乳歯の歯髄切開治療におけるマトリックスメタロプロテイナーゼの役割

5 歳から 10 歳までの 57 人の健康で協力的な子供の下顎第 2 大臼歯の合計 63 本がこの研究に含まれていました。 エーゲ大学医学部の倫理委員会がこの研究を承認した (参照番号: 16-7/14)。 詳細な治療計画を子供と保護者に説明し、文書によるインフォームド コンセントを得た。

術前に根尖周囲のレントゲン写真を取得しました。 歯髄室の近くまたは中に広がる深い齲蝕病変の臨床的またはレントゲン写真の証拠を示す歯を有する患者は、潜在的な包含のために考慮された。

歯は、臨床診断に従って異なるグループに割り当てられました。 診断は、厳密な臨床的および放射線学的基準に基づいていました。 う蝕除去中に歯髄が露出した場合、次の臨床および放射線診断基準が適用されました。グループ I (可逆性歯髄炎を伴う歯): 軽度のわずかな臨床症状、冷たさや甘い刺激に対する反応がわずかに誇張されている、痛みの既往がない、咀嚼や打診に過敏でない、露出した歯髄組織からの出血時間が 5 分未満、および歯周靭帯スペースの拡大はありません。 歯髄切除群では、歯髄露出がピンポイントよりも小さい歯、化膿性/粘性のある歯、露出部位で検出された暗色の滲出液、および壊死した歯が除外されました。

グループ II (不可逆的な歯髄炎を伴う歯): 自発痛、咀嚼または打診に対する過敏性、露出した歯髄組織からの出血時間が 5 分を超える、および歯根膜腔の拡大、根尖病変。

倫理上の理由から、う蝕のない健康な歯からの血液サンプルを使用した対照群はありませんでした。 すべての一次大臼歯は、歯髄切除術 (グループ I、n = 42) および歯髄切除術 (グループ II、n = 21) として 2 つの治療グループ間で分配されました。

歯髄切除手順とすべてのサンプリングは、次の手順に従って同じオペレーター (H.E.G.) によって実行されました。 (Roeko Dental Dam、Coltane、Whaledent、ドイツ)。 齲蝕象牙質は、低速のラウンドバー (no:4) を使用して周辺から中心に向かって働き、空洞から除去されました。 歯髄室の屋根が取り除かれ、鋭利な掘削機を使用して冠状歯髄組織が採取されました。 すべてのパルプサンプルは、事前に秤量したエッペンドルフチューブ内の 1 ml の Tri Pure Reagent 輸送培地に入れました。 サンプルを再度秤量し、実験手順まで-80℃で保存する前に重量を記録しました。 歯髄切除群 (グループ II) では、すべてのサンプリング手順は、歯髄切除群と同じように実行されました。

グループ I では、冠状髄を除去した後、空洞を滅菌生理食塩水で洗浄し、生理食塩水で湿らせた滅菌綿ペレットを歯根髄断端に置き、わずかな圧力を加えて 5 分間待機することにより、初期出血を制御しました。 根管開口部での止血が 5 分で達成できた歯は、このグループに含まれていました。 無作為化は、無料のオンライン ソフトウェア (http://www.random.org) を使用して、1 : 1 の比率で 2 つのグループとして実行されました。 無作為化手順に続いて、患者には登録順に連番が割り当てられ、オペレーターは MTA (n=21) または Biodentine (n=21) のいずれかの材料について知らされました。

MTA グループ: 製造元の指示に従って、MTA (Pro Root White MTA、Dentsply、Tulsa Dental Specialties、USA) 粉末を滅菌水と 3:1 の粉末/水の比率で混合して、濃厚なクリーミーなペーストを得てから、パルプ室の床。 MTA混合物を湿らせた綿ペレットで覆い、2回目の訪問までグラスアイオノマーセメント（GIC-Ketac Molar Easymix、3M Espe、Seefeld、Germany）を使用して一時的に密封しました。

Biodentine グループ: Biodentine (Septodont, Saint-Maur-des-Fossés, France) カプセルを固い表面にそっと叩いて粉末を拡散させ、単回投与ディスペンサーから 5 滴の液体をカプセルに注ぎ、4200 rpm で混合した 30。数秒かけて、製造元が推奨する適切なスパチュラを使用して果肉の切り株の上に置きます。 Biodentine を 12 分間固化させた後、MTA グループと同様に歯を GIC で一時的に密閉しました。

24 時間後、両方のグループの歯は、事前に形成されたステンレス鋼クラウン (3M Espe、ステンレス鋼クラウン、ゼーフェルト、ドイツ) で修復されました。 参加者は、治療後 6、12、および 18 か月でリコールされました。 各フォローアップの来院時に、2 人の目盛り付きの盲検検査官が臨床検査と X 線検査を実施しました。 すべての歯は、次の基準に従って臨床的および X 線写真で評価されました。根間および/または根尖周囲領域、(4) 内根または外根の吸収がないこと。 自発痛、病理学的可動性、打診に対する圧痛、腫れ、瘻孔、および歯肉の炎症がないことは臨床的成功と見なされ、内外歯根の吸収および根尖周囲/根尖の放射線透過性がないことは X 線撮影の成功と見なされました。 歯髄の石灰化変態は失敗とは見なされませんでした。

歯髄組織をリン酸緩衝生理食塩水 (Gibco、Invitrogen、ドイツ、カールスルーエ) で 1 分間洗浄し、小片に切断し、細胞培養プレートに移し、10% ウシ胎児血清を含むダルベッコ改変イーグル培地 (Gibco BRL、 Life Technologies, Grand Island, NY, USA)、ペニシリン-G (100 U·mL)、ストレプトマイシン (100 µg·mL) および Fungizone (0.25 g·mL) (GeminiBio-Products Inc.、Woodland、CA、USA) で5% CO2 の加湿雰囲気で 37 °C。 歯髄組織からの細胞の移動は 1 週間後に発生し、標準的な培地で培養を確立して維持しました。 培地は 1 週間に 3 回更新され、コンフルエントに達した後、細胞が分割されました。 この研究では、3回目と8回目の継代の間のパルプ細胞が使用されました（参考文献）。

RNAiso Plus（TaKaRa Bio、滋賀、日本）を使用して、処理した細胞からRNAを抽出しました。 ｃＤＮＡは、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ＲＴ試薬キット（ＴａＫａＲａ Ｂｉｏ、大津、日本）を製造元の指示に従って使用して、４００ｎｇの全ＲＮＡから合成した。 得られた cDNA の 10 分の 1 を、SYBR Green I (TaKaRa Bio、滋賀、日本) を含む各反応の最終容量 20 μL で添加しました。 MMP-2、-8、および-9のプライマーは次のとおりです(センス/アンチセンス):

MMP-2: 5'-ATC CTG GCT TTC CCA AGC TC-3'/3'-CAC CCT TGA AGA AGT AGC TGT G-5'。 MMP-8:5'-CTGTTGAAGGCCTAGAGCTGCTGCTCC3'/5'CATCTTCTCTTCAAACTCTACCC-3'。 MMP-9: 5'-GGG CTT AGA TCA TTC CTC AGT G-3'/3'-GCC ATT CAC GTC GTC CTT AT-5'。 （参照）反応は、ABI Step OneリアルタイムPCRシステム（Applied Biosystems、Foster City、CA、USA）で次のプログラムで実行されました：95°Cで10秒間、60°Cで15秒間、および72の45サイクル°C で 20 秒間。 各遺伝子の相対的な比較のために、研究者は 2-ΔΔCt 法を使用してリアルタイム PCR データの閾値サイクル (Ct) 値を分析しました.20 PCR 産物は、核酸に付着する 1 pg/mL 臭化エチジウムを含む 1.5% アガロースゲルで分析し、PCR 産物を UV 光下で可視化しました。 以下に記載するように、生成物を定量できるように、ゲルを写真に撮った。 生成物の定量のためのプライマーの各セットの線形部分を見つけた後、研究者は、画像処理および分析プログラム (ScionImage PC、Scion Corporation、フレデリック、メリーランド州、米国) を使用して生成物を定量化し、MMP-2 の発現を分析しました。 -8 および -9.(参照) 統計分析 統計分析は、SPSS for Windows バージョン 25.0 (SPSS、シカゴ、イリノイ州、米国) を使用して実行されました。 <0.05 の p 値は、統計的に有意であると見なされました。

カイ二乗検定に加えて、Fisher Exact Test を使用してデータを分析し、グループ間およびグループ内の比較をそれぞれ実行しました。

可逆性歯髄炎群と不可逆性歯髄炎群の間の MMP-2、-8、-9 発現のレベルを試験するために、Fisher's Exact Test を使用しました。

MTA および Biodentine 材料の 6、12、および 18 か月間の臨床的および X 線撮影の成功は、カイ 2 乗検定によってテストされました。

成功した歯髄切除群と失敗した歯髄切除群の間で MMP-2、-8、-9 の発現を比較する際に、Mann Whitney U 検定が使用されました。