisi molecolari.

Test di imaging Tutti i pazienti saranno valutati mediante EUS e CEH-EUS, utilizzando strumenti EUS radiali. Prima dell'indagine lo stomaco deve essere vuoto per almeno 8 ore. Durante l'esame verranno prelevate biopsie da tessuto normale e tumorale per l'analisi dell'espressione genica. Per l'esame EUS, il paziente verrà posizionato in posizione laterale sinistra. L'ambito EUS sarà inserito sotto visione diretta, passato dal tumore e l'esame dovrebbe iniziare durante il ritiro a 7,5 MHz. Il tumore sarà caratterizzato descrivendone l'ecogenicità, l'ecostruttura, le dimensioni, l'estensione nella parete e nelle strutture circostanti, e sarà stadiato utilizzando la modifica della classificazione TNM. Si noterà la presenza/assenza di segnali power Doppler. Tutti i linfonodi saranno riportati con le loro dimensioni massime, ecogenicità, forma e margini. I nodi di diametro superiore a 5 mm, con aspetto ipoecogeno, forma rotonda (piuttosto che ovoidale o piatta), bordi nettamente delimitati e situati vicino al tumore saranno sospettati di malignità.

Procedura CEH-EUS: verrà utilizzata un'immagine a due pannelli con la consueta immagine EUS convenzionale in scala di grigi B-mode sul lato destro e con l'immagine armonica di contrasto sul lato sinistro, in base a preset prestabiliti. L'esame verrà eseguito a un indice meccanico basso (modalità di imaging armonico a contrasto dinamico a banda larga) di 0,2. Il punto di partenza del timer sarà considerato il momento dell'iniezione endovenosa di contrasto (SonoVue 2,4 mL), con l'intero filmato (T0-T120s) registrato sull'HDD integrato del sistema ecografico per una successiva analisi. I parametri per la misurazione oggettiva della perfusione tumorale includeranno l'intensità massima dell'enhancement, il tempo di transito medio, il tempo di picco (tempo di lavaggio), la pendenza del lavaggio, l'area sotto la curva, che rappresentano indirettamente il flusso sanguigno o il volume sanguigno nei pazienti con GC.

Durante l'EUS possono verificarsi complicazioni, ma sono rare. Questi consistono in sanguinamento nel sito della biopsia che di solito è minimo, autolimitato e raramente richiede un follow-up. La perforazione dello stomaco è estremamente rara. Il profilo di sicurezza del mezzo di contrasto per ultrasuoni (Sonovue®) ha mostrato un'incidenza molto bassa di effetti collaterali. Non è nefrotossico e l'incidenza di ipersensibilità o eventi allergici gravi è inferiore rispetto agli attuali agenti radiografici e paragonabile a quella di altri mezzi di contrasto per risonanza magnetica. Sono-Vue è approvato per l'uso clinico nei paesi dell'UE.

Il materiale biologico raccolto durante lo studio sarà congelato e conservato. Ciò includerà un ml di sangue intero e 4 biopsie tissutali (2 da tessuto normale e 2 dal tumore) da 2 a 3 mm ciascuna. Quando viene raggiunto il numero previsto di partecipanti, i campioni saranno sottoposti a studi molecolari per valutare i marcatori dell'angiogenesi come dettagliato più avanti nel protocollo. I materiali biologici saranno conservati e analizzati per un tempo stimato di 20 mesi dall'inizio della sperimentazione. I campioni bioptici per immunoistochimica saranno inclusi in soluzione di formalina e inviati al laboratorio di patologia.

Test molecolari

• Analisi del sangue. Il sangue intero (1 ml) verrà raccolto prima delle procedure di imaging in una provetta Eppendorf su soluzione EDTA, posta immediatamente a 40°C per un massimo di 24 ore, e quindi conservata a -800°C per la successiva analisi dei fattori angiogenici.
• Campioni bioptici di tessuto normale e GC. L'espressione genica sarà analizzata mediante qPCR con sonde marcate con Taqman®. Per quantificare i risultati ottenuti mediante RT-PCR in tempo reale verrà utilizzato il metodo della curva standard. I campioni appaiati saranno raccolti in RNAlater (Ambion), conservati a 40°C per 12-24 ore, e poi mantenuti a -80°C. Un'analisi successiva valuterà l'espressione genica dei marcatori angiogenici.

L'immunoistochimica IHC sarà focalizzata sui marcatori angiogenici: famiglia VEGF-A e sui loro recettori: VEGFR e recettori tirosin-chinasici (RTK).

Verrà quantificata l'espressione di VEGF-C nei campioni tumorali (marcatore della linfangiogenesi). Inoltre, verrà stabilita una correlazione tra i risultati dell'EUS (stadio N) e l'espressione di VEGF-C.

La densità microvasale (MVD) sarà calcolata mediante immunoistochimica per CD105.

Analisi statistica Il numero stimato di partecipanti iscritti allo studio è di almeno 50 durante i primi 24 mesi. Verranno eseguite sia l'analisi descrittiva dei dati che l'inferenza statistica.

Le correlazioni tra parametri CE-EUS e riscontri patologici e genetici saranno analizzate utilizzando il T-test e il coefficiente di correlazione di Pearson (r) per dati continui, mentre il test Chi-quadrato sarà applicato per dati categorici. Verrà eseguita un'analisi della varianza unidirezionale (ANOVA) per il confronto tra diversi sottogruppi (stadi T). L'analisi della sopravvivenza dal momento della diagnosi sarà valutata utilizzando le curve di Kaplan-Meyer. Saranno analizzati parametri tradizionali come stadio TNM, tipo di trattamento. La significatività statistica sarà definita come p-value inferiore a 0,05.

Questi rischi minimi saranno controbilanciati dalle potenziali implicazioni per la futura cura del paziente.

I soggetti della ricerca riceveranno il consenso per conto di informazioni scritte e orali prima dell'inclusione nello studio. L'intervista riguarderà informazioni dettagliate, inclusa una presentazione comprensibile del progetto con i suoi prevedibili rischi ed effetti collaterali, i risultati attesi ei benefici della ricerca.

Eventuali eventi imprevisti o effetti avversi saranno immediatamente segnalati al Comitato Etico Regionale per la ricerca biomedica.