"A gyomorrák jelenlegi célzott terápiáira adott válasz és rezisztencia mechanizmusai és biomarkerei" (THERRES) (THERRES)

A vizsgálat terv prospektív, és gyomordaganatban szenvedő betegeket is magában foglal majd, akiket a Craiovai Orvostudományi és Gyógyszerészeti Egyetem gasztroenterológiai osztályára utaltak be EUS helyi stádiumbesorolásra 18 hónapon keresztül.

Az egyes résztvevőkről gyűjtött adatok a következők: Személyes adatok (név, vezetéknév, életkor, nem); korábbi vizsgálatok eredményei (vérkép, máj- és vesefunkciós vizsgálatok, tumormarkerek, gasztroszkópia, komputertomográfia), EUS változók (beleértve a CEH-EUS-t), szövettani és immunhisztokémiai leletek, TNM és pTNM állapot (ha lehetséges), molekuláris analízis leletek.

Képalkotó vizsgálatok Minden beteget EUS és CEH-EUS értékelnek, radiális EUS műszerekkel. A vizsgálat előtt a gyomornak legalább 8 órán keresztül üresnek kell lennie. A vizsgálat során normál és tumorszövetből biopsziát veszünk génexpressziós elemzés céljából. Az EUS vizsgálathoz a beteg bal oldali helyzetbe kerül. Az EUS szkóp közvetlen látás alá kerül, áthalad a daganaton, és a vizsgálatot a kihúzáskor kell elkezdeni 7,5 MHz-en. A daganatot echogenitásának, echostruktúrájának, méretének, falba és a környező struktúrákba való kiterjedésének leírásával jellemezzük, és a TNM osztályozás módosításával stádiumba állítjuk. A teljesítmény-Doppler-jelek megléte/hiánya feljegyzésre kerül. Minden nyirokcsomót jelenteni kell a maximális méretével, echogenitásával, alakjával és széleivel. Az 5 mm-nél nagyobb átmérőjű, visszhangtalan megjelenésű, kerek (nem tojás alakú vagy lapos), élesen elhatárolt határú és a daganat közelében elhelyezkedő csomók rosszindulatú daganatra gyanakodnak.

CEH-EUS eljárás: Két paneles kép kerül felhasználásra, a jobb oldalon a szokásos szürkeárnyalatos B-módú EUS képpel, a bal oldalon pedig a kontrasztos harmonikus képpel, az előre meghatározott beállítások szerint. A vizsgálatot alacsony, 0,2-es mechanikai indexen (dinamikus szélessávú kontrasztos harmonikus képalkotási mód) végezzük. Az időzítő kezdőpontjának az intravénás kontrasztinjekció (SonoVue 2,4 ml) pillanatát tekintjük, a teljes filmet (T0-T120s) az ultrahangrendszer beágyazott HDD-jére rögzítjük későbbi elemzés céljából. A tumor perfúzió objektív mérésének paraméterei közé tartozik a fokozódás maximális intenzitása, az átlagos tranzitidő, a csúcs eléréséig eltelt idő (bemosási idő), a bemosódási lejtő, a görbe alatti terület, amelyek közvetetten a véráramlást vagy a vértérfogatot jelentik GC-betegeknél.

Az EUS során szövődmények fordulhatnak elő, de ritkák. Ezek a biopszia helyén jelentkező vérzésből állnak, amely általában minimális, önmagában megszűnik és ritkán igényel nyomon követést. A gyomor perforációja rendkívül ritka. Az ultrahangos kontrasztanyag (Sonovue®) biztonsági profilja nagyon alacsony mellékhatásokat mutatott. Nem nefrotoxikus, és a túlérzékenységi vagy súlyos allergiás események előfordulási gyakorisága alacsonyabb, mint a jelenlegi röntgensugaras szerek esetében, és összehasonlítható más mágneses rezonancia kontrasztanyagokkal. A Sono-Vue klinikai felhasználásra engedélyezett az EU-országokban.

A vizsgálat során összegyűjtött biológiai anyagot lefagyasztjuk és tároljuk. Ez egy ml teljes vért és 4 szövetbiopsziát (2 normál szövetből és 2 daganatból) tartalmaz, egyenként 2-3 mm-es. A résztvevők várt számának elérésekor a mintákat molekuláris vizsgálatoknak vetik alá az angiogenezis markereinek értékelésére, amint azt a protokollban részletezzük. A biológiai anyagok tárolása és elemzése a kísérlet kezdetétől számított 20 hónapig várható. Az immunhisztokémiához szükséges biopsziás mintákat formalinoldatba helyezik, és elküldik a patológiai laboratóriumba.

Molekuláris tesztek

• Vérelemzés. A képalkotó eljárások előtt teljes vért (1 ml) gyűjtünk egy Eppendorf-csőben EDTA-oldattal, azonnal 40 °C-ra helyezzük maximum 24 órára, majd -800 °C-on tartjuk az angiogén faktorok későbbi elemzéséhez.
• Biopsziás minták normál és GC szövetből. A génexpressziót qPCR segítségével elemezzük Taqman®-jelzett próbákkal. A valós idejű RT-PCR-rel kapott eredmények számszerűsítésére a standard görbe módszert alkalmazzuk. A párosított mintákat RNAlaterben (Ambion) gyűjtjük, 40 °C-on 12-24 órán át tároljuk, majd -80 °C-on. A későbbi elemzés felméri az angiogén markerek génexpresszióját.

Immunhisztokémia Az IHC az angiogén markerekre fog összpontosítani: VEGF-A család és receptoraik: VEGFR, valamint tirozin kináz receptorok (RTK-k).

A tumormintákban a VEGF-C expressziót (a limfangiogenezis markere) számszerűsítjük. Ezen túlmenően összefüggést állapítunk meg az EUS-leletek (N-stádium) és a VEGF-C expressziója között.

A mikroerek sűrűségét (MVD) a CD105 immunhisztokémiai módszerével számítjuk ki.

Statisztikai elemzés A vizsgálatba bevont résztvevők becsült száma az első 24 hónapban legalább 50. Leíró adatelemzést és statisztikai következtetést is végeznek.

A CE-EUS paraméterek és a kóros és genetikai leletek közötti összefüggéseket a T-teszt és a Pearson korrelációs együttható (r) segítségével elemezzük folyamatos adatok esetén, míg a Khi-négyzet tesztet a kategorikus adatokra. Egyirányú varianciaanalízist (ANOVA) végeznek a különböző alcsoportok (T szakaszok) összehasonlítására. A diagnózis felállításától számított túlélési elemzést Kaplan-Meyer görbék segítségével értékelik. Elemezzük a hagyományos paramétereket, mint a TNM szakasz, a kezelés típusa. A statisztikai szignifikanciát 0,05-nél kisebb p-értékként határozzuk meg.

Ezeket a minimális kockázatokat felülmúlják a jövőbeli betegellátásra gyakorolt ​​lehetséges következmények.

A kutatási alanyok írásbeli és szóbeli tájékoztatásuk nevében beleegyezést kapnak, mielőtt bevonják őket a vizsgálatba. Az interjú részletes információkat tartalmaz, beleértve a projekt érthető bemutatását, előre látható kockázataival és mellékhatásaival, a kutatás várható eredményeivel és előnyeivel.

Minden nem tervezett eseményt vagy káros hatást azonnal jelenteni kell az orvosbiológiai kutatásokkal foglalkozó regionális etikai bizottságnak.