"Mécanismes et biomarqueurs de réponse et de résistance aux thérapies ciblées actuelles dans le cancer gastrique" (THERRES) (THERRES)

La conception de l'étude est prospective et inclura des patients atteints de tumeurs gastriques référés au service de gastroentérologie de l'Université de médecine et de pharmacie de Craiova pour une stadification locale EUS inscrits pendant 18 mois.

Les données collectées pour chaque participant comprendront : Des données personnelles (nom, prénom, âge, sexe) ; résultats d'investigations précédentes (numération sanguine, tests de la fonction hépatique et rénale, marqueurs tumoraux, gastroscopie, tomodensitométrie), variables EUS (y compris CEH-EUS), résultats histologiques et immunohistochimiques, statut TNM et pTNM (si possible), résultats d'analyse moléculaire.

Tests d'imagerie Tous les patients seront évalués par EUS et CEH-EUS, à l'aide d'instruments EUS radiaux. Avant l'examen, l'estomac doit être vide pendant au moins 8 heures. Au cours de l'examen, des biopsies seront prélevées sur des tissus normaux et tumoraux pour l'analyse de l'expression génique. Pour l'examen EUS, le patient sera placé en position latérale gauche. La portée EUS sera insérée sous vision directe, passée par la tumeur et l'examen doit commencer lors du retrait à 7,5 MHz. La tumeur sera caractérisée en décrivant son échogénicité, son échostructure, sa taille, son étendue dans la paroi et les structures environnantes, et elle sera stadifiée en utilisant la modification de la classification TNM. La présence/absence de signaux Doppler puissance sera notée. Tous les ganglions lymphatiques seront signalés avec leur taille maximale, leur échogénicité, leur forme et leurs marges. Les ganglions de plus de 5 mm de diamètre, d'aspect hypoéchogène, de forme ronde (plutôt qu'ovoïde ou plate), aux bords nettement délimités et situés à proximité de la tumeur seront suspectés de malignité.

Procédure CEH-EUS : Une image à deux panneaux avec l'image EUS en mode B conventionnelle en échelle de gris habituelle sur le côté droit et avec l'image harmonique de contraste sur le côté gauche sera utilisée, selon des préréglages préétablis. L'examen sera effectué à un faible indice mécanique (mode d'imagerie harmonique de contraste dynamique à large bande) de 0,2. Le point de départ de la minuterie sera considéré comme le moment de l'injection intraveineuse de contraste (SonoVue 2,4 mL), avec le film entier (T0-T120s) enregistré sur le disque dur intégré du système à ultrasons pour une analyse ultérieure. Les paramètres de mesure objective de la perfusion tumorale comprendront l'intensité maximale de l'amélioration, le temps de transit moyen, le temps jusqu'au pic (temps de lavage), la pente de lavage, l'aire sous la courbe, représentant indirectement le débit sanguin ou le volume sanguin chez les patients GC.

Des complications peuvent survenir au cours de l'EUS, mais elles sont rares. Celles-ci consistent en un saignement au site de la biopsie qui est généralement minime, spontanément résolutif et nécessite rarement un suivi. La perforation de l'estomac est extrêmement rare. Le profil d'innocuité de l'agent de contraste échographique (Sonovue®) a montré une très faible incidence d'effets secondaires. Il n'est pas néphrotoxique et l'incidence d'hypersensibilité ou d'événements allergiques graves est plus faible qu'avec les agents radiologiques actuels et comparable à celle des autres agents de contraste par résonance magnétique. Sono-Vue est approuvé pour une utilisation clinique dans les pays de l'UE.

Le matériel biologique collecté au cours de l'étude sera congelé et stocké. Cela comprendra un ml de sang total et 4 biopsies tissulaires (2 de tissu normal et 2 de la tumeur) de 2 à 3 mm chacune. Lorsque le nombre prévu de participants est atteint, les échantillons feront l'objet d'études moléculaires pour évaluer les marqueurs de l'angiogenèse comme détaillé plus loin dans le protocole. Les matériels biologiques seront stockés et analysés pendant une durée estimée à 20 mois à compter du début de l'essai. Les échantillons de biopsie pour l'immunohistochimie seront inclus dans une solution de formol et envoyés au laboratoire de pathologie.

Tests moléculaires

• Analyse de sang. Le sang total (1 ml) sera prélevé avant les procédures d'imagerie dans un tube Eppendorf sur solution EDTA, placé immédiatement à 40°C pendant 24 heures maximum, puis conservé à - 80°C pour une analyse ultérieure des facteurs angiogéniques.
• Échantillons de biopsie de tissu normal et GC. L'expression des gènes sera analysée par qPCR avec des sondes marquées au Taqman®. Pour quantifier les résultats obtenus par RT-PCR en temps réel, la méthode de la courbe standard sera utilisée. Les échantillons appariés seront collectés dans RNAlater (Ambion), stockés à 40°C pendant 12 à 24 heures, puis conservés à - 80°C. Une analyse ultérieure évaluera l'expression des gènes des marqueurs angiogéniques.

Immunohistochimie L'IHC se concentrera sur les marqueurs angiogéniques : la famille VEGF-A et leurs récepteurs : le VEGFR ainsi que les récepteurs tyrosine kinases (RTK).

L'expression du VEGF-C dans des échantillons tumoraux (marqueur de la lymphangiogenèse) sera quantifiée. De plus, une corrélation entre les résultats de l'EUS (stade N) et l'expression du VEGF-C sera établie.

La densité de microvaisseaux (MVD) sera calculée par immunohistochimie pour CD105.

Analyse statistique Le nombre estimé de participants inscrits à l'étude est d'au moins 50 au cours des 24 premiers mois. Une analyse descriptive des données et une inférence statistique seront effectuées.

Les corrélations entre les paramètres CE-EUS et les résultats pathologiques et génétiques seront analysées à l'aide du test T et du coefficient de corrélation de Pearson (r) pour les données continues, tandis que le test Chi-carré sera appliqué pour les données catégorielles. Une analyse de variance unidirectionnelle (ANOVA) sera effectuée pour la comparaison entre différents sous-groupes (stades T). L'analyse de la survie à partir du moment du diagnostic sera évaluée à l'aide des courbes de Kaplan-Meyer. Les paramètres traditionnels comme le stade TNM, le type de traitement seront analysés. La signification statistique sera définie comme une valeur p inférieure à 0,05.

Ces risques minimes seront compensés par les implications potentielles pour les soins futurs aux patients.

Les sujets de recherche recevront un consentement au nom des informations écrites et orales avant leur inclusion dans l'étude. L'entretien couvrira des informations détaillées, y compris une présentation compréhensible du projet avec ses risques et effets secondaires prévisibles, les résultats attendus et les avantages de la recherche.

Tout événement imprévu ou effet indésirable sera signalé immédiatement au Comité régional d'éthique de la recherche biomédicale.