"Mechanismen und Biomarker des Ansprechens und der Resistenz auf aktuelle zielgerichtete Therapien bei Magenkrebs" (THERRES) (THERRES)

Das Studiendesign ist prospektiv und schließt Patienten mit Magentumoren ein, die an die gastroenterologische Abteilung der Universität für Medizin und Pharmazie von Craiova für ein lokales EUS-Staging überwiesen werden und über einen Zeitraum von 18 Monaten aufgenommen werden.

Zu den für jeden Teilnehmer erhobenen Daten gehören: Personenbezogene Daten (Name, Nachname, Alter, Geschlecht); Ergebnisse aus Voruntersuchungen (Blutbild, Leber- und Nierenfunktionstests, Tumormarker, Gastroskopie, Computertomographie), EUS-Variablen (einschließlich CEH-EUS), histologische und immunhistochemische Befunde, TNM- und pTNM-Status (falls möglich), molekulare Analysebefunde.

Bildgebungstests Alle Patienten werden mit EUS und CEH-EUS unter Verwendung von radialen EUS-Instrumenten untersucht. Vor der Untersuchung muss der Magen mindestens 8 Stunden nüchtern sein. Während der Untersuchung werden Biopsien aus Normal- und Tumorgewebe zur Genexpressionsanalyse entnommen. Für die EUS-Untersuchung wird der Patient in Linksseitenlage gebracht. Das EUS-Endoskop wird unter direkter Sicht eingeführt, am Tumor vorbeigeführt und die Untersuchung sollte während des Zurückziehens bei 7,5 MHz beginnen. Der Tumor wird charakterisiert, wobei seine Echogenität, Echostruktur, Größe, Ausdehnung in die Wand und umgebende Strukturen beschrieben werden, und er wird unter Verwendung der Modifikation der TNM-Klassifikation inszeniert. Das Vorhandensein/Fehlen von Power-Doppler-Signalen wird notiert. Alle Lymphknoten werden mit ihrer maximalen Größe, Echogenität, Form und Rändern angegeben. Knoten mit einem Durchmesser von mehr als 5 mm, echoarmem Aussehen, runder Form (statt eiförmig oder flach), scharf abgegrenzten Rändern und in der Nähe des Tumors liegen im Verdacht auf Bösartigkeit.

CEH-EUS-Verfahren: Ein zweiteiliges Bild mit dem üblichen konventionellen Graustufen-B-Modus-EUS-Bild auf der rechten Seite und mit dem kontrastharmonischen Bild auf der linken Seite wird gemäß vorher festgelegten Voreinstellungen verwendet. Die Untersuchung wird mit einem niedrigen mechanischen Index (Dynamic Wide-Band Contrast Harmonic Imaging Mode) von 0,2 durchgeführt. Als Startpunkt des Timers gilt der Moment der intravenösen Kontrastmittelinjektion (SonoVue 2,4 ml), wobei der gesamte Film (T0-T120s) zur späteren Analyse auf der eingebetteten Festplatte des Ultraschallsystems aufgezeichnet wird. Zu den Parametern für die objektive Messung der Tumorperfusion gehören die maximale Verstärkungsintensität, die mittlere Transitzeit, die Zeit bis zur Spitze (Wash-in-Zeit), die Wash-in-Steigung, die Fläche unter der Kurve, die indirekt den Blutfluss oder das Blutvolumen bei GC-Patienten darstellt.

Komplikationen können während des EUS auftreten, sind aber selten. Diese bestehen aus Blutungen an der Biopsiestelle, die normalerweise minimal und selbstlimitierend sind und selten eine Nachsorge erfordern. Eine Perforation des Magens ist äußerst selten. Das Sicherheitsprofil des Ultraschallkontrastmittels (Sonovue®) zeigte eine sehr geringe Inzidenz von Nebenwirkungen. Es ist nicht nephrotoxisch und die Inzidenz von Überempfindlichkeit oder schweren allergischen Ereignissen ist geringer als bei aktuellen Röntgenmitteln und vergleichbar mit der anderer Magnetresonanz-Kontrastmittel. Sono-Vue ist für den klinischen Einsatz in EU-Ländern zugelassen.

Das während der Studie gesammelte biologische Material wird eingefroren und gelagert. Dazu gehören 1 ml Vollblut und 4 Gewebebiopsien (2 aus normalem Gewebe und 2 aus dem Tumor) von jeweils 2 bis 3 mm. Wenn die erwartete Anzahl von Teilnehmern erreicht ist, werden die Proben molekularen Studien unterzogen, um die Marker der Angiogenese zu bewerten, wie weiter im Protokoll beschrieben. Die biologischen Materialien werden für einen geschätzten Zeitraum von 20 Monaten ab Beginn der Studie gelagert und analysiert. Biopsieproben für die Immunhistochemie werden in Formalinlösung eingeschlossen und an das Pathologielabor geschickt.

Molekulare Tests

• Blut Analyse. Vollblut (1 ml) wird vor bildgebenden Verfahren in einem Eppendorf-Röhrchen auf EDTA-Lösung gesammelt, sofort bei 40°C für maximal 24 Stunden platziert und dann bei –80°C für eine spätere Analyse von angiogenen Faktoren aufbewahrt.
• Biopsieproben von normalem und GC-Gewebe. Die Genexpression wird mittels qPCR mit Taqman®-markierten Sonden analysiert. Zur Quantifizierung der durch Echtzeit-RT-PCR erhaltenen Ergebnisse wird die Standardkurvenmethode verwendet. Die gepaarten Proben werden in RNAlater (Ambion) gesammelt, bei 40 °C für 12–24 Stunden gelagert und dann bei –80 °C aufbewahrt. Eine spätere Analyse wird die Genexpression von angiogenen Markern bewerten.

Immunhistochemie IHC konzentriert sich auf angiogene Marker: die VEGF-A-Familie und ihre Rezeptoren: VEGFR sowie Tyrosinkinase-Rezeptoren (RTKs).

Die VEGF-C-Expression in Tumorproben (Marker der Lymphangiogenese) soll quantifiziert werden. Darüber hinaus wird eine Korrelation zwischen EUS-Ergebnissen (N-Stadium) und VEGF-C-Expression hergestellt.

Die Mikrogefäßdichte (MVD) wird mittels Immunhistochemie für CD105 berechnet.

Statistische Analyse Die geschätzte Zahl der in die Studie aufgenommenen Teilnehmer beträgt in den ersten 24 Monaten mindestens 50. Sowohl deskriptive Datenanalyse als auch statistische Inferenz werden durchgeführt.

Korrelationen zwischen CE-EUS-Parametern und pathologischen und genetischen Befunden werden mit dem T-Test und dem Pearson-Korrelationskoeffizienten (r) für kontinuierliche Daten analysiert, während der Chi-Quadrat-Test für kategoriale Daten angewendet wird. Zum Vergleich zwischen verschiedenen Untergruppen (T-Stadien) wird eine Einweg-Varianzanalyse (ANOVA) durchgeführt. Die Überlebensanalyse ab dem Zeitpunkt der Diagnose wird anhand von Kaplan-Meyer-Kurven ausgewertet. Traditionelle Parameter wie TNM-Stadium, Art der Behandlung werden analysiert. Statistische Signifikanz wird als p-Wert kleiner als 0,05 definiert.

Diese minimalen Risiken werden durch die potenziellen Auswirkungen auf die zukünftige Patientenversorgung aufgewogen.

Die Forschungssubjekte erhalten vor der Aufnahme in die Studie eine Zustimmung zur schriftlichen und mündlichen Information. Das Interview umfasst detaillierte Informationen, einschließlich einer verständlichen Präsentation des Projekts mit seinen vorhersehbaren Risiken und Nebenwirkungen, erwarteten Ergebnissen und Vorteilen aus der Forschung.

Alle ungeplanten Ereignisse oder unerwünschten Wirkungen werden unverzüglich der regionalen Ethikkommission für biomedizinische Forschung gemeldet.