"Mecanismos e Biomarcadores de Resposta e Resistência às Terapias Direcionadas Atuais no Câncer Gástrico" (THERRES) (THERRES)

O desenho do estudo é prospectivo e incluirá pacientes com tumores gástricos encaminhados ao Departamento de Gastroenterologia da Universidade de Medicina e Farmácia de Craiova para estadiamento local EUS inscritos durante 18 meses.

Os dados coletados para cada participante incluirão: Dados pessoais (nome, sobrenome, idade, sexo); resultados de investigações anteriores (hemograma, testes de função hepática e renal, marcadores tumorais, gastroscopia, tomografia computadorizada), variáveis ​​EUS (incluindo CEH-EUS), achados histológicos e imuno-histoquímicos, estado TNM e pTNM (se possível), achados de análise molecular.

Testes de imagem Todos os pacientes serão avaliados por EUS e CEH-EUS, usando instrumentos EUS radiais. Antes da investigação, o estômago deve estar vazio por pelo menos 8 horas. Durante o exame serão retiradas biópsias de tecido normal e tumoral para análise da expressão gênica. Para o exame EUS, o paciente será colocado em decúbito lateral esquerdo. O escopo EUS será inserido sob visão direta, passado pelo tumor e o exame deve começar durante a retirada em 7,5 MHz. O tumor será caracterizado descrevendo sua ecogenicidade, ecoestrutura, tamanho, extensão na parede e estruturas circundantes, e será estadiado usando a modificação da classificação TNM. A presença/ausência de sinais de power Doppler será anotada. Todos os gânglios linfáticos serão relatados com seu tamanho máximo, ecogenicidade, forma e margens. Nódulos com mais de 5 mm de diâmetro, com aparência hipoecóica, forma arredondada (em vez de ovoide ou plana), bordas nitidamente demarcadas e localizados próximos ao tumor serão suspeitos de malignidade.

Procedimento CEH-EUS: Uma imagem de dois painéis com a imagem EUS convencional em modo B em escala de cinza usual no lado direito e com a imagem harmônica de contraste no lado esquerdo será usada, de acordo com as predefinições pré-estabelecidas. O exame será realizado em um baixo índice mecânico (modo de imagem harmônica de contraste de banda larga dinâmica) de 0,2. O ponto inicial do cronômetro será considerado o momento da injeção de contraste intravenoso (SonoVue 2,4 mL), com todo o filme (T0-T120s) gravado no HDD embutido do sistema de ultrassom para posterior análise. Os parâmetros para medição objetiva da perfusão tumoral incluirão intensidade máxima de realce, tempo médio de trânsito, tempo para atingir o pico (tempo de lavagem), inclinação de lavagem, área sob a curva, representando indiretamente o fluxo sanguíneo ou o volume sanguíneo em pacientes com GC.

Podem ocorrer complicações durante a USE, mas são raras. Estes consistem em sangramento no local da biópsia que geralmente é mínimo, autolimitado e raramente requer acompanhamento. A perfuração do estômago é extremamente rara. O perfil de segurança do agente de contraste de ultrassom (Sonovue®) mostrou uma incidência muito baixa de efeitos colaterais. Não é nefrotóxico e a incidência de hipersensibilidade ou eventos alérgicos graves é menor do que com os atuais agentes de raios X e comparável à de outros agentes de contraste de ressonância magnética. Sono-Vue é aprovado para uso clínico nos países da UE.

O material biológico coletado durante o estudo será congelado e armazenado. Isso incluirá um ml de sangue total e 4 biópsias de tecido (2 de tecido normal e 2 do tumor) de 2 a 3 mm cada. Quando o número esperado de participantes for atingido, as amostras serão submetidas a estudos moleculares para avaliação dos marcadores de angiogênese conforme detalhado mais adiante no protocolo. Os materiais biológicos serão armazenados e analisados ​​durante um tempo estimado de 20 meses a partir do início do ensaio. As amostras de biópsia para imuno-histoquímica serão incluídas em solução de formol e enviadas ao laboratório de patologia.

testes moleculares

• Análise de sangue. Sangue total (1ml) será coletado antes dos procedimentos de imagem em tubo Eppendorf em solução de EDTA, colocado imediatamente a 40C por no máximo 24 horas, e então mantido a -800C para posterior análise de fatores angiogênicos.
• Amostras de biópsia de tecido normal e GC. A expressão gênica será analisada por qPCR com sondas marcadas com Taqman®. Para quantificar os resultados obtidos por RT-PCR em tempo real será utilizado o método da curva padrão. As amostras pareadas serão coletadas em RNAlater (Ambion), armazenadas a 40C por 12-24 horas, e então mantidas a -800C. Análises posteriores avaliarão a expressão gênica de marcadores angiogênicos.

Imuno-histoquímica IHC será focada em marcadores angiogênicos: família VEGF-A e seus receptores: VEGFR, bem como receptores de tirosina quinases (RTKs).

A expressão de VEGF-C em amostras tumorais (marcador de linfangiogênese) será quantificada. Além disso, será estabelecida uma correlação entre os achados da EUS (estágio N) e a expressão de VEGF-C.

A densidade de microvasos (MVD) será calculada por imuno-histoquímica para CD105.

Análise estatística O número estimado de participantes inscritos no estudo é de pelo menos 50 durante os primeiros 24 meses. Tanto a análise descritiva dos dados quanto a inferência estatística serão realizadas.

As correlações entre os parâmetros do CE-EUS e os achados patológicos e genéticos serão analisadas por meio do teste t e do coeficiente de correlação de Pearson (r) para dados contínuos, enquanto o teste qui-quadrado será aplicado para dados categóricos. A análise de variância (ANOVA) de uma via será realizada para comparação entre os diferentes subgrupos (estágios T). A análise de sobrevida desde o momento do diagnóstico será avaliada por meio de curvas de Kaplan-Meyer. Parâmetros tradicionais como estágio TNM, tipo de tratamento serão analisados. A significância estatística será definida como um valor-p inferior a 0,05.

Esses riscos mínimos serão superados pelas possíveis implicações para o futuro atendimento ao paciente.

Os sujeitos da pesquisa receberão consentimento em nome de informações escritas e orais antes da inclusão no estudo. A entrevista cobrirá informações detalhadas, incluindo uma apresentação compreensível do projeto com seus riscos previsíveis e efeitos colaterais, resultados esperados e benefícios da pesquisa.

Quaisquer eventos não planejados ou efeitos adversos serão relatados imediatamente ao Comitê Regional de Ética em pesquisa biomédica.