Die Rolle von Matrix-Metalloproteinasen bei den Primärzahn-Pulpotomie-Behandlungen

Insgesamt 63 untere primäre zweite Molaren von 57 gesunden und kooperativen Kindern im Alter zwischen 5-10 Jahren wurden in diese Studie eingeschlossen. Die Ethikkommission der Medizinischen Fakultät der Universität Ege genehmigte die Studie (Referenznummer: 16-7/14). Den Kindern und den Eltern wurde ein detaillierter Behandlungsplan erklärt und schriftliche Einverständniserklärungen wurden eingeholt.

Präoperativ wurden periapikale Röntgenaufnahmen gemacht. Patienten mit einem Zahn, der klinische oder röntgenologische Anzeichen einer tiefen kariösen Läsion aufwies, die sich bis nahe an oder in die Pulpakammer erstreckte, wurden für einen möglichen Einschluss in Betracht gezogen.

Die Zähne wurden entsprechend der klinischen Diagnose verschiedenen Gruppen zugeordnet. Die Diagnose basierte auf strengen klinischen und röntgenologischen Kriterien. Wenn die Zahnpulpa während der Kariesentfernung freigelegt wurde, wurden die folgenden klinischen und röntgenologischen Diagnosekriterien angewendet; Gruppe I (Zähne mit reversibler Pulpitis): Leichte klinische Symptome von geringer Intensität, leicht übertriebene Reaktion auf kalte oder süße Reize, keine Schmerzanamnese, keine Empfindlichkeit gegenüber Kauen oder Klopfen, Blutungszeit aus dem exponierten Pulpagewebe weniger als 5 Minuten und keine Aufweitung des parodontalen Bandraumes. In der Pulpotomie-Gruppe wurden Zähne mit weniger als stecknadelkopfgroßer Pulpafreilegung, Zähne mit eitrigem/zähflüssigem, dunkel gefärbtem Exsudat an der Expositionsstelle und nekrotische Zähne ausgeschlossen.

Gruppe II (Zähne mit irreversibler Pulpitis): Spontaner Schmerz, Empfindlichkeit gegenüber Kauen oder Perkussion, Blutungszeit aus dem freigelegten Pulpagewebe von mehr als 5 Minuten und Erweiterung des parodontalen Bandraums, periapikale Läsion.

Aus ethischen Gründen gab es keine Kontrollgruppe mit Blutproben von gesunden kariesfreien Zähnen. Alle Milchmolaren wurden auf die beiden Behandlungsgruppen als Pulpotomie (Gruppe I, n=42) und Pulpektomie (Gruppe II, n=21) verteilt.

Die Pulpotomieverfahren und alle Entnahmen wurden von demselben Operateur (H.E.G.) nach dem folgenden Verfahren durchgeführt: Lokalanästhesie (2 % Lidocain (1:000.000)-Jetokain Simplex, Adeka, Türkei) wurde verabreicht, und die Zähne wurden durch einen Kofferdam isoliert (Roeko Dental Dam, Coltane, Whaledent, Deutschland). Das kariöse Dentin wurde aus der Kavität entfernt, indem mit einem Rosenbohrer mit niedriger Drehzahl (Nr. 4) von der Peripherie zur Mitte gearbeitet wurde. Das Dach der Pulpakammer wurde entfernt und koronales Pulpagewebe wurde unter Verwendung eines scharfen Baggers entnommen. Alle Zellstoffproben wurden in 1 ml Tri Pure Reagent-Transportmedium in vorgewogene Eppendorf-Röhrchen gegeben. Die Proben wurden erneut gewogen und die Gewichte notiert, bevor sie bis zu den Laborverfahren bei –80°C gelagert wurden. In der Pulpektomie-Gruppe (Gruppe II) wurden alle Probenahmeverfahren wie in der Pulpotomie-Gruppe durchgeführt.

In Gruppe I wurde nach Entfernung der koronalen Pulpa die Kavität mit steriler Kochsalzlösung gespült, und die anfängliche Blutung wurde gestoppt, indem sterile, mit Kochsalzlösung befeuchtete Wattepellets unter leichtem Druck auf den radikulären Pulpenstumpf gelegt und 5 Minuten gewartet wurden. Die Zähne, bei denen eine Hämostase an den Kanalöffnungen in 5 min erreicht werden konnte, wurden in diese Gruppe aufgenommen. Die Randomisierung wurde in zwei Gruppen im Verhältnis 1:1 unter Verwendung kostenloser Online-Software (http://www.random.org) durchgeführt. Nach dem Randomisierungsverfahren wurden den Patienten fortlaufende Nummern in der Reihenfolge ihrer Aufnahme zugewiesen, und der Bediener wurde über das Material informiert, entweder mit MTA (n=21) oder mit Biodentine (n=21).

MTA-Gruppe: Gemäß den Anweisungen des Herstellers wurde MTA-Pulver (Pro Root White MTA, Dentsply, Tulsa Dental Specialties, USA) mit sterilem Wasser in einem Pulver/Wasser-Verhältnis von 3:1 gemischt, um eine dicke cremige Paste zu erhalten, und dann auf das aufgetragen Boden der Pulpakammer. Die MTA-Mischung wurde mit einem angefeuchteten Wattepellet abgedeckt und anschließend bis zum zweiten Besuch temporär mit Glasionomerzement (GIC-Ketac Molar Easymix, 3M Espe, Seefeld, Deutschland) verschlossen.

Biodentine Group: Eine Biodentine-Kapsel (Septodont, Saint-Maur-des-Fossés, Frankreich) wurde leicht auf eine harte Oberfläche geklopft, um das Pulver zu verteilen, fünf Tropfen Flüssigkeit aus dem Einzeldosisspender wurden in die Kapsel gegossen und dann mit 4200 U/min 30 gemischt Sekunden und mit einem vom Hersteller empfohlenen geeigneten Spatel über die Pulpenstümpfe gelegt. Nachdem Biodentine 12 Minuten lang aushärten konnte, wurden die Zähne wie in der MTA-Gruppe vorübergehend mit GIC versiegelt.

Nach 24 Stunden wurden die Zähne in beiden Gruppen mit vorgeformten Edelstahlkronen (3M Espe, Edelstahlkronen, Seefeld, Deutschland) versorgt. Die Teilnehmer wurden 6, 12 und 18 Monate nach der Behandlung zurückgerufen. Bei jeder Nachuntersuchung wurden klinische und radiologische Untersuchungen von zwei kalibrierten, verblindeten Untersuchern durchgeführt. Alle Zähne wurden klinisch und röntgenologisch nach folgenden Kriterien bewertet: (1) Fehlen spontaner Schmerzen und/oder Druckempfindlichkeit, (2) Fehlen von Nebenhöhlen, Fisteln, Ödemen und/oder abnormaler Beweglichkeit, (3) Fehlen von Strahlendurchlässigkeit bei die interradikulären und/oder periapikalen Regionen, (4) Fehlen einer internen oder externen Wurzelresorption. Das Fehlen spontaner Schmerzen, pathologischer Beweglichkeit, Perkussionsempfindlichkeit, Schwellung, Fisteln und Zahnfleischentzündung wurde als klinischer Erfolg gewertet, während das Fehlen einer internen/externen Wurzelresorption und periapikalen/furkalen Strahlendurchlässigkeit als röntgenologischer Erfolg gewertet wurde. Die kalzifizierende Metamorphose der Pulpa wurde nicht als Misserfolg gewertet.

Zellstoffgewebe wurde in phosphatgepufferter Kochsalzlösung (Gibco, Invitrogen, Karlsruhe, Deutschland) für 1 min gewaschen, in kleine Stücke geschnitten, auf Zellkulturplatten übertragen und mit Dulbecco's modifiziertem Eagle's Medium, enthaltend 10 % fötales Rinderserum (Gibco BRL, Life Technologies, Grand Island, NY, USA), Penicillin-G (100 U⋅ml), Streptomycin (100 µg⋅ml) und Fungizon (0,25 g⋅ml) (GeminiBio-Products Inc., Woodland, CA, USA) bei 37 °C in einer befeuchteten Atmosphäre mit 5 % CO2. Die Migration von Zellen aus dem Pulpagewebe erfolgte 1 Woche später, und Kulturen wurden etabliert und in Standardkulturmedium gehalten. Das Medium wurde dreimal pro Woche aufgefrischt, und die Zellen wurden nach Erreichen der Konfluenz geteilt. Zellstoffzellen zwischen der dritten und achten Passage wurden in dieser Studie verwendet (Ref.).

RNA wurde aus den behandelten Zellen unter Verwendung von RNAiso Plus (TaKaRa Bio, Shiga, Japan) extrahiert. cDNA wurde aus 400 ng Gesamt-RNA unter Verwendung des PrimeScript RT-Reagenzienkits (TaKaRa Bio, Otsu, Japan) gemäß den Anweisungen des Herstellers synthetisiert. Ein Zehntel der erhaltenen cDNA wurde für ein Endvolumen von 20 &mgr;l für jede Reaktion hinzugefügt, die SYBR Green I (TaKaRa Bio, Shiga, Japan) enthielt. Die Primer für MMP-2, -8 und -9 waren wie folgt (Sense/Antisense):

MMP-2: 5'-ATC CTG GCT TTC CCA AGC TC-3'/3'-CAC CCT TGA AGA AGT AGC TGT G-5'. MMP-8:5'-CTGTTGAAGGCCTAGAGCTGCTGCTCC3'/5'CATCTTCTTTCAAACTCTACCC-3'. MMP-9: 5'-GGG CTT AGA TCA TTC CTC AGT G-3'/3'-GCC ATT CAC GTC GTC CTT AT-5'. (ref) Die Reaktionen wurden auf einem ABI Step One Real-Time PCR-System (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) mit dem folgenden Programm durchgeführt: 45 Zyklen von 95 °C für 10 s, 60 °C für 15 s und 72 °C für 20 s. Für relative Vergleiche jedes Gens analysierten die Forscher den Schwellenzyklus (Ct)-Wert der Echtzeit-PCR-Daten unter Verwendung der 2-ΔΔCt-Methode.20 Die PCR-Produkte wurden auf einem 1,5 % Agarosegel analysiert, das 1 pg/ml Ethidiumbromid enthielt, das an Nukleinsäuren bindet, wodurch die PCR-Produkte unter UV-Licht sichtbar gemacht werden können. Das Gel wurde photographiert, um die Quantifizierung der Produkte wie nachstehend beschrieben zu ermöglichen. Nach Auffinden des linearen Anteils für jeden Primersatz zur Quantifizierung der Produkte quantifizierten die Forscher die Produkte mit einem Bildverarbeitungs- und Analyseprogramm (ScionImage PC, Scion Corporation, Frederick, MD, USA), um die Expression von MMP-2 zu analysieren. -8 und -9. (ref) Statistische Analyse Die statistische Analyse wurde unter Verwendung von SPSS für Windows Version 25.0 (SPSS, Chicago, IL, USA) durchgeführt. Ein p-Wert von < 0,05 wurde als statistisch signifikant angesehen.

Die Daten wurden unter Verwendung eines Fisher-Exakt-Tests zusätzlich zu Chi-Quadrat-Tests analysiert, um jeweils Vergleiche zwischen und innerhalb der Gruppen durchzuführen.

Der Fisher's Exact Test wurde zum Testen der Niveaus der MMP-2, -8, -9-Expression zwischen den reversiblen und irreversiblen Pulpitis-Gruppen verwendet.

Der klinische und röntgenologische Erfolg von MTA- und Biodentin-Materialien nach 6, 12 und 18 Monaten wurde mit dem Chi-Quadrat-Test getestet.

Der Mann-Whitney-U-Test wurde beim Vergleich der MMP-2-, -8-, -9-Ausdrücke zwischen erfolgreichen und fehlgeschlagenen Pulpotomiegruppen verwendet.