"Mechanismy a biomarkery odpovědi a rezistence na současné cílené terapie u rakoviny žaludku" (THERRES) (THERRES)

Návrh studie je prospektivní a bude zahrnovat pacienty s žaludečními nádory, kteří byli odesláni na Gastroenterologické oddělení z University of Medicine and Pharmacy of Craiova pro lokální staging EUS zařazené během 18 měsíců.

Údaje shromážděné pro každého účastníka budou zahrnovat: Osobní údaje (jméno, příjmení, věk, pohlaví); výsledky předchozích vyšetření (krevní obraz, jaterní a renální funkční testy, nádorové markery, gastroskopie, počítačová tomografie), EUS proměnné (včetně CEH-EUS), histologické a imunohistochemické nálezy, stav TNM a pTNM (pokud je to možné), nálezy molekulární analýzy.

Zobrazovací testy Všichni pacienti budou hodnoceni pomocí EUS a CEH-EUS pomocí radiálních EUS nástrojů. Před vyšetřením musí být žaludek prázdný alespoň 8 hodin. Během vyšetření budou odebrány biopsie z normální a nádorové tkáně pro analýzu genové exprese. Pro EUS vyšetření bude pacient uložen do levé laterální polohy. EUS rozsah bude vložen pod přímým viděním, projde nádorem a vyšetření by mělo začít při vytažení na 7,5 MHz. Nádor bude charakterizován popisem jeho echogenity, echostruktury, velikosti, rozsahu do stěny a okolních struktur a bude stadiován pomocí modifikace TNM klasifikace. Bude zaznamenána přítomnost/nepřítomnost silových dopplerovských signálů. Všechny lymfatické uzliny budou uvedeny s jejich maximální velikostí, echogenitou, tvarem a okraji. Uzliny větší než 5 mm v průměru, s hypoechogenním vzhledem, kulatým tvarem (spíše než vejčitým nebo plochým), ostře ohraničenými hranicemi a umístěnými v blízkosti nádoru budou podezřelé z malignity.

Postup CEH-EUS: Použije se dvoupanelový obraz s obvyklým konvenčním obrazem EUS v B-módu ve stupních šedi na pravé straně as kontrastním harmonickým obrazem na levé straně, podle předem stanovených předvoleb. Vyšetření bude provedeno při nízkém mechanickém indexu (dynamický širokopásmový kontrastní harmonický zobrazovací režim) 0,2. Počáteční bod časovače bude považován za okamžik intravenózní kontrastní injekce (SonoVue 2,4 ml), přičemž celý film (T0-T120s) bude zaznamenán na vestavěný HDD ultrazvukového systému pro pozdější analýzu. Parametry pro objektivní měření perfuze nádoru budou zahrnovat maximální intenzitu zesílení, průměrnou dobu průchodu, dobu do vrcholu (wash-in time), sklon náběhu, plochu pod křivkou, reprezentující nepřímo průtok krve nebo objem krve u pacientů s GC.

Během EUS se mohou objevit komplikace, ale jsou vzácné. Ty se skládají z krvácení v místě biopsie, které je obvykle minimální, samoomezující a zřídka vyžaduje sledování. Perforace žaludku je extrémně vzácná. Bezpečnostní profil ultrazvukové kontrastní látky (Sonovue®) vykazoval velmi nízký výskyt nežádoucích účinků. Není nefrotoxický a výskyt přecitlivělosti nebo závažných alergických příhod je nižší než u současných rentgenových látek a srovnatelný s jinými kontrastními látkami pro magnetickou rezonanci. Sono-Vue je schválen pro klinické použití v zemích EU.

Biologický materiál odebraný během studie bude zmražen a uskladněn. To bude zahrnovat 1 ml plné krve a 4 tkáňové biopsie (2 z normální tkáně a 2 z nádoru) po 2 až 3 mm. Po dosažení očekávaného počtu účastníků budou vzorky podrobeny molekulárním studiím pro hodnocení markerů angiogeneze, jak je podrobně uvedeno dále v protokolu. Biologické materiály budou skladovány a analyzovány po odhadovanou dobu 20 měsíců od začátku pokusu. Bioptické vzorky pro imunohistochemii budou vloženy do formalínového roztoku a odeslány do patologické laboratoře.

Molekulární testy

• Rozbor krve. Plná krev (1 ml) bude odebrána před zobrazovacími postupy do Eppendorfovy zkumavky s roztokem EDTA, ihned umístěna při 40 °C na maximálně 24 hodin a poté udržována při -80 °C pro pozdější analýzu angiogenních faktorů.
• Bioptické vzorky normální a GC tkáně. Genová exprese bude analyzována pomocí qPCR se sondami značenými Taqman®. Pro kvantifikaci výsledků získaných pomocí RT-PCR v reálném čase bude použita metoda standardní křivky. Párové vzorky budou shromážděny v RNAlater (Ambion), skladovány při 40 °C po dobu 12-24 hodin a poté udržovány při -800 °C. Pozdější analýza vyhodnotí genovou expresi angiogenních markerů.

Imunohistochemie IHC bude zaměřena na angiogenní markery: rodina VEGF-A a jejich receptory: VEGFR a také receptory tyrozinkináz (RTK).

Bude kvantifikována exprese VEGF-C ve vzorcích nádoru (marker lymfangiogeneze). Dále bude stanovena korelace mezi nálezy EUS (stadium N) a expresí VEGF-C.

Hustota mikrocév (MVD) bude vypočtena pomocí imunohistochemie pro CD105.

Statistická analýza Odhadovaný počet účastníků zapsaných do studie je alespoň 50 během prvních 24 měsíců. Bude provedena jak popisná analýza dat, tak statistická inference.

Korelace mezi parametry CE-EUS a patologickými a genetickými nálezy budou analyzovány pomocí T-testu a Pearsonova korelačního koeficientu (r) pro spojitá data, zatímco pro kategorická data bude aplikován Chí-kvadrát test. Pro srovnání mezi různými podskupinami (T stadia) bude provedena jednocestná analýza rozptylu (ANOVA). Analýza přežití od okamžiku diagnózy bude hodnocena pomocí Kaplan-Meyerových křivek. Budou analyzovány tradiční parametry jako stadium TNM, typ léčby. Statistická významnost bude definována jako p-hodnota menší než 0,05.

Tato minimální rizika budou převážena potenciálními důsledky pro budoucí péči o pacienty.

Subjekty výzkumu obdrží souhlas jménem písemných a ústních informací před zařazením do studie. Rozhovor bude obsahovat podrobné informace, včetně srozumitelné prezentace projektu s jeho předvídatelnými riziky a vedlejšími účinky, očekávanými výstupy a přínosy výzkumu.

Jakékoli neplánované události nebo nežádoucí účinky budou okamžitě hlášeny Regionální etické komisi pro biomedicínský výzkum.