"Mechanismen en biomarkers van respons en weerstand tegen huidige gerichte therapieën bij maagkanker" (THERRES) (THERRES)

De onderzoeksopzet is prospectief en omvat patiënten met maagtumoren die gedurende 18 maanden zijn doorverwezen naar de afdeling gastro-enterologie van de Universiteit van Geneeskunde en Farmacie van Craiova voor lokale EUS-stadiëring.

De gegevens die voor elke deelnemer worden verzameld, omvatten: persoonlijke gegevens (naam, achternaam, leeftijd, geslacht); resultaten van eerdere onderzoeken (bloedbeeld, lever- en nierfunctietesten, tumormarkers, gastroscopie, computertomografie), EUS-variabelen (waaronder CEH-EUS), histologische en immunohistochemische bevindingen, TNM- en pTNM-status (indien mogelijk), bevindingen van moleculaire analyse.

Beeldvormingstests Alle patiënten worden beoordeeld door EUS en CEH-EUS, met behulp van radiale EUS-instrumenten. Voorafgaand aan het onderzoek moet de maag minimaal 8 uur leeg zijn. Tijdens het onderzoek worden biopsieën genomen van normaal weefsel en tumorweefsel voor analyse van de genexpressie. Voor EUS-onderzoek wordt de patiënt in linker laterale positie geplaatst. De EUS-scoop wordt onder direct zicht ingebracht, langs de tumor geleid en het onderzoek moet beginnen tijdens het terugtrekken op 7,5 MHz. De tumor zal worden gekarakteriseerd door zijn echogeniciteit, echostructuur, grootte, uitgestrektheid in de wand en omliggende structuren te beschrijven, en hij zal worden geënsceneerd met behulp van de wijziging van de TNM-classificatie. De aanwezigheid/afwezigheid van power Doppler-signalen wordt genoteerd. Alle lymfeklieren worden gerapporteerd met hun maximale grootte, echogeniciteit, vorm en marges. Knopen met een diameter groter dan 5 mm, met een hypoechoïsch uiterlijk, een ronde vorm (in plaats van eivormig of plat), scherp afgebakende randen en gelegen nabij de tumor, worden verdacht van maligniteit.

CEH-EUS-procedure: er wordt een beeld met twee panelen gebruikt met het gebruikelijke conventionele B-modus EUS-beeld in grijstinten aan de rechterkant en met het contrastharmonische beeld aan de linkerkant, volgens vooraf vastgestelde presets. Het onderzoek wordt uitgevoerd bij een lage mechanische index (dynamische breedbandcontrast harmonische beeldvormingsmodus) van 0,2. Het startpunt van de timer wordt beschouwd als het moment van intraveneuze contrastinjectie (SonoVue 2,4 ml), waarbij de hele film (T0-T120s) wordt opgenomen op de ingebouwde harde schijf van het ultrasone systeem voor latere analyse. Parameters voor objectieve meting van tumorperfusie omvatten maximale intensiteit van versterking, gemiddelde transittijd, tijd tot piek (wash-in-tijd), wash-in-helling, gebied onder de curve, die indirect de bloedstroom of het bloedvolume bij GC-patiënten vertegenwoordigen.

Complicaties kunnen optreden tijdens EUS, maar ze zijn zeldzaam. Deze bestaan ​​uit een bloeding op de plaats van de biopsie, die meestal minimaal is, zelfbeperkt en zelden follow-up vereist. Perforatie van de maag is uiterst zeldzaam. Het veiligheidsprofiel van het ultrasone contrastmiddel (Sonovue®) toonde een zeer lage incidentie van bijwerkingen. Het is niet nefrotoxisch en de incidentie van overgevoeligheid of ernstige allergische voorvallen is lager dan bij de huidige röntgenmiddelen en vergelijkbaar met die van andere magnetische resonantie contrastmiddelen. Sono-Vue is goedgekeurd voor klinisch gebruik in EU-landen.

Het tijdens het onderzoek verzamelde biologische materiaal wordt ingevroren en bewaard. Dit omvat één ml volbloed en 4 weefselbiopten (2 van normaal weefsel en 2 van de tumor) van elk 2 tot 3 mm. Wanneer het verwachte aantal deelnemers is bereikt, zullen de monsters moleculaire studies ondergaan om de markers van angiogenese te beoordelen, zoals verder beschreven in het protocol. Het biologische materiaal zal worden opgeslagen en geanalyseerd gedurende een geschatte tijd van 20 maanden vanaf de start van de proef. Biopsiemonsters voor immunohistochemie zullen in formaline-oplossing worden opgenomen en naar het pathologielaboratorium worden verzonden.

Moleculaire testen

• Bloed analyse. Volbloed (1 ml) zal vóór beeldvormende procedures worden verzameld in een Eppendorf-buisje met EDTA-oplossing, onmiddellijk bij 40°C gedurende maximaal 24 uur worden geplaatst en vervolgens bij -80°C worden bewaard voor latere analyse van angiogene factoren.
• Biopsiemonsters van normaal en GC-weefsel. Genexpressie zal worden geanalyseerd met behulp van qPCR met Taqman®-gelabelde probes. Om de resultaten verkregen door real-time RT-PCR te kwantificeren, wordt de standaardcurvemethode gebruikt. De gepaarde monsters worden verzameld in RNAlater (Ambion), gedurende 12-24 uur bij 40°C bewaard en daarna bewaard bij -80°C. Latere analyse zal de genexpressie van angiogene markers beoordelen.

Immunohistochemie IHC zal gericht zijn op angiogene markers: VEGF-A-familie en hun receptoren: VEGFR evenals tyrosinekinasereceptoren (RTK's).

De expressie van VEGF-C in tumormonsters (marker van lymfangiogenese) zal worden gekwantificeerd. Bovendien zal een correlatie worden vastgesteld tussen EUS-bevindingen (N-stadium) en VEGF-C-expressie.

De microvaatjesdichtheid (MVD) zal worden berekend met behulp van immunohistochemie voor CD105.

Statistische analyse Het geschatte aantal deelnemers aan de studie is ten minste 50 gedurende de eerste 24 maanden. Zowel beschrijvende data-analyse als statistische inferentie zullen worden uitgevoerd.

Correlaties tussen CE-EUS-parameters en pathologische en genetische bevindingen zullen worden geanalyseerd met behulp van de T-test en de Pearson-correlatiecoëfficiënt (r) voor continue gegevens, terwijl de Chi-kwadraat-test zal worden toegepast voor categorische gegevens. Eenrichtingsvariantieanalyse (ANOVA) zal worden uitgevoerd voor vergelijking tussen verschillende subgroepen (T-stadia). Overlevingsanalyse vanaf het moment van diagnose zal worden geëvalueerd met behulp van Kaplan-Meyer-curven. Traditionele parameters zoals TNM-stadium, type behandeling zullen worden geanalyseerd. Statistische significantie wordt gedefinieerd als een p-waarde kleiner dan 0,05.

Deze minimale risico's wegen niet op tegen de mogelijke gevolgen voor de toekomstige patiëntenzorg.

Onderzoekssubjecten krijgen toestemming voor schriftelijke en mondelinge informatie vóór opname in het onderzoek. Het interview zal gedetailleerde informatie bevatten, inclusief een begrijpelijke presentatie van het project met zijn voorspelbare risico's en bijwerkingen, verwachte resultaten en voordelen van het onderzoek.

Ongeplande gebeurtenissen of nadelige effecten worden onmiddellijk gemeld aan de Regionale Ethische Commissie voor biomedisch onderzoek.