Le rôle des métalloprotéinases matricielles dans les traitements de pulpotomie des dents primaires

Un total de 63 deuxièmes molaires primaires mandibulaires de 57 enfants sains et coopératifs âgés de 5 à 10 ans ont été inclus dans cette étude. Le comité d'éthique de la faculté de médecine de l'université d'Ege a approuvé l'étude (numéro de référence : 16-7/14). Un plan de traitement détaillé a été expliqué aux enfants et aux parents et des consentements éclairés écrits ont été obtenus.

Des radiographies périapicales ont été réalisées en préopératoire. Les patients avec une dent présentant des signes cliniques ou radiographiques d'une lésion carieuse profonde s'étendant à proximité ou dans la chambre pulpaire ont été considérés pour une inclusion potentielle.

Les dents ont été assignées à différents groupes selon le diagnostic clinique. Le diagnostic reposait sur des critères cliniques et radiographiques stricts. Lorsque la pulpe dentaire a été exposée lors de l'élimination des caries, les critères de diagnostic cliniques et radiographiques suivants ont été appliqués ; Groupe I (dents avec pulpite réversible) : symptômes cliniques légers d'intensité mineure, réaction légèrement exagérée aux stimuli froids ou sucrés, aucun antécédent de douleur, aucune sensibilité à la mastication ou à la percussion, temps de saignement du tissu pulpaire exposé inférieur à 5 minutes, et pas d'élargissement de l'espace ligamentaire parodontal. Dans le groupe de pulpotomie, les dents avec une exposition pulpaire inférieure à un point d'épingle, les dents avec un exsudat purulent/visqueux de couleur foncée détecté au site d'exposition et les dents nécrotiques ont été exclues.

Groupe II (dents avec pulpite irréversible) : douleur spontanée, sensibilité à la mastication ou à la percussion, temps de saignement du tissu pulpaire exposé supérieur à 5 minutes et élargissement de l'espace ligamentaire parodontal, lésion périapicale.

Pour des raisons éthiques, il n'y avait pas de groupe témoin avec des échantillons de sang provenant de dents saines sans caries. Toutes les molaires primaires ont été réparties entre les deux groupes de traitement sous forme de pulpotomie (Groupe I, n = 42) et de pulpectomie (Groupe II, n = 21).

Les procédures de pulpotomie et tous les prélèvements ont été effectués par le même opérateur (H.E.G.) en suivant la procédure suivante : une anesthésie locale (2 % de lidocaïne (1:000 000) - Jetokain Simplex, Adeka, Turquie) a été administrée et les dents ont été isolées par une digue en caoutchouc (Roeko Dental Dam, Coltane, Whaledent, Allemagne). La dentine cariée a été retirée de la cavité, en travaillant de la périphérie vers le centre à l'aide d'une fraise ronde à basse vitesse (n° 4). Le toit de la chambre pulpaire a été enlevé et le tissu pulpaire coronal a été prélevé à l'aide d'un excavateur pointu. Tous les échantillons de pulpe ont été placés dans 1 ml de milieu de transport Tri Pure Reagent dans des tubes Eppendorf prépesés. Les échantillons ont été pesés à nouveau et les poids ont été notés avant stockage à -80°C jusqu'aux procédures de laboratoire. Dans le groupe pulpectomie (groupe II), toutes les procédures d'échantillonnage ont été effectuées de la même manière dans le groupe pulpotomie.

Dans le groupe I, après le retrait de la pulpe coronale, la cavité a été irriguée avec une solution saline stérile et le saignement initial a été contrôlé en plaçant des boulettes de coton stériles humidifiées avec une solution saline sur le moignon de pulpe radiculaire en exerçant une légère pression et en attendant 5 min. Les dents pour lesquelles l'hémostase aux orifices canalaires pouvait être obtenue en 5 min ont été incluses dans ce groupe. La randomisation a été réalisée en deux groupes dans un rapport 1 : 1 en utilisant un logiciel en ligne gratuit (http://www.random.org). Suite à la procédure de randomisation, les patients ont reçu des numéros séquentiels dans l'ordre d'inscription et l'opérateur a été informé du matériel, soit avec MTA (n = 21) soit avec Biodentine (n = 21).

MTA Group : Selon les instructions du fabricant, la poudre de MTA (Pro Root White MTA, Dentsply, Tulsa Dental Specialties, USA) a été mélangée à de l'eau stérile dans un rapport poudre/eau de 3:1 pour obtenir une pâte épaisse et crémeuse, puis placée sur le plancher de la chambre pulpaire. Le mélange MTA a été recouvert d'une boulette de coton humidifiée, puis temporairement scellé à l'aide de ciment verre ionomère (GIC-Ketac Molar Easymix, 3M Espe, Seefeld, Allemagne) jusqu'à la deuxième visite.

Groupe Biodentine : La capsule Biodentine (Septodont, Saint-Maur-des-Fossés, France) a été doucement tapotée sur une surface dure pour diffuser la poudre, cinq gouttes de liquide du distributeur unidose ont été versées dans la capsule puis mélangées avec 4200 rpm 30 secondes et placé sur les moignons de pulpe à l'aide d'une spatule appropriée conseillée par le fabricant. Après avoir laissé Biodentine reposer pendant 12 min, les dents ont été temporairement scellées avec GIC comme dans le groupe MTA.

Après 24 heures, les dents des deux groupes ont été restaurées avec des couronnes préformées en acier inoxydable (3M Espe, Couronnes en acier inoxydable, Seefeld, Allemagne). Les participants ont été rappelés à 6, 12 et 18 mois après le traitement. À chaque visite de suivi, des examens cliniques et radiographiques ont été effectués par deux examinateurs calibrés en aveugle. Toutes les dents ont été évaluées cliniquement et radiographiquement selon les critères : (1) absence de douleur spontanée et/ou de sensibilité à la pression, (2) absence de sinus, de fistule, d'œdème et/ou de mobilité anormale, (3) absence de radioclarté à les régions interradiculaires et/ou périapicales, (4) absence de résorption radiculaire interne ou externe. L'absence de douleur spontanée, de mobilité pathologique, de sensibilité à la percussion, de gonflement, de fistule et d'inflammation gingivale a été considérée comme un succès clinique, tandis que l'absence de résorption radiculaire interne/externe et de radiotransparence périapicale/furcale a été considérée comme un succès radiographique. La métamorphose calcifiante de la pulpe n'a pas été considérée comme un échec.

Le tissu pulpaire a été lavé dans une solution saline tamponnée au phosphate (Gibco, Invitrogen, Karlsruhe, Allemagne) pendant 1 min, coupé en petits morceaux, transféré sur des plaques de culture cellulaire et incubé avec le milieu Eagle modifié de Dulbecco contenant 10 % de sérum bovin fœtal (Gibco BRL, Life Technologies, Grand Island, NY, USA), pénicilline-G (100 U⋅mL), streptomycine (100 µg⋅mL) et Fungizone (0,25 g⋅mL) (GeminiBio-Products Inc., Woodland, CA, USA) à 37 °C dans une atmosphère humidifiée à 5 % de CO2. La migration des cellules du tissu pulpaire s'est produite 1 semaine plus tard, et les cultures ont été établies et maintenues dans un milieu de culture standard. Le milieu a été rafraîchi trois fois par semaine et les cellules ont été divisées après avoir atteint la confluence. Des cellules pulpaires entre les troisième et huitième passages ont été utilisées dans cette étude (réf).

L'ARN a été extrait des cellules traitées à l'aide de RNAiso Plus (TaKaRa Bio, Shiga, Japon). L'ADNc a été synthétisé à partir de 400 ng d'ARN total à l'aide du kit de réactifs PrimeScript RT (TaKaRa Bio, Otsu, Japon) conformément aux instructions du fabricant. Un dixième de l'ADNc obtenu a été ajouté pour un volume final de 20 µL pour chaque réaction contenant du SYBR Green I (TaKaRa Bio, Shiga, Japon). Les amorces pour MMP-2, -8 et -9 étaient les suivantes (sens/antisens) :

MMP-2 : 5'-ATC CTG GCT TTC CCA AGC TC-3'/3'-CAC CCT TGA AGA AGT AGC TGT G-5'. MMP-8:5'-CTGTTGAAGGCCTAGAGCTGCTGCTCC3'/5'CATCTTCTCTTCAAACTCTACCC-3'. MMP-9 : 5'-GGG CTT AGA TCA TTC CTC AGT G-3'/3'-GCC ATT CAC GTC GTC CTT AT-5'. (ref) Les réactions ont été effectuées sur un système de PCR en temps réel ABI Step One (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) avec le programme suivant : 45 cycles de 95 °C pendant 10 s, 60 °C pendant 15 s et 72 °C pendant 20 s. Pour des comparaisons relatives de chaque gène, les chercheurs ont analysé la valeur du cycle seuil (Ct) des données de PCR en temps réel à l'aide de la méthode 2-ΔΔCt.20 Les produits de PCR ont été analysés sur un gel d'agarose à 1,5 % contenant 1 pg/mL de bromure d'éthidium, qui se fixe aux acides nucléiques, permettant de visualiser les produits de PCR sous lumière UV. Le gel a été photographié pour permettre aux produits d'être quantifiés comme décrit ci-dessous. Après avoir trouvé la portion linéaire pour chaque ensemble d'amorces pour la quantification des produits, les chercheurs ont quantifié les produits avec un programme de traitement et d'analyse d'image (ScionImage PC, Scion Corporation, Frederick, MD, USA) pour analyser l'expression de MMP-2, -8 et -9.(réf) Analyse statistique L'analyse statistique a été effectuée à l'aide de SPSS pour Windows version 25.0 (SPSS, Chicago, IL, USA). Une valeur de p <0,05 a été considérée comme statistiquement significative.

Les données ont été analysées à l'aide d'un test exact de Fisher en plus des tests du chi carré pour effectuer des comparaisons inter- et intra-groupes, respectivement.

Le test exact de Fisher a été utilisé pour tester les niveaux d'expression de MMP-2, -8, -9 entre les groupes de pulpite réversible et irréversible.

Les succès cliniques et radiographiques à 6, 12 et 18 mois des matériaux MTA et Biodentine ont été testés par le test du chi carré.

Le test Mann Whitney U a été utilisé pour comparer les expressions MMP-2, -8, -9 entre les groupes de pulpotomies réussies et échouées.