«Механизмы и биомаркеры ответа и устойчивости к современным таргетным методам лечения рака желудка» (THERRES) (THERRES)

Дизайн исследования является проспективным и будет включать пациентов с опухолями желудка, направленных в отделение гастроэнтерологии Университета медицины и фармации Крайовы для локального стадирования эндоУЗИ в течение 18 месяцев.

Данные, собранные для каждого участника, будут включать: Персональные данные (имя, фамилия, возраст, пол); результаты предыдущих исследований (анализ крови, функциональные пробы печени и почек, опухолевые маркеры, гастроскопия, компьютерная томография), параметры ЭУЗИ (включая ЦЭГ-ЭУЗИ), гистологические и иммуногистохимические данные, статус TNM и pTNM (если возможно), данные молекулярного анализа.

Визуализирующие тесты Все пациенты будут оцениваться с помощью эндоУЗИ и CEH-EUS с использованием радиальных инструментов EUS. Перед исследованием желудок должен быть пустым не менее 8 часов. Во время обследования будут взяты биопсии нормальной и опухолевой ткани для анализа экспрессии генов. Для ЭУЗИ пациента укладывают на левый бок. ЭУЗИ будет введен под прямым углом зрения, пройдет мимо опухоли, и исследование должно начаться во время извлечения на частоте 7,5 МГц. Опухоль будет охарактеризована с описанием ее эхогенности, эхоструктуры, размера, распространения в стенку и окружающие структуры, а также будет стадирована с использованием модификации классификации TNM. Будет отмечено наличие/отсутствие сигналов энергетического доплера. Все лимфатические узлы будут зарегистрированы с их максимальным размером, эхогенностью, формой и краями. Узлы диаметром более 5 мм, гипоэхогенного вида, округлой формы (а не яйцевидной или плоской), с резко очерченными границами и расположенные рядом с опухолью будут заподозрены на злокачественность.

Процедура CEH-EUS: будет использоваться двухпанельное изображение с обычным традиционным изображением EUS в B-режиме в оттенках серого с правой стороны и контрастным гармоническим изображением с левой стороны в соответствии с предварительно установленными настройками. Обследование будет проводиться при низком механическом индексе (режим динамической широкополосной контрастной гармоники) 0,2. Точкой отсчета таймера будет считаться момент внутривенного введения контраста (SonoVue 2,4 мл), при этом весь фильм (T0-T120s) будет записан на встроенный жесткий диск ультразвуковой системы для последующего анализа. Параметры для объективного измерения перфузии опухоли будут включать максимальную интенсивность усиления, среднее время транзита, время до пика (время промывки), наклон промывки, площадь под кривой, косвенно отражающие кровоток или объем крови у пациентов с РЖ.

Осложнения могут возникнуть во время ЭУЗИ, но они редки. Они состоят из кровотечения в месте биопсии, которое обычно минимально, самокупируется и редко требует последующего наблюдения. Перфорация желудка встречается крайне редко. Профиль безопасности ультразвукового контрастного вещества (Sonovue®) показал очень низкую частоту побочных эффектов. Он не нефротоксичен, и частота гиперчувствительности или тяжелых аллергических явлений ниже, чем у современных рентгенологических агентов, и сравнима с таковой у других контрастных агентов для магнитного резонанса. Sono-Vue одобрен для клинического использования в странах ЕС.

Биологический материал, собранный в ходе исследования, будет заморожен и сохранен. Это будет включать один мл цельной крови и 4 биопсии ткани (2 из нормальной ткани и 2 из опухоли) размером от 2 до 3 мм каждая. Когда будет достигнуто ожидаемое количество участников, образцы будут подвергнуты молекулярным исследованиям для оценки маркеров ангиогенеза, как подробно описано далее в протоколе. Биологические материалы будут храниться и анализироваться в течение примерно 20 месяцев с начала испытания. Образцы биопсии для иммуногистохимии будут помещены в раствор формалина и отправлены в патологоанатомическую лабораторию.

Молекулярные тесты

• Анализ крови. Цельную кровь (1 мл) собирают перед процедурами визуализации в пробирку Эппендорфа с раствором ЭДТА, сразу же помещают при 40°С на максимум 24 часа, а затем хранят при -80°С для последующего анализа факторов ангиогенеза.
• Образцы биопсии нормальной и GC ткани. Экспрессию генов будут анализировать с помощью количественной ПЦР с зондами, меченными Taqman®. Для количественной оценки результатов, полученных с помощью ОТ-ПЦР в реальном времени, будет использоваться метод стандартной кривой. Парные образцы будут собираться в RNAlater (Ambion), храниться при 40°С в течение 12-24 часов, а затем храниться при -80°С. Более поздний анализ оценит экспрессию генов ангиогенных маркеров.

Иммуногистохимия IHC будет сосредоточена на ангиогенных маркерах: семействе VEGF-A и их рецепторах: VEGFR, а также рецепторах тирозинкиназ (RTK).

Будет количественно определена экспрессия VEGF-C в образцах опухоли (маркер лимфангиогенеза). Кроме того, будет установлена ​​корреляция между результатами ЭУЗИ (этап N) и экспрессией VEGF-C.

Плотность микрососудов (MVD) будет рассчитана с использованием иммуногистохимии для CD105.

Статистический анализ Предполагаемое количество участников, включенных в исследование, составляет не менее 50 человек в течение первых 24 месяцев. Будет выполнен как описательный анализ данных, так и статистический вывод.

Корреляции между параметрами CE-EUS и патологическими и генетическими данными будут проанализированы с использованием T-критерия и коэффициента корреляции Пирсона (r) для непрерывных данных, а критерий хи-квадрат будет применяться для категорийных данных. Односторонний дисперсионный анализ (ANOVA) будет выполняться для сравнения между различными подгруппами (этапы T). Анализ выживаемости с момента постановки диагноза будет оцениваться с использованием кривых Каплана-Мейера. Будут проанализированы традиционные параметры, такие как стадия TNM, тип лечения. Статистическая значимость будет определяться как p-значение менее 0,05.

Эти минимальные риски будут перевешиваться потенциальными последствиями для ухода за пациентами в будущем.

Субъекты исследования получат согласие от имени письменной и устной информации перед включением в исследование. Интервью будет содержать подробную информацию, включая понятную презентацию проекта с его предсказуемыми рисками и побочными эффектами, ожидаемыми результатами и преимуществами исследования.

О любых незапланированных событиях или побочных эффектах будет немедленно сообщено Региональному комитету по этике биомедицинских исследований.