De rol van matrixmetalloproteïnasen bij de behandeling van pulpotomie van de melktanden

Een totaal van 63 onderkaak tweede molaren van 57 gezonde en coöperatieve kinderen tussen 5-10 jaar oud werden in deze studie opgenomen. De ethische commissie van de medische faculteit van Ege University keurde de studie goed (referentienummer: 16-7/14). Er werd een gedetailleerd behandelplan uitgelegd aan de kinderen en de ouders en schriftelijke geïnformeerde toestemmingen werden verkregen.

Periapicale röntgenfoto's werden preoperatief verkregen. Patiënten met een tand die klinisch of radiografisch bewijs vertoonde van een diepe carieuze laesie die zich tot dichtbij of in de pulpakamer uitstrekte, kwamen in aanmerking voor mogelijke opname.

De tanden werden toegewezen aan verschillende groepen volgens de klinische diagnose. De diagnose was gebaseerd op strikte klinische en radiografische criteria. Wanneer de tandpulp werd blootgelegd tijdens het verwijderen van cariës, werden de volgende klinische en radiografische diagnostische criteria toegepast; Groep I (tanden met reversibele pulpitis): lichte klinische symptomen van geringe intensiteit, enigszins overdreven reactie op koude of zoete prikkels, geen voorgeschiedenis van pijn, geen gevoeligheid voor kauwen of percussie, bloedingstijd van het blootgestelde pulpaweefsel minder dan 5 minuten, en geen verwijding van de parodontale ligamentruimte. Bij tanden van de pulpotomiegroep met pulpale blootstelling kleiner dan een speldenpunt, werden tanden met purulent/viskeus, donker gekleurd exsudaat gedetecteerd op de plaats van blootstelling en necrotische tanden uitgesloten.

Groep II (tanden met onomkeerbare pulpitis): spontane pijn, gevoeligheid voor kauwen of percussie, bloedingstijd van het blootgestelde pulpaweefsel langer dan 5 minuten, en verwijding van de parodontale ligamentruimte, periapicale laesie.

Om ethische redenen was er geen controlegroep met bloedmonsters van gezonde cariësvrije tanden. Alle melkmolaren werden verdeeld over de twee behandelingsgroepen als pulpotomie (groep I, n=42) en pulpectomie (groep II, n=21).

De pulpotomieprocedures en alle bemonstering werden uitgevoerd door dezelfde operator (H.E.G.) volgens de volgende procedure: lokale anesthesie (2% lidocaïne (1:000.000)-Jetokain Simplex, Adeka, Turkije) werd toegediend en tanden werden geïsoleerd door een rubberdam (Roeko Dental Dam, Coltane, Whaledent, Duitsland). Het carieuze dentine werd uit de caviteit verwijderd, waarbij van de periferie naar het midden werd gewerkt met behulp van een langzame ronde boor (nr. 4). Het dak van de pulpakamer werd verwijderd en coronaal pulpaweefsel werd weggenomen met een scherpe graafmachine. Alle pulpmonsters werden in 1 ml Tri Pure Reagent-transportmedium in vooraf gewogen Eppendorf-buisjes geplaatst. De monsters werden opnieuw gewogen en de gewichten werden genoteerd voordat ze bij -80°C werden bewaard tot de laboratoriumprocedures. In de pulpotomiegroep (groep II) werden alle bemonsteringsprocedures op dezelfde manier uitgevoerd in de pulpotomiegroep.

In groep I werd de holte, na verwijdering van de coronale pulpa, geïrrigeerd met steriele zoutoplossing, en de aanvankelijke bloeding werd gecontroleerd door steriele wattenbolletjes bevochtigd met zoutoplossing over de radiculaire pulpastomp te plaatsen door lichte druk uit te oefenen en 5 minuten te wachten. De tanden waarvoor hemostase bij de kanaalopeningen in 5 minuten kon worden bereikt, werden in deze groep opgenomen. De randomisatie werd uitgevoerd als twee groepen in een verhouding van 1: 1 met behulp van gratis online software (//www.random.org). Na de randomisatieprocedure kregen de patiënten volgnummers toegewezen in de volgorde van inschrijving en werd de operator geïnformeerd over het materiaal, ofwel met MTA (n=21) of met Biodentine (n=21).

MTA Group: Volgens de instructies van de fabrikant werd MTA-poeder (Pro Root White MTA, Dentsply, Tulsa Dental Specialties, VS) gemengd met steriel water in een verhouding van 3:1 poeder/water om een ​​dikke romige pasta te verkrijgen, vervolgens op de vloer van de pulpakamer. Het MTA-mengsel werd bedekt met een bevochtigde wattenpellet en vervolgens tijdelijk afgesloten met glasionomeercement (GIC-Ketac Molar Easymix, 3M Espe, Seefeld, Duitsland) tot het tweede bezoek.

Biodentine Group: Biodentine (Septodont, Saint-Maur-des-Fossés, Frankrijk) capsule werd voorzichtig op een hard oppervlak getikt om poeder te verspreiden, vijf druppels vloeistof uit de dispenser voor eenmalig gebruik werden in de capsule gegoten en vervolgens gemengd met 4200 rpm 30 seconden en over de pulpa-stronken geplaatst met behulp van een geschikte spatel aanbevolen door de fabrikant. Nadat Biodentine 12 minuten had laten uitharden, werden de tanden tijdelijk verzegeld met GIC zoals in de MTA-groep.

Na 24 uur werden de tanden in beide groepen hersteld met voorgevormde roestvrijstalen kronen (3M Espe, Stainless Steel Crowns, Seefeld, Duitsland). De deelnemers werden 6, 12 en 18 maanden na de behandeling teruggeroepen. Bij elk vervolgbezoek werden klinische en radiografische onderzoeken uitgevoerd door twee gekalibreerde geblindeerde examinatoren. Alle tanden werden klinisch en radiografisch beoordeeld volgens de volgende criteria: (1) afwezigheid van spontane pijn en/of gevoeligheid voor druk, (2) afwezigheid van sinus, fistel, oedeem en/of abnormale mobiliteit, (3) afwezigheid van radiolucentie bij de interradiculaire en/of periapicale gebieden, (4) afwezigheid van interne of externe wortelresorptie. De afwezigheid van spontane pijn, pathologische mobiliteit, gevoeligheid voor percussie, zwelling, fistel en tandvleesontsteking werd als een klinisch succes beschouwd, terwijl de afwezigheid van interne/externe wortelresorptie en periapicale/furcale radiolucentie als een radiografisch succes werd beschouwd. Verkalkte metamorfose van de pulp werd niet als een mislukking beschouwd.

Pulpweefsel werd gewassen in fosfaatgebufferde zoutoplossing (Gibco, Invitrogen, Karlsruhe, Duitsland) gedurende 1 minuut, in kleine stukjes gesneden, overgebracht naar celkweekplaten en geïncubeerd met Dulbecco's gemodificeerd Eagle's medium dat 10% foetaal runderserum bevatte (Gibco BRL, Life Technologies, Grand Island, NY, VS), penicilline-G (100 U⋅mL), streptomycine (100 µg⋅mL) en Fungizone (0,25 g⋅mL) (GeminiBio-Products Inc., Woodland, CA, VS) op 37 °C in een bevochtigde atmosfeer van 5% CO2. Migratie van cellen uit het pulpale weefsel vond 1 week later plaats en kweken werden opgezet en in stand gehouden in standaard kweekmedium. Medium werd drie keer per week ververst en cellen werden gesplitst nadat ze samenvloeiing hadden bereikt. Pulpcellen tussen de derde en achtste passage werden in deze studie gebruikt (ref).

RNA werd geëxtraheerd uit de behandelde cellen met behulp van RNAiso Plus (TaKaRa Bio, Shiga, Japan). cDNA werd gesynthetiseerd uit 400 ng totaal RNA met behulp van de PrimeScript RT-reagenskit (TaKaRa Bio, Otsu, Japan) volgens de instructies van de fabrikant. Een tiende van het verkregen cDNA werd toegevoegd voor een uiteindelijk volume van 20 µl voor elke reactie die SYBR Green I bevatte (TaKaRa Bio, Shiga, Japan). De primers voor MMP-2, -8 en -9 waren als volgt (sense/antisense):

MMP-2: 5'-ATC CTG GCT TTC CCA AGC TC-3'/3'-CAC CCT TGA AGA AGT AGC TGT G-5'. MMP-8:5'-CTGTTGAAGGCCTAGAGCTGCTGCTCC3'/5'CATCTTCTCTTCAAACTCTACCC-3'. MMP-9: 5'-GGG CTT AGA TCA TTC CTC AGT G-3'/3'-GCC ATT CAC GTC GTC CTT AT-5'. (ref) Reacties werden uitgevoerd op een ABI Step One real-time PCR-systeem (Applied Biosystems, Foster City, CA, VS) met het volgende programma: 45 cycli van 95 ° C gedurende 10 seconden, 60 ° C gedurende 15 seconden en 72 °C gedurende 20 seconden. Voor relatieve vergelijkingen van elk gen analyseerden de onderzoekers de drempelwaarde van de cyclus (Ct) van de real-time PCR-gegevens met behulp van de 2-ΔΔCt-methode.20 De PCR-producten werden geanalyseerd op een 1,5% agarosegel die 1 pg/ml ethidiumbromide bevat, dat hecht aan nucleïnezuren, waardoor de PCR-producten onder UV-licht zichtbaar kunnen worden gemaakt. De gel werd gefotografeerd om het mogelijk te maken de producten te kwantificeren zoals hieronder beschreven. Na het vinden van het lineaire gedeelte voor elke set primers voor kwantificering van de producten, kwantificeerden de onderzoekers de producten met een beeldverwerkings- en analyseprogramma (ScionImage PC, Scion Corporation, Frederick, MD, VS) om de expressie van MMP-2 te analyseren. -8 en -9. (ref) Statistische analyse De statistische analyse werd uitgevoerd met behulp van SPSS voor Windows versie 25.0 (SPSS, Chicago, IL, VS). Een p-waarde van <0,05 werd als statistisch significant beschouwd.

Gegevens werden geanalyseerd met behulp van een Fisher Exact Test naast chi-kwadraattesten om respectievelijk inter- en intra-groepsvergelijkingen uit te voeren.

De Fisher's Exact Test werd gebruikt voor het testen van de niveaus van MMP-2, -8, -9-expressie tussen de reversibele en irreversibele pulpitisgroepen.

Het klinische en radiografische succes na 6, 12 en 18 maanden van MTA- en Biodentine-materialen werd getest door middel van een chi-kwadraattest.

Mann Whitney U-test werd gebruikt bij het vergelijken van de MMP-2, -8, -9-expressies tussen succesvolle en mislukte pulpotomiegroepen.