腹腔内カンジダ症におけるカンジダの早期発見 (ICCA)
ICCA 研究 (腹腔内カンジダ症におけるカンジダの早期発見)
腹腔内カンジダ症は、死亡率が最大 60% の重症患者における侵襲性カンジダ症の最初の原因です。 この高い死亡率は、部分的に抗真菌治療の投与の遅れに関連しています。 この分野の専門家によると、現在の戦略には感度と特異性の両方が欠けているため、腹腔内感染でカンジダを迅速に検出する新しい診断方法が必須です。
カルスクリーナー (SYMCEL®) は、微量代謝活性の検出に基づいて生体サンプル中の病原体の存在を迅速に特定するための新しい診断ツールです。
ICCA プロジェクトは、既存の生物学的腹水コレクションに対するカルスクリーナーの実現可能性、精度、および診断性能をテストします。 このコレクションは、腹部手術を必要とする腹腔内感染症の重症患者のコホートからのものです。 腹腔内感染症には、細菌性腹膜炎と腹腔内カンジダ症があります。 病原体（細菌および酵母）の存在はすでに知られており、腹水は定期的な分析（細菌学/真菌学）後に保存されています。
このプロジェクトでは、酵母の検出/識別のみを調査します。
調査の概要
詳細な説明
腹腔内カンジダ症感染症患者の高い死亡率は、抗真菌治療の遅れに部分的に関連しています。 カンジダ検出のゴールド スタンダードな方法は、応答時間の遅延 (最大 5 日) に苦しむ真菌培地での酵母培養のままです。
したがって、通常の診療では、抗真菌治療を開始するかどうかの決定は、腹膜炎スコアなどの予測スコアに基づいています。 スコアがどうであれ、それらはすべて感度と特異性の欠如に悩まされており、ICU 患者を治療の遅れにさらし、死亡率に悪影響を及ぼす可能性があります。 導入後、培養結果が得られる前に、1,3 ベータ D グルカン < 80 pg/ml の 2 つの血清測定値に基づいて、抗真菌剤を停止できます。 この戦略により、抗真菌スペアが可能になります。 したがって、抗真菌剤の正しい選択のためのカンジダの早期検出と同定に関しては、改善の余地があります。
カルスクリーナー (SYMCEL®) は、微量代謝活性の検出に基づいて生体サンプル中の病原体の存在を迅速に特定するための新しい診断ツールです。 代謝活性は、今後のポジティブカルチャーを先取りします。 今日まで、calscreenerTM を用いた実験のほとんどはバクテリアに関係しています。 開発段階では、主に in vitro でカンジダを使ったいくつかの実験が行われました。 腹水などの臨床サンプルの実現可能性に関するデータは不足しています。 その上、現在、アルビカン種と非アルビカン種の両方で、カンジダの代謝プロファイルに関するライブラリはありません。 全体として、その日常的な使用は現在不可能です。
カンジダの既知の存在を伴う腹水における代謝活性検出の最初の結果 (私たちのチームからの未発表データ) は、検出時間 < 1 時間を示しました。 進行中のコホート研究で収集された生物学的サンプルを使用して、これらの有望な結果を確認することを目指しています。 ライブラリを構成するために、最初に異なるカンジダ種の代謝活性曲線を記述する必要があります。
研究の種類
入学 (実際)
連絡先と場所
研究場所
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Vandoeuvre les Nancy、フランス、54500
- Central Hospital
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参加基準
適格基準
就学可能な年齢
- 子
- 大人
- 高齢者
健康ボランティアの受け入れ
サンプリング方法
調査対象母集団
本研究では、pBDG2研究からの腹水の問題の生物学的コレクションから発行された臨床サンプルが使用されます。 各サンプルのカンジダの存在は、定期的な分析のおかげで知られています。 p BDG 2 研究はすでに募集中であるため、センター「NANCY」からの最初の 100 人の患者のみが ICCA STUDY で調査されます。
カルスクリーナーで得られた結果は、酵母培養によって得られた結果と比較され、アルビカンおよび非アルビカン種に関係なくカンジダの検出が確認されます。
最後に、カルスクリーナーによる検出の遅延を、酵母培養の増殖遅延と比較します。
説明
基準は pBDG2 研究 (重症患者における腹腔内カンジダ症の診断のための腹膜 1,3-β-D-グルカン) に属します。
包含基準:
- アダルト
- 健康保険適用
- 腹部手術または経皮ドレナージを必要とする腹腔内感染症でICUに入院
除外基準:
- 妊娠中または授乳中の女性
- 判決の執行後に自由を奪われた患者
- 精神科治療中の患者
研究計画
研究はどのように設計されていますか？
デザインの詳細
- 観測モデル：コホート
- 時間の展望：回顧
コホートと介入
グループ/コホート |
介入・治療 |
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腹腔内感染症の重症成人患者
ICCA 研究は、非介入前向きコホート研究 (pBDG2 研究、NCT03997929) の補助研究です。pBDG 2 研究は、腹部手術を必要とする腹腔内感染症の ICU 患者を登録しました。 手術中に、関与する病原体を特定し、抗感染療法を導くために腹水が収集されました。 定期的な分析の後、残りの腹水を保存して生物学的コレクションを作成しました。 バクテリアと酵母の含有量がわかっているこの生物学的コレクションは、カルスクリーナーで分析されます。 |
カルスクリーナー (SYMCEL®) は、微量代謝活性の検出に基づいて生体サンプル中の病原体の存在を迅速に特定するための新しい診断ツールです。
すべての生きている細胞は、生命の化学的および物理的プロセスによって熱を生成します。経時的な熱流 (J/s、W) を監視することにより、生物系に関するかなりの量の情報を得ることができます。
cal スクリーナーを使用すると、サンプル (ここでは腹膜液) から直接病原体の代謝活性を測定できます。 細菌の添加の有無にかかわらず、腹膜液の熱産生が比較されます。
代謝活動、増殖、酵母から菌糸への移行を説明するために、光学顕微鏡と従来の培養を使用して分析します。
代謝活性を説明するために、5 つのカンジダ アルビカンス病原性遺伝子 (UME6、ALS3、SFL2、HWP1、および ECE1) の発現レベルに注目し、腹水間で比較します。
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この研究は何を測定していますか？
主要な結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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腹腔液中のカンジダの存在の検出 (はい/いいえ)
時間枠：1日目～3日目
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カルスクリーナーによる検出 : 代謝活性の検出 > 5 µW (SYMCEL 推奨による)
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1日目～3日目
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二次結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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検出の遅延 (時間単位)
時間枠：1日目～3日目
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カルスクリーナー分析の開始から最初の熱流検出までの遅延 (時間単位) > 5 µW
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1日目～3日目
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その他の成果指標
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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熱発生量（ジュール）
時間枠：1日目～3日目
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腹膜液と細菌の有無による熱産生
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1日目～3日目
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カンジダの形態
時間枠：1日目
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C. albicans SC5314 株を、1 mL の異なる腹膜液および対照培地 (サブローおよび腹水) に 0.3 nm の光学密度 (OD) で 3 回接種します。これは C. albicans の約 3.10^6 個のコロニーに相当します。 . 1 ミリリットルあたりのアルビカンス (C. アルビカンス/mL) の培地。 汚染がないことを確認するために、C. albicans を含まない培地のみを含む対照ウェルも同じ 24 ウェル プレートに含めました。 24 ウェル プレートに接種し、37℃、300 RPM で振盪しながら 24 時間インキュベートします。 C. albicans (酵母または偽菌糸または菌糸) の形態を光学顕微鏡で最初の 8 時間は 1 時間ごとに観察し、その後 H16 および H24 で観察しました。 |
1日目
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カンジダの増殖
時間枠：1日目
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C. albicans SC5314 株を、1 mL の異なる腹膜液および対照培地 (サブローおよび腹水) に 0.3 nm の光学密度 (OD) で 3 回接種します。これは C. albicans の約 3.10^6 個のコロニーに相当します。 . 1 ミリリットルあたりのアルビカンス (C. アルビカンス/mL) の培地。 汚染がないことを確認するために、C. albicans を含まない培地のみを含む対照ウェルも同じ 24 ウェル プレートに含めました。 24 ウェル プレートに接種し、37℃、300 RPM で振盪しながら 24 時間インキュベートします。 C.アルビカンスの増殖は、各ウェルから10μLをSBDデキストロース寒天上に接種することによって評価し、37℃で24時間インキュベートした後、コロニーを計数した。 計数を容易にするために、接種した各ウェルの 1000 倍希釈液を事前に調製しました。 |
1日目
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カンジダ病原性遺伝子の発現
時間枠：1日目
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異なる培地でのC. albicansの接種は、遺伝子発現分析前に24時間の一晩培養するという、表現型の評価と同じプロトコールに従いました。
対象となる 5 つの病原性遺伝子は、UME6、ALS3、SFL2、HWP1、および ECE1 です。
24 時間の一晩培養後、サンプルを遠心分離して細胞ペレットのみを保持します。
次いで、細胞ペレットを１０ｍＬのリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で２回洗浄した。
続いて、ＰＢＳを除去し、細胞ペレットのみを残した。
RNA 抽出は、FASTPREP® 溶解テクノロジーを使用して実行されます。
逆転写は、Ｑｉａｇｅｎ（登録商標）（米国メリーランド州ジャーマンタウン）のＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ逆転写キットを製造業者の指示に従って使用して実施する。
qPCR は、CFX96 リアルタイム PCR システム (Bio-Rad、マルヌ ラ コケット、フランス) を使用して、MicroAmp 光学 96 ウェル反応プレート (Applied Biosystems) で実行されました。
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1日目
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協力者と研究者
協力者
研究記録日
主要日程の研究
研究開始 (実際)
一次修了 (実際)
研究の完了 (実際)
試験登録日
最初に提出
QC基準を満たした最初の提出物
最初の投稿 (実際)
学習記録の更新
投稿された最後の更新 (実際)
QC基準を満たした最後の更新が送信されました
最終確認日
詳しくは
本研究に関する用語
その他の研究ID番号
- 2021PI051
個々の参加者データ (IPD) の計画
個々の参加者データ (IPD) を共有する予定はありますか?
医薬品およびデバイス情報、研究文書
米国FDA規制医薬品の研究
米国FDA規制機器製品の研究
米国で製造され、米国から輸出された製品。
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