Rollen til matrisemetalloproteinaser på de primære tannpulpotomibehandlingene

Totalt 63 underkjeven primære andre molar tenner av 57 friske og samarbeidende barn i alderen 5-10 år ble inkludert i denne studien. Den etiske komité ved Det medisinske fakultet ved Ege University godkjente studien (Referansenr: 16-7/14). Detaljert behandlingsplan ble forklart til barna og foreldrene og skriftlige informerte samtykker ble innhentet.

Periapikale røntgenbilder ble tatt preoperativt. Pasienter med en tann som viser kliniske eller radiografiske tegn på en dyp karieslesjon som strekker seg nær eller inn i pulpakammeret, ble vurdert for potensiell inkludering.

Tennene ble tildelt ulike grupper i henhold til den kliniske diagnosen. Diagnosen var basert på strenge kliniske og radiografiske kriterier. Når tannkjøttet ble eksponert under kariesfjerning, ble følgende kliniske og radiografiske diagnostiske kriterier anvendt; Gruppe I (tenner med reversibel pulpitt): Lette kliniske symptomer av mindre intensitet, lett overdreven reaksjon på kulde eller søte stimuli, ingen historie med smerte, ingen følsomhet for tygging eller perkusjon, blødningstid fra det eksponerte pulpavevet mindre enn 5 minutter, og ingen utvidelse av det periodontale ligamentrommet. I pulpotomigruppen ble tenner med pulpaleksponering mindre enn en pinpoint, tenner med purulent/viskøst, mørkfarget ekssudat påvist på eksponeringsstedet og nekrotiske tenner ekskludert.

Gruppe II (tenner med irreversibel pulpitt): Spontan smerte, følsomhet for tygging eller perkusjon, blødningstid fra det eksponerte pulpavevet mer enn 5 minutter, og utvidelse av det periodontale ligamentrommet, periapikal lesjon.

Av etiske grunner var det ingen kontrollgruppe med blodprøver fra friske kariesfrie tenner. Alle primære molarer ble fordelt mellom de to behandlingsgruppene som pulpotomi (Gruppe I, n=42) og pulpektomi (Gruppe II, n=21).

Pulpotomiprosedyrene og all prøvetaking ble utført av samme operatør (H.E.G.) etter prosedyren som følger: lokalbedøvelse (2 % lidokain (1:000 000)-Jetokain Simplex, Adeka, Tyrkia) ble administrert, og tennene ble isolert med en gummidam (Roeko Dental Dam, Coltane, Whaledent, Tyskland). Det karieste dentinet ble fjernet fra hulrommet, og arbeidet fra periferien mot midten ved hjelp av en lavhastighets rundbor (nr:4). Taket på massekammeret ble fjernet, og koronalmassevev ble tatt med en skarp gravemaskin. Alle masseprøver ble plassert i 1 ml Tri Pure Reagent transportmedium i forhåndsveide Eppendorf-rør. Prøvene ble veid igjen og vektene ble notert før de ble lagret ved -80°C frem til laboratorieprosedyrene. I pulpektomigruppen (gruppe II) ble alle prøvetakingsprosedyrer utført som de samme i pulpotomigruppen.

I gruppe I, etter fjerning av koronalmassen, ble hulrommet irrigert med sterilt saltvann, og innledende blødning ble kontrollert ved å plassere sterile bomullspellets fuktet med saltvann over den radikulære massestubben med et lett trykk og vente i 5 minutter. Tennene som hemostase ved kanalåpningene kunne oppnås for på 5 minutter ble inkludert i denne gruppen. Randomiseringen ble utført som to grupper i et 1 : 1-forhold ved å bruke gratis online programvare (http://www.random.org). Etter randomiseringsprosedyren ble pasientene tildelt sekvensnummer i rekkefølgen av innmelding og operatøren ble informert om materialet, enten med MTA (n=21) eller med Biodentine (n=21).

MTA Group: I henhold til produsentens instruksjoner ble MTA (Pro Root White MTA, Dentsply, Tulsa Dental Specialties, USA) pulver blandet med sterilt vann i et 3:1 pulver/vann-forhold for å oppnå en tykk kremaktig pasta, deretter plassert på gulvet i massekammeret. MTA-blandingen ble dekket med en fuktet bomullspellet og deretter midlertidig forseglet med glassionomersement (GIC-Ketac Molar Easymix, 3M Espe, Seefeld, Tyskland) inntil det andre besøket.

Biodentine Group: Biodentine (Septodont, Saint-Maur-des-Fossés, Frankrike) kapsel ble banket forsiktig på en hard overflate for å diffundere pulver, fem dråper væske fra enkeltdosedispenseren ble helt inn i kapselen og deretter blandet med 4200 rpm 30 sekunder og plassert over fruktkjøttstubbene ved hjelp av en passende slikkepott anbefalt av produsenten. Etter å ha latt Biodentine stivne i 12 minutter, ble tennene midlertidig forseglet med GIC som samme i MTA-gruppen.

Etter 24 timer ble tennene i begge gruppene gjenopprettet med preformede rustfrie stålkroner (3M Espe, Stainless Steel Crowns, Seefeld, Tyskland). Deltakerne ble tilbakekalt 6, 12 og 18 måneder etter behandlingen. Ved hvert oppfølgingsbesøk ble det utført kliniske og radiografiske undersøkelser av to kalibrerte blindede undersøkere. Alle tenner ble evaluert klinisk og radiografisk i henhold til kriteriene: (1) fravær av spontan smerte og/eller følsomhet for trykk, (2) fravær av sinus, fistel, ødem og/eller unormal mobilitet, (3) fravær av radiolucens ved de interterradikulære og/eller periapikale områdene, (4) fravær av intern eller ekstern rotresorpsjon. Fravær av spontan smerte, patologisk mobilitet, ømhet til perkusjon, hevelse, fistel og gingivalbetennelse ble ansett som en klinisk suksess, mens fravær av intern/ekstern rotresorpsjon og periapikal/furcal radiolucens ble ansett som en radiografisk suksess. Kalkmetamorfose av massen ble ikke ansett som en feil.

Massevev ble vasket i fosfatbufret saltvann (Gibco, Invitrogen, Karlsruhe, Tyskland) i 1 min, kuttet i små biter, overført til cellekulturplater og inkubert med Dulbeccos modifiserte Eagles medium inneholdende 10 % føtalt bovint serum (Gibco BRL, Life Technologies, Grand Island, NY, USA), penicillin-G (100 U⋅mL), streptomycin (100 µg⋅mL) og Fungizone (0,25 g⋅mL) (GeminiBio-Products Inc., Woodland, CA, USA) kl. 37 °C i en fuktet atmosfære med 5 % CO2. Migrering av celler fra pulpalvevet skjedde 1 uke senere, og kulturer ble etablert og opprettholdt i standard kulturmedium. Medium ble oppfrisket tre ganger per uke, og cellene ble delt etter å ha nådd sammenløp. Masseceller mellom tredje og åttende passasje ble brukt i denne studien (ref).

RNA ble ekstrahert fra de behandlede cellene ved bruk av RNAiso Plus (TaKaRa Bio, Shiga, Japan). cDNA ble syntetisert fra 400 ng totalt RNA ved å bruke PrimeScript RT-reagenssettet (TaKaRa Bio, Otsu, Japan) i henhold til produsentens instruksjoner. En tiendedel av det oppnådde cDNA ble tilsatt for et sluttvolum på 20 µL for hver reaksjon som inneholdt SYBR Green I (TaKaRa Bio, Shiga, Japan). Primerne for MMP-2, -8 og -9 var som følger (sense/antisense):

MMP-2: 5'-ATC CTG GCT TTC CCA AGC TC-3'/3'-CAC CCT TGA AGA AGT AGC TGT G-5'. MMP-8:5'-CTGTTGAAGGCCTAGAGCTGCTGCTCC3'/5'CATCTTCTCTTCAAACTCTACCC-3'. MMP-9: 5'-GGG CTT AGA TCA TTC CTC AGT G-3'/3'-GCC ATT CAC GTC GTC CTT AT-5'. (ref) Reaksjoner ble kjørt på et ABI Step One sanntids PCR-system (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) med følgende program: 45 sykluser på 95 °C i 10 s, 60 °C i 15 s og 72 °C i 20 s. For relative sammenligninger av hvert gen, analyserte etterforskerne terskelsyklusverdien (Ct) til sanntids PCR-data ved å bruke 2-ΔΔCt-metoden.20 PCR-produktene ble analysert på en 1,5% agarosegel inneholdende 1 pg/ml etidiumbromid, som fester seg til nukleinsyrer, slik at PCR-produktene kan visualiseres under UV-lys. Gelen ble fotografert for å la produktene kvantifiseres som beskrevet nedenfor. Etter å ha funnet den lineære delen for hvert sett med primere for kvantifisering av produktene, kvantifiserte etterforskerne produktene med et bildebehandlings- og analyseprogram (ScionImage PC, Scion Corporation, Frederick, MD, USA) for å analysere uttrykket av MMP-2, -8 og -9.(ref) Statistisk analyse Den statistiske analysen ble utført ved bruk av SPSS for Windows versjon 25.0 (SPSS, Chicago, IL, USA). En p-verdi på <0,05 ble ansett for å være statistisk signifikant.

Data ble analysert ved hjelp av en Fisher Exact-test i tillegg til kjikvadrat-tester for å utføre henholdsvis inter- og intra-gruppe sammenligninger.

Fisher's Exact Test ble brukt for å teste nivåene av MMP-2, -8, -9 uttrykk mellom de reversible og irreversible pulpittgruppene.

De 6, 12 og 18 månedene klinisk og radiografisk suksess for MTA- og Biodentine-materialer ble testet med kjikvadrattest.

Mann Whitney U-test ble brukt til å sammenligne MMP-2, -8, -9 uttrykk mellom vellykkede og mislykkede pulpotomigrupper.