Rollen av matrismetalloproteinaser på de primära tänderna pulpotomibehandlingar

Totalt 63 mandibulära primära andra molartänder av 57 friska och samarbetsvilliga barn i åldern 5-10 år inkluderades i denna studie. Etikkommittén vid medicinska fakulteten vid Ege University godkände studien (referensnummer: 16-7/14). Detaljerad behandlingsplan förklarades för barnen och föräldrarna och skriftligt informerat samtycke erhölls.

Periapikala röntgenbilder erhölls preoperativt. Patienter med en tand som visade kliniska eller radiografiska tecken på en djup karies lesion som sträckte sig nära eller in i pulpakammaren övervägdes för potentiell inkludering.

Tänderna tilldelades olika grupper enligt den kliniska diagnosen. Diagnosen baserades på strikta kliniska och radiografiska kriterier. När tandpulpan exponerades under kariesborttagning tillämpades följande kliniska och radiografiska diagnostiska kriterier; Grupp I (tänder med reversibel pulpit): Mindre kliniska symtom av mindre intensitet, något överdriven reaktion på kall eller söt stimuli, ingen historia av smärta, ingen känslighet för tuggning eller slag, blödningstid från den exponerade pulpavävnaden mindre än 5 minuter, och ingen breddning av det parodontala ligamentutrymmet. I pulpotomigruppen uteslöts tänder med pulpaexponering mindre än en pinpoint, tänder med purulent/viskös, mörkfärgat exsudat som upptäcktes vid exponeringsstället och nekrotiska tänder.

Grupp II (tänder med irreversibel pulpit): Spontan smärta, känslighet för tuggning eller slag, blödningstid från den exponerade pulpavävnaden mer än 5 minuter och breddning av det parodontala ligamentutrymmet, periapikal lesion.

Av etiska skäl fanns det ingen kontrollgrupp med blodprov från friska kariesfria tänder. Alla primära molarer var fördelade mellan de två behandlingsgrupperna som pulpotomi (Grupp I, n=42) och pulpektomi (Grupp II, n=21).

Pulpotomiprocedurerna och all provtagning utfördes av samma operatör (H.E.G.) enligt proceduren enligt följande: lokalbedövning (2 % lidokain (1:000 000)-Jetokain Simplex, Adeka, Turkiet) administrerades och tänderna isolerades med en gummidamm (Roeko Dental Dam, Coltane, Whaledent, Tyskland). Det kariösa dentinet avlägsnades från kaviteten och arbetade från periferin mot mitten med hjälp av en rund borr med låg hastighet (nr:4). Taket på massakammaren togs bort och koronal massavävnad togs med en vass grävmaskin. Alla massaprover placerades i 1 ml Tri Pure Reagent-transportmedium i förvägda Eppendorf-rör. Proverna vägdes igen och vikterna noterades innan de lagrades vid -80°C fram till laboratorieprocedurerna. I pulpektomigruppen (Grupp II) utfördes alla provtagningsprocedurer på samma sätt i pulpotomigruppen.

I grupp I, efter avlägsnande av koronalmassan, spolades håligheten med steril koksaltlösning och initial blödning kontrollerades genom att placera sterila bomullspellets fuktade med saltlösning över den radikulära massastumpen som utövade ett lätt tryck och väntade i 5 minuter. Tänderna för vilka hemostas vid kanalöppningarna kunde uppnås på 5 min inkluderades i denna grupp. Randomiseringen utfördes som två grupper i ett 1:1-förhållande genom att använda gratis onlineprogramvara (http://www.random.org). Efter randomiseringsproceduren tilldelades patienterna sekvensnummer i den ordning de registrerades och operatören informerades om materialet, antingen med MTA (n=21) eller med Biodentine (n=21).

MTA Group: Enligt tillverkarens instruktioner blandades MTA (Pro Root White MTA, Dentsply, Tulsa Dental Specialties, USA) pulver med sterilt vatten i ett 3:1 pulver/vatten-förhållande för att erhålla en tjock krämig pasta och placerades sedan på golvet i massakammaren. MTA-blandningen täcktes med en fuktad bomullspellet och förseglades sedan tillfälligt med glasjonomercement (GIC-Ketac Molar Easymix, 3M Espe, Seefeld, Tyskland) fram till det andra besöket.

Biodentine Group: Biodentine (Septodont, Saint-Maur-des-Fossés, Frankrike) kapsel knackades försiktigt på en hård yta för att sprida pulver, fem droppar vätska från endosdispensern hälldes i kapseln och blandades sedan med 4200 rpm 30 sekunder och placeras över massastubbarna med en lämplig spatel som rekommenderas av tillverkaren. Efter att ha låtit Biodentine stelna i 12 minuter, förseglades tänderna tillfälligt med GIC som samma i MTA-gruppen.

Efter 24 timmar återställdes tänderna i båda grupperna med förformade kronor av rostfritt stål (3M Espe, Stainless Steel Crowns, Seefeld, Tyskland). Deltagarna återkallades 6, 12 och 18 månader efter behandlingen. Vid varje uppföljningsbesök utfördes kliniska och röntgenundersökningar av två kalibrerade blindade granskare. Alla tänder utvärderades kliniskt och radiografiskt enligt kriterierna: (1) frånvaro av spontan smärta och/eller känslighet för tryck, (2) frånvaro av sinus, fistel, ödem och/eller onormal rörlighet, (3) frånvaro av radiolucens vid de interterradikulära och/eller periapikala regionerna, (4) frånvaro av intern eller extern rotresorption. Frånvaron av spontan smärta, patologisk rörlighet, ömhet för slag, svullnad, fistel och gingivalinflammation ansågs vara en klinisk framgång, medan frånvaron av intern/extern rotresorption och periapikal/furkal radiolucens ansågs vara en radiografisk framgång. Förkalkningsmetamorfos av massan ansågs inte som ett misslyckande.

Massavävnad tvättades i fosfatbuffrad koksaltlösning (Gibco, Invitrogen, Karlsruhe, Tyskland) under 1 min, skars i små bitar, överfördes till cellodlingsplattor och inkuberades med Dulbeccos modifierade Eagles medium innehållande 10 % fetalt bovint serum (Gibco BRL, Life Technologies, Grand Island, NY, USA), penicillin-G (100 U⋅mL), streptomycin (100 µg⋅mL) och Fungizone (0,25 g⋅mL) (GeminiBio-Products Inc., Woodland, CA, USA) kl. 37 °C i en fuktad atmosfär med 5 % CO2. Migrering av celler från pulpavävnaden skedde 1 vecka senare, och kulturer etablerades och bibehölls i standardodlingsmedium. Medium uppdaterades tre gånger per vecka och celler delades efter att ha nått sammanflödet. Massaceller mellan den tredje och åttonde passagen användes i denna studie (ref).

RNA extraherades från de behandlade cellerna med användning av RNAiso Plus (TaKaRa Bio, Shiga, Japan). cDNA syntetiserades från 400 ng totalt RNA med användning av PrimeScript RT-reagenssatsen (TaKaRa Bio, Otsu, Japan) enligt tillverkarens instruktioner. En tiondel av erhållet cDNA tillsattes för en slutlig volym av 20 µL för varje reaktion innehållande SYBR Green I (TaKaRa Bio, Shiga, Japan). Primerna för MMP-2, -8 och -9 var följande (sense/antisense):

MMP-2: 5'-ATC CTG GCT TTC CCA AGC TC-3'/3'-CAC CCT TGA AGA AGT AGC TGT G-5'. MMP-8:5'-CTGTTGAAGGCCTAGAGCTGCTGCTCC3'/5'CATCTTCTCTTCAAACTCTACCC-3'. MMP-9: 5'-GGG CTT AGA TCA TTC CTC AGT G-3'/3'-GCC ATT CAC GTC GTC CTT AT-5'. (ref) Reaktioner kördes på ett ABI Step One realtids-PCR-system (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) med följande program: 45 cykler av 95 °C i 10 s, 60 °C i 15 s och 72 °C i 20 s. För relativa jämförelser av varje gen analyserade utredarna tröskelcykelvärdet (Ct) för realtids-PCR-data med användning av 2-ΔΔCt-metoden.20 PCR-produkterna analyserades på en 1,5 % agarosgel innehållande 1 pg/ml etidiumbromid, som fäster till nukleinsyror, vilket gör att PCR-produkterna kan visualiseras under UV-ljus. Gelén fotograferades för att tillåta att produkterna kvantifieras såsom beskrivs nedan. Efter att ha hittat den linjära delen för varje uppsättning primers för kvantifiering av produkterna, kvantifierade utredarna produkterna med ett bildbehandlings- och analysprogram (ScionImage PC, Scion Corporation, Frederick, MD, USA) för att analysera uttrycket av MMP-2, -8 och -9.(ref) Statistisk analys Den statistiska analysen utfördes med SPSS för Windows version 25.0 (SPSS, Chicago, IL, USA). Ett p-värde på <0,05 ansågs vara statistiskt signifikant.

Data analyserades med ett Fisher Exact-test utöver chi-kvadrattest för att utföra jämförelser mellan respektive grupper inom gruppen.

Fisher's Exact Test användes för att testa nivåerna av MMP-2, -8, -9 uttryck mellan de reversibla och irreversibla pulpitisgrupperna.

De 6, 12 och 18 månaderna kliniska och radiografiska framgångarna för MTA- och Biodentine-material testades med chi-kvadrattest.

Mann Whitney U-test användes för att jämföra MMP-2, -8, -9 uttryck mellan framgångsrika och misslyckade pulpotomigrupper.