A mátrix metalloproteinázok szerepe az elsődleges fogak pulpotómiás kezelésében

Ebbe a vizsgálatba 57 egészséges és együttműködő, 5-10 év közötti gyermek összesen 63 mandibuláris primer második őrlőfogát vontuk be. Az Ege Egyetem Orvostudományi Kar Etikai Bizottsága jóváhagyta a tanulmányt (hivatkozási szám: 16-7/14). A részletes kezelési tervet ismertették a gyerekekkel és a szülőkkel, és írásos beleegyezést kaptak.

A műtét előtt periapikális röntgenfelvételek készültek. Azoknál a betegeknél, akiknek a foga klinikai vagy radiográfiai bizonyítékot mutatott mély szuvas lézióra, amely közel vagy a pulpakamrába nyúlik be, figyelembe vették a lehetséges felvételt.

A fogakat a klinikai diagnózis alapján különböző csoportokba soroltuk. A diagnózis szigorú klinikai és radiográfiai kritériumokon alapult. Amikor a fogszuvasodás eltávolítása során a fogpulpát exponáltuk, a következő klinikai és radiográfiai diagnosztikai kritériumokat alkalmaztuk; I. csoport (reverzibilis pulpitis fogak): enyhe, enyhe intenzitású klinikai tünetek, enyhén túlzott reakció a hideg vagy édes ingerekre, nincs fájdalom a kórelőzményben, nincs érzékenység rágásra vagy ütődésre, vérzési idő a szabaddá vált pulpaszövetből 5 percnél rövidebb, és nem bővül a parodontális ínszalag tér. A pulpotomiás csoportban a tűpontnál kisebb pulpális exudációjú fogakat kizártuk a gennyes/viszkózus, sötét színű váladékkal rendelkező fogakból, valamint a nekrotikus fogakból.

II. csoport (fogak irreverzibilis pulpitissel): Spontán fájdalom, rágásra vagy ütődésre való érzékenység, 5 percnél hosszabb vérzési idő a szabaddá tett pulpaszövetből, valamint a parodontális ínszalag tér kiszélesedése, periapikális elváltozás.

Etikai okokból nem volt kontrollcsoport egészséges, szuvasodásmentes fogakból vett vérmintával. Az összes primer őrlőfogat elosztottuk a két kezelési csoport között: pulpotomia (I. csoport, n=42) és pulpectomia (II. csoport, n=21).

A pulpotomiás eljárásokat és az összes mintavételt ugyanaz a kezelő (H.E.G.) végezte a következő eljárás szerint: helyi érzéstelenítés (2% lidokain (1:000 000)-Jetokain Simplex, Adeka, Törökország) történt, és a fogakat gumidíjjal izoláltuk. (Roeko Dental Dam, Coltane, Whaledent, Németország). A szuvas dentint eltávolítottuk az üregből, a perifériáról a központ felé haladva egy alacsony sebességű körfúróval (4. sz.). A cellulózkamra tetejét eltávolították, és éles kotrógéppel koronális pépszövetet vettek ki. Minden pépmintát 1 ml Tri Pure Reagent szállítóközegbe helyeztünk előre lemért Eppendorf-csövekbe. A mintákat ismét lemértük, és a tömegeket feljegyeztük, mielőtt a laboratóriumi eljárásokig -80 °C-on tároltuk. A pulpectomiás csoportban (II. csoport) minden mintavételi eljárást ugyanúgy végeztünk, mint a pulpotomiás csoportban.

Az I. csoportban a coronalis pulpa eltávolítása után az üreget steril sóoldattal öntöztük, és a kezdeti vérzést úgy szabályoztuk, hogy fiziológiás sóoldattal megnedvesített steril pamutpelleteket helyeztünk a radicularis pulpa csonkjára, enyhe nyomást gyakorolva és 5 percig várva. Ebbe a csoportba kerültek azok a fogak, amelyeknél a vérzéscsillapítás a csatornanyílásoknál 5 perc alatt elérhető volt. A véletlenszerű besorolást két csoportban, 1:1 arányban végeztük ingyenes online szoftver (http://www.random.org) segítségével. A randomizációs eljárást követően a betegek sorszámokat kaptak a beiratkozás sorrendjében, és a kezelõt tájékoztatták az anyagról, akár MTA-val (n=21), akár Biodentine-nel (n=21).

MTA Csoport: A gyártó utasításai szerint az MTA (Pro Root White MTA, Dentsply, Tulsa Dental Specialties, USA) port steril vízzel 3:1 por/víz arányban összekeverve sűrű krémes pasztát kaptunk, majd a a cellulózkamra padlója. Az MTA keveréket megnedvesített pamutpellettel vontuk be, majd üvegionomer cementtel (GIC-Ketac Molar Easymix, 3M Espe, Seefeld, Németország) ideiglenesen lezártuk a második látogatásig.

Biodentine csoport: A Biodentine (Septodont, Saint-Maur-des-Fossés, Franciaország) kapszulát óvatosan egy kemény felületre koppintották a por diffundálásához, öt csepp folyadékot öntöttünk az egyadagos adagolóból a kapszulába, majd 4200 ford./perc 30 másodpercig, és a gyártó által javasolt megfelelő spatulával a pépcsonkokra helyezzük. Miután hagytuk a Biodentine-t 12 percig megkötni, a fogakat ideiglenesen GIC-vel lezártuk, ugyanúgy, mint az MTA csoportban.

24 óra elteltével mindkét csoport fogait előformázott rozsdamentes acél koronákkal (3M Espe, Stainless Steel Crowns, Seefeld, Németország) helyreállítottuk. A résztvevőket a kezelés után 6, 12 és 18 hónappal visszahívták. Minden egyes utóellenőrzési látogatás alkalmával klinikai és radiográfiai vizsgálatokat végeztek két kalibrált vak vizsgáló által. Minden fogat klinikailag és radiográfiailag értékeltek a következő kritériumok szerint: (1) spontán fájdalom hiánya és/vagy nyomásérzékenység, (2) sinus, fisztula, ödéma és/vagy kóros mobilitás hiánya, (3) radiolucencia hiánya az interradicularis és/vagy periapikális régiók, (4) a belső vagy külső gyökérreszorpció hiánya. A spontán fájdalom, a patológiás mobilitás, az ütési érzékenység, a duzzanat, a fistula és az ínygyulladás hiányát klinikai sikernek, míg a belső/külső gyökérreszorpció és a periapicalis/furcalis radiolucencia hiányát radiográfiai sikernek tekintették. A pulpa meszes metamorfózisát nem tekintették kudarcnak.

A pépszövetet foszfáttal pufferolt sóoldatban (Gibco, Invitrogen, Karlsruhe, Németország) 1 percig mostuk, apró darabokra vágtuk, sejttenyésztő lemezekre vittük, és 10% magzati borjúszérumot (Gibco BRL) tartalmazó Dulbecco módosított Eagle táptalajjal inkubáltuk. Life Technologies, Grand Island, NY, USA), penicillin-G (100 U⋅mL), streptomycin (100 µg⋅mL) és Fungizone (0,25 g⋅mL) (GeminiBio-Products Inc., Woodland, CA, USA) 37 °C-on 5% CO2-tartalmú párásított atmoszférában. A sejtek vándorlása a pulpális szövetből 1 héttel később következett be, és a tenyészeteket standard tápközegben hoztuk létre és tartottuk fenn. A táptalajt hetente háromszor frissítettük, és a sejteket szétosztottuk, miután elérte az összefolyást. Ebben a vizsgálatban a harmadik és a nyolcadik passzázs közötti cellulózsejteket használtuk (ref.).

Az RNS-t a kezelt sejtekből RNAiso Plus (TaKaRa Bio, Shiga, Japán) segítségével extraháltuk. A cDNS-t 400 ng össz-RNS-ből szintetizáltuk a PrimeScript RT reagenskészlet (TaKaRa Bio, Otsu, Japán) segítségével a gyártó utasításai szerint. A kapott cDNS egytizedét hozzáadtuk 20 µl végtérfogathoz minden egyes SYBR Green I-et (TaKaRa Bio, Shiga, Japán) tartalmazó reakcióhoz. Az MMP-2, -8 és -9 primerei a következők voltak (szensz/antiszensz):

MMP-2: 5'-ATC CTG GCT TTC CCA AGC TC-3'/3'-CAC CCT TGA AGA AGT AGC TGT G-5'. MMP-8:5'-CTGTTGAAGGCCTAGAGCTGCTGCTCC3'/5'CATCTTCTCTTCAAACTCTACCC-3'. MMP-9: 5'-GGG CTT AGA TCA TTC CTC AGT G-3'/3'-GCC ATT CAC GTC GTC CTT AT-5'. (ref) A reakciókat egy ABI Step One valós idejű PCR rendszeren (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) futtattuk a következő programmal: 45 ciklus 95 °C-on 10 másodpercig, 60 °C-on 15 másodpercig és 72 °C-on 20 másodpercig. Az egyes gének relatív összehasonlításához a kutatók a valós idejű PCR-adatok küszöbciklusának (Ct) értékét elemezték a 2-ΔΔCt módszerrel.20 A PCR-termékeket 1 pg/ml etídium-bromidot tartalmazó 1,5%-os agaróz gélen analizáltuk, amely nukleinsavakhoz kötődik, lehetővé téve a PCR-termékek UV-fényben való láthatóvá tételét. A gélt lefényképeztük, hogy lehetővé tegyük a termékek mennyiségi meghatározását az alábbiak szerint. Miután megtalálták az egyes primerkészletek lineáris részét a termékek mennyiségi meghatározásához, a vizsgálók egy képfeldolgozó és elemző programmal (ScionImage PC, Scion Corporation, Frederick, MD, USA) meghatározták a termékeket az MMP-2 expressziójának elemzésére. -8 és -9.(ref) Statisztikai elemzés A statisztikai elemzést az SPSS for Windows 25.0 (SPSS, Chicago, IL, USA) segítségével végeztük. A 0,05-nél kisebb p-értéket tekintettük statisztikailag szignifikánsnak.

Az adatokat a khi-négyzet tesztek mellett Fisher Exact teszttel elemeztük a csoportok közötti, illetve a csoporton belüli összehasonlítások elvégzésére.

A Fisher's Exact Testet az MMP-2, -8, -9 expresszió szintjének tesztelésére használtuk a reverzibilis és irreverzibilis pulpitis csoportok között.

Az MTA és Biodentine anyagok 6, 12 és 18 hónapos klinikai és radiográfiai sikerességét khi-négyzet teszttel teszteltük.

Mann Whitney U tesztet használtunk az MMP-2, -8, -9 kifejezések összehasonlítására a sikeres és sikertelen pulpotomiás csoportok között.