"Mekanismer og biomarkører for respons og motstand mot nåværende målrettede terapier i magekreft" (THERRES) (THERRES)

Studiedesignet er prospektivt og vil inkludere pasienter med gastriske svulster henvist til Gastroenterology Department fra University of Medicine and Pharmacy of Craiova for EUS lokal stadie påmeldt i løpet av 18 måneder.

Data som samles inn for hver deltaker vil inkludere: Personlige data (navn, etternavn, alder, kjønn); resultater fra tidligere undersøkelser (blodtelling, lever- og nyrefunksjonsprøver, tumormarkører, gastroskopi, computertomografi), EUS-variabler (inkludert CEH-EUS), histologiske og immunhistokjemiske funn, TNM- og pTNM-status (hvis mulig), molekylære analysefunn.

Bildetester Alle pasienter vil bli evaluert av EUS og CEH-EUS, ved bruk av radielle EUS-instrumenter. Før undersøkelsen må magen være tom i minst 8 timer. Under undersøkelsen vil det bli tatt biopsier fra normal- og tumorvev for genekspresjonsanalyse. Ved EUS-undersøkelse vil pasienten bli plassert i venstre sideleie. EUS-skopet vil bli satt inn under direkte syn, bestått av svulsten og undersøkelsen bør begynne under uttak ved 7,5 MHz. Svulsten vil karakteriseres ved å beskrive dens ekkogenisitet, ekkostruktur, størrelse, utstrekning inn i veggen og omkringliggende strukturer, og den vil bli iscenesatt ved hjelp av modifikasjonen av TNM-klassifiseringen. Tilstedeværelsen/fraværet av Doppler-signaler vil bli notert. Alle lymfeknuter vil bli rapportert med maksimal størrelse, ekkogenisitet, form og marginer. Noder større enn 5 mm i diameter, med hypoekkoisk utseende, rund form (i stedet for eggformet eller flat), skarpt avgrensede grenser og plassert i nærheten av svulsten vil mistenkes for malignitet.

CEH-EUS-prosedyre: Et topanelsbilde med det vanlige konvensjonelle gråskala B-modus EUS-bildet på høyre side og med det kontrastharmoniske bildet på venstre side vil bli brukt, i henhold til forhåndsinnstilte forhåndsinnstillinger. Undersøkelsen vil bli utført ved en lav mekanisk indeks (dynamisk bredbånds kontrast harmonisk bildebehandlingsmodus) på 0,2. Startpunktet for tidtakeren vil bli betraktet som øyeblikket for intravenøs kontrastinjeksjon (SonoVue 2,4 mL), med hele filmen (T0-T120s) tatt opp på den innebygde HDD-en til ultralydsystemet for senere analyse. Parametre for objektiv måling av tumorperfusjon vil inkludere maksimal intensitet av forsterkning, gjennomsnittlig transittid, tid til topp (innvaskingstid), innvaskingshelling, område under kurven, som representerer indirekte blodstrøm eller blodvolum hos GC-pasienter.

Komplikasjoner kan oppstå under EUS, men de er sjeldne. Disse består av blødning på biopsistedet som vanligvis er minimal, selvbegrensende og sjelden krever oppfølging. Perforering av magen er ekstremt sjelden. Sikkerhetsprofilen til ultralydkontrastmidlet (Sonovue®) viste svært lav forekomst av bivirkninger. Det er ikke nefrotoksisk og forekomsten av overfølsomhet eller alvorlige allergiske hendelser er lavere enn med gjeldende røntgenmidler og sammenlignbar med andre magnetisk resonanskontrastmidler. Sono-Vue er godkjent for klinisk bruk i EU-land.

Det biologiske materialet som samles inn under studien vil bli frosset og lagret. Dette vil inkludere en ml fullblod og 4 vevsbiopsier (2 fra normalt vev og 2 fra svulsten) på 2 til 3 mm hver. Når det forventede antall deltakere er nådd, vil prøvene gjennomgå molekylære studier for å vurdere markørene for angiogenese som beskrevet nærmere i protokollen. De biologiske materialene vil bli lagret og analysert i løpet av en estimert tid på 20 måneder fra starten av forsøket. Biopsiprøver for immunhistokjemi vil bli inkludert i formalinløsning og sendt til patologisk laboratorium.

Molekylære tester

• Blodanalyse. Fullblod (1 ml) vil bli samlet før bildebehandlingsprosedyrer i et Eppendorf-rør på EDTA-løsning, plassert umiddelbart ved 40C i maksimalt 24 timer, og deretter holdt ved -800C for senere analyse av angiogene faktorer.
• Biopsiprøver av normalt og GC vev. Genekspresjon vil bli analysert ved bruk av qPCR med Taqman®-merkede prober. For å kvantifisere resultatene oppnådd ved sanntids RT-PCR vil standardkurvemetoden bli brukt. De sammenkoblede prøvene vil bli samlet i RNAlater (Ambion), lagret ved 40C i 12-24 timer, og deretter oppbevart ved -800C. Senere analyse vil vurdere genuttrykket av angiogene markører.

Immunhistokjemi IHC vil være fokusert på angiogene markører: VEGF-A-familien og deres reseptorer: VEGFR samt tyrosinkinase-reseptorer (RTK).

VEGF-C-ekspresjonen i tumorprøver (markør for lymfangiogenese) vil kvantifiseres. Videre vil det etableres en korrelasjon mellom EUS-funn (N-stadium) og VEGF-C-ekspresjon.

Mikrokartettheten (MVD) vil bli beregnet ved hjelp av immunhistokjemi for CD105.

Statistisk analyse Det estimerte antallet deltakere som er registrert i studien er minst 50 i løpet av de første 24 månedene. Både deskriptiv dataanalyse og statistisk slutning vil bli utført.

Korrelasjoner mellom CE-EUS parametere og patologiske og genetiske funn vil bli analysert ved hjelp av T-testen og Pearson korrelasjonskoeffisienten (r) for kontinuerlige data, mens Chi-square testen vil bli brukt for kategoriske data. Enveis variansanalyse (ANOVA) vil bli utført for sammenligning mellom ulike undergrupper (T-stadier). Overlevelsesanalyse fra diagnoseøyeblikket vil bli evaluert ved hjelp av Kaplan-Meyer-kurver. Tradisjonelle parametere som TNM stadium, type behandling vil bli analysert. Statistisk signifikans vil bli definert som en p-verdi mindre enn 0,05.

Disse minimale risikoene vil bli oppveid av potensielle implikasjoner for fremtidig pasientbehandling.

Forskere vil motta samtykke på vegne av skriftlig og muntlig informasjon før inkludering i studien. Intervjuet vil dekke detaljert informasjon, inkludert en forståelig presentasjon av prosjektet med dets forutsigbare risikoer og bivirkninger, forventede resultater og fordeler fra forskningen.

Eventuelle uplanlagte hendelser eller uønskede effekter vil umiddelbart rapporteres til den regionale etiske komité for biomedisinsk forskning.