“胃癌对当前靶向治疗的反应和耐药性的机制和生物标志物”（THERRES） (THERRES)

该研究设计是前瞻性的，将包括在 18 个月内被纳入克拉约瓦医药大学消化内科进行 EUS 局部分期的胃肿瘤患者。

为每位参与者收集的数据将包括： 个人数据（姓名、年龄、性别）；先前调查的结果（血细胞计数、肝肾功能检查、肿瘤标志物、胃镜检查、计算机断层扫描）、EUS 变量（包括 CEH-EUS）、组织学和免疫组化结果、TNM 和 pTNM 状态（如果可能）、分子分析结果。

成像测试 所有患者都将使用径向 EUS 仪器通过 EUS 和 CEH-EUS 进行评估。 在进行调查之前，胃必须排空至少 8 小时。 在检查期间，将从正常组织和肿瘤组织中取出活组织检查用于基因表达分析。 对于 EUS 检查，患者将被置于左侧卧位。 EUS 范围将在直视下插入，经过肿瘤，检查应在 7.5 MHz 撤回期间开始。 将描述肿瘤的特征，描述其回声性、回声结构、大小、进入壁和周围结构的范围，并将使用 TNM 分类的修改进行分期。 将记录能量多普勒信号的存在/不存在。 将报告所有淋巴结及其最大尺寸、回声性、形状和边缘。 直径大于 5 毫米、低回声外观、圆形（而非卵形或扁平形）、边界清晰且位于肿瘤附近的淋巴结将被怀疑为恶性肿瘤。

CEH-EUS 程序：根据预先建立的预设，将使用双面板图像，右侧是常规灰度 B 模式 EUS 图像，左侧是对比谐波图像。 检查将在 0.2 的低机械指数（动态宽带对比谐波成像模式）下进行。 计时器的起点将被视为静脉造影剂注射 (SonoVue 2,4 mL) 的时刻，整个电影 (T0-T120s) 记录在超声系统的嵌入式硬盘上以供以后分析。 用于客观测量肿瘤灌注的参数将包括最大增强强度、平均通过时间、峰值时间（洗入时间）、洗入斜率、曲线下面积，间接代表 GC 患者的血流量或血容量。

EUS 期间可能会出现并发症，但很少见。 这些包括活检部位的出血，这种出血通常很少，是自限性的，很少需要随访。 胃穿孔极为罕见。 超声造影剂 (Sonovue®) 的安全性表明副作用的发生率非常低。 它没有肾毒性，超敏反应或严重过敏事件的发生率低于目前的 X 射线制剂，与其他磁共振造影剂相当。 Sono-Vue 在欧盟国家获准用于临床。

研究期间收集的生物材料将被冷冻和储存。 这将包括 1 毫升全血和 4 份组织活检（2 份来自正常组织，2 份来自肿瘤），每份 2 至 3 毫米。 当达到预期的参与者数量时，样本将进行分子研究，以评估血管生成的标志物，如协议中进一步详述。 生物材料将在试验开始后的 20 个月内储存和分析。 用于免疫组织化学的活检样本将包含在福尔马林溶液中并送往病理实验室。

分子检测

• 血液分析。 在成像程序之前将全血 (1ml) 收集在 Eppendorf 管中的 EDTA 溶液中，立即放置在 40°C 下最多 24 小时，然后保持在 - 800°C 下用于以后的血管生成因子分析。
• 正常和 GC 组织的活检样本。 基因表达将使用带有 Taqman® 标记探针的 qPCR 进行分析。 为了量化通过实时 RT-PCR 获得的结果，将使用标准曲线方法。 配对样本将收集在 RNAlater (Ambion) 中，在 40°C 下保存 12-24 小时，然后在 - 800°C 下保存。 稍后的分析将评估血管生成标记的基因表达。

免疫组织化学 IHC 将重点关注血管生成标志物：VEGF-A 家族及其受体：VEGFR 以及酪氨酸激酶受体 (RTK)。

肿瘤样本中的 VEGF-C 表达（淋巴管生成的标志）将被量化。 此外，将建立 EUS 结果（N 期）和 VEGF-C 表达之间的相关性。

将使用 CD105 的免疫组织化学计算微血管密度 (MVD)。

统计分析 在最初的 24 个月内，参加研究的估计参与者人数至少为 50 人。 将执行描述性数据分析和统计推断。

CE-EUS 参数与病理和遗传结果之间的相关性将使用 T 检验和 Pearson 相关系数 (r) 对连续数据进行分析，而卡方检验将应用于分类数据。 将进行单向方差分析 (ANOVA) 以比较不同亚组（T 阶段）。 从诊断时刻开始的生存分析将使用卡普兰-迈耶曲线进行评估。 将分析传统参数作为 TNM 分期、治疗类型。 统计显着性将定义为 p 值小于 0.05。

这些最小的风险将被对未来患者护理的潜在影响所抵消。

在纳入研究之前，研究对象将代表书面和口头信息获得同意。 访谈将涵盖详细信息，包括可理解的项目介绍及其可预测的风险和副作用、预期结果和研究收益。

任何计划外事件或不良反应都将立即报告给生物医学研究区域伦理委员会。